神经细胞迁移的分子生物学研究

神经细胞迁移的分子机理是需要神经生物学、发育生物学、细胞生物学和分子生物学等多学科综合研究的一个有趣的问题。自 1888年以来的大量研究表明 ,在胚胎发育期间和出生后 ,包括人在内的哺乳动物神经系统的大部分 (如果不是所有 )神经细胞都要经过迁移。我们在分子水平对细胞迁移的导向性问题进行了研究 ,我们在 1999年发表的结果给出这样一个答案 :脑内存在导向性分子 ,可以指导神经细胞的迁移方向 ;具体的发现是 ,一个叫Ｓｌｉｔ的分泌性蛋白质 ,对神经细胞有排斥性作用 ,从而指导神经细胞迁移的方向。这里我们概述这项研究的背景、结果…     

不同厂家复方丹参片中丹酚酸B的含量比较

复方丹参片是治疗心血管疾病的常用药物,其中丹参为君药,在药物质量控制中一般采用其中的脂溶性成分丹参酮IIA作为指标成分,现代研究表明,丹参中的水溶性成分为主要药效组份,而其中丹酚酸B(Lithospermic B)有强烈的抗氧化和清除氧自由基的活性作用,其抗脂质过氧化作用约为维生素E的1 000倍,对肾功能不全和肝损伤均有一定保护作用[1,2],为丹参中水溶性特征指标成分。本论文根据丹酚酸B的化学特性,采用HPLC方法建立了复方丹参片中丹酚酸B的含量测定方法,并对目前市场多个不同厂家生产的复方丹参片中丹酚酸B的含量进行了检测,为进一步考…     

近红外光谱法快速测定六味地黄丸中马钱苷

目的利用近红外光谱(NIRS)法快速测定不同厂家浓缩六味地黄丸中马钱苷。方法利用HPLC法测定六味地黄丸中马钱苷,运用偏最小二乘法建立NIRS与HPLC测定值之间的多元校正模型。结果马钱苷定量校正模型的内部交叉验证均方差RMSECV为0.049 3,决定系数R2为96.62,对预测集进行预测,预测值与真实值的相关系数r2=97.17,预测均方差RMSEP为0.038 9,方法精密度RSD为1.99%,稳定性RSD为1.13%。结论 NIRS法可准确测定马钱苷,为中成药的快速、无损定量分析提供了依据。     

HPLC法测定六味地黄片中马钱苷和丹皮酚

目的建立六味地黄片中马钱苷、丹皮酚的测定方法。方法采用高效液相色谱法同时测定六味地黄片中马钱苷、丹皮酚。色谱条件:HypersilODS2C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇-水梯度洗脱;检测波长:238nm。结果马钱苷和丹皮酚的线性范围分别为2.47～988.80μg(r=0.9997)、1.58～633.60μg(r=0.9999),平均回收率分别为100.2%(RSD为2.40%,n=6)、99.80%(RSD为1.56%,n=6)。结论该方法操作简便、准确,重现性好,有利于提高六味地黄片制剂的质量控制水平。     

清开灵注射液多环节阻抑脑缺血级联反应药效物质与作用机理研究

围绕表征方剂复杂物质、多层次评价生物活性成分、分析方剂与机体环境的相互作用三个相互衔接的关键环节,以清开灵解毒通络、开窍醒神功效与中风病"毒损脑络"病机相关,病症结合,方证对应,化学和药理研究密切结合,开展多环节阻抑脑缺血级联反应的药效物质及配伍原理研究.研究表明,清开灵药效物质包括8类45种主要有机成分和12种无机元素,胆酸、黄芩苷、栀子和珍珠母为主要有效部分.进而优化了有效组分阻抑脑缺血级联反应的配比关系;建立了方剂配伍过程多层次指纹图谱特征信息变化和多波长多指标成分指纹图谱的测定与评价方法;发现清开灵阻抑脑缺血级联反应的作用,以缺血启动的炎症病理过程为核心,涉及脑微灌流恶性循环损害及神经细胞损害的多个环节,胆酸、黄芩苷、栀子有效组分和珍珠母有各自相对集中的作用靶点,配伍的整合调节包括多靶点效应、组分相互作用及作用环节关联的时序效应三个作用方式;指纹图谱的特征信息结合药理结果得到的新型组方的物质成分较原方更加清楚,保留并加强了原有主要特征信息;脑脊液、血浆、血清有效组分体内过程分析,以及多环节指标的组分药理学解释,可为方剂中君臣佐使配伍的中医理论内涵提供佐证.表明从多环节病理过程设计靶点进行有效组分筛选与组成新方方法可行,由此建立的多层次指纹图谱与病理多环节药效分析相结合的方法,可成为现代复方中药创制和二次开发的理论模式和技术支持,并为中风病及严重炎症损伤类疾病的新药创制提供理论基础.     

内标多控法测定枳实中黄酮类成分及其不确定度评定研究

目的 建立HPLC内标多控法测定枳实药材中黄酮类成分的方法,并对测定结果进行不确定度评定。方法 以柚皮苷为内标,建立柚皮苷与橙皮苷、新橙皮苷的相对校正因子,计算枳实中黄酮类成分的含量,再根据数学模型,对测定过程中引入的不确定度进行评估,由此计算测定结果不确定度。结果 采用本方法测定枳实中柚皮苷与橙皮苷、新橙皮苷含量的扩展不确定度分别为W×2.94%、W×3.49%、W×3.34%。结论 建立的不确定度评定法可为内标多控法测定中药有效成分的不确定度分析提供参考。     

基于化学模式识别和网络药理学的六味地黄丸中标志物的预测

目的基于化学模式识别和网络药理学预测不同剂型六味地黄丸潜在的质量标志物以及差异标志物的作 用机制。方法以六味地黄丸不同剂型中10 个已明确化学结构的共有成分的量作为考察指标,采用超高效液 相色谱-三重四极杆串联质谱（UPLC-QqQ-MS）法同时测定,色谱柱为AtlantisTM Premier BEH C18（2.1 mm× 100 mm,2.5 μm）;流动相为乙腈+0.01%氨水（A）-0.01%氨水溶液（B）,梯度洗脱;流速：0.2 mL·min-1; 柱温：35 ℃;进样量：5 μL;正负离子模式下测定。用聚类分析（CA）、主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘- 判别分析（OPLS-DA）方法综合评价和比较浓缩丸和水蜜丸制剂的质量差异。进一步通过网络药理学分析显著 差异成分相关的作用靶蛋白和通路,采用免疫组化法对富集的作用通路中一氧化氮合酶（iNOS）靶蛋白进行验 证。结果浓缩丸和水蜜丸的成分含量存在差异,CA、PCA 以及OPLS-DA 3 种分析方法均可对不同剂型进行 划分,并确定了其中6 个具有差异的化学成分为差异标志物,4 个无差异化学成分为潜在的质量标志物;网络 药理学分析结果表明,6 个差异标志物可能通过缺氧诱导因子1（HIF-1）信号通路发挥差异性疗效;动物实验 表明,与模型组比较,六味地黄丸各组iNOS 表达量降低,具有显著性差异（P＜0.05）。结论六味地黄丸浓缩 丸和水蜜丸之间存在一定的内在质量差异,5-羟甲基糠醛、地黄苷D、苯甲酰芍药苷可作为不同剂型间的潜在 质量标志物,马钱苷、獐芽菜苷、23-乙酰泽泻醇B、丹皮酚、莫诺苷、没食子酸可作为不同剂型间的差异标 志物。     

人类软骨糖蛋白－39对成人膝关节软骨祖母细胞增殖的影响

目的：观察人类软骨糖蛋白－39（ HCgp－39）对成人膝关节软骨祖母细胞增殖的影响。方法取正常及OA关节软骨标本,向分离培养所得的软骨祖母细胞中分别加入0、25、50、100、500 ng／mL的HCgp－39。收集培养0、24、48、72 h的细胞,加入10μL的MTS检测液,酶标仪检测各孔光的吸收值（ OD值）,比较各组细胞对HCgp－39的敏感性。结果 OA组：48 h时加入25、50、100、500 ng／mL组的OD值分别为0．81±0．01、0．88±0．02、0．93±0．01、1．03±0．04;72 h分别为1．02±0．05、1．12±0．01、1．21±0．01、1．28±0．01;与未加入HCgp－39组比较均有统计学差异（P＜0．05或＜0．01）;正常软骨组：48 h时加入25、50、100、500 ng／mL组的OD值分别为0．67±0．01、0．63±0．01、0．61±0．01、0．58±0．01;72 h分别为1．18±0．02、1．1±0、1．08±0．01、0．97±0．02;与未加入HCgp－39比较均有统计学差异（P＜0．05或＜0．01）。结论在成人的关节软骨中存在软骨祖母细胞;HCgp－39能够促进关节软骨中软骨祖母细胞的增殖。