几种肝脏疾病血清中糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D的活性改变

目的：观测几种肝脏疾病患者血清中糖基化磷脂酸肌醇特异性磷脂酶D（GPI－PLD）的活性改变。方法：利用自制的具完整糖基化磷脂酰肌醇（GPI）结构的胎盘型碱性磷酸酶（PLAP）做底物,通过TX－114分相,定量测定血清GPI－PLD的活性,用SPSS10．0统计软件分析资料。结果：检测172例肝脏疾病患者（包括A组：26例急性重症病毒性肝炎,B组：29例肝硬化;C组：32例慢性病毒性肝炎;D组：55例急性非重症病毒性肝炎;E组：30例原发性肝癌）血清中GPI－PLD的活性（转化底物的百分率）,发现A,B两组患者的该酶活性较正常人（182名）显著性降低,而D,E两组则较正常人显著性增高,C组患者的酶活性与正常人无显著性差异,但A,B,C,D,E两组之间的酶活性水平改变却均有显著性,结论：检测患者血清GPI－PLD活性水平,既可作为临床诊断急性病毒性肝炎,肝硬化,原发性肝癌等肝脏疾病的一项生人指标,也可作为这些疾病临床疗效和预后的一项判断指标。     

正常人与系统性红斑狼疮患者白细胞GPI-PLD基因多态性分析

目的检测湖南地区汉族系统性红斑狼疮(systemic lupus erydaematosus，SLE)患者外周血白细胞糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(glycosylpllosplhaftdylinositol-specific phospholipase D，GPI-PLD)基因外显子1及外显子25多态性、白细胞GPI-PLD活性及二者关系。方法聚合酶链式反应与单链构象多态性分析(PCR-SSCP)、测序技术进行多态性分析，利用自制具完整糖基化磷脂酰肌醇(GPI)结构的胎盘碱性磷酸酶(PLAP)做底物通过TX-114分相，定量检测白细胞中GPI-PLD活性。结果 湖南地区汉族62名SLE患者与109名正常人外周血白细胞GPI-PLD基因外显子1区均存在14处核苷酸改变：转录起始点上游-28A→C、-21C→T、-14G→A、-13G→C、-9T→C、-8G→C、-7G→C、 4T→G、密码子14TTG→AAG（Leu14Lys)、密码子17CTC→GTC（Leu17Val)、密码子20AGA→AAA(Arg20Lys)、密码子21GGT→GGG(Gly21Gly)、密码子30GTA→ATA(Val30lle)；另转录起始点上游-24C→T仅存在于SLE人群中，此变异在两组人群中具有显著性差异；该基因外显子25，即 60496G→A均存在于两组人群中。经SSCP检出阳性率分别为正常人33．03％，SLE患者25．81％。检测62例SLE患者外周血白细胞GPI-PLD活性(转化底物百分率)，发现SLE患者酶活性较正常人(109名)显著性增高，但与多态性位点未见明显相关性。结论湖南地区汉族系统性红斑狼疮患者与正常人外周血白细胞GPI-PLD基因具有多态性，且位于转录起始点上游-24位变异在两组人群中有显著性差异；SLE患者白细胞CPI-PLD酶活性较正常人明显增高。     

人糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D的基因结构初探

探讨人糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D (GPI PLD)的cDNA及其基因组基因的结构。从人骨髓基质细胞克隆出的GPI PLDcDNA中发现 ,它能编码信号肽 ,其编码的酶蛋白成熟肽为 817个氨基酸残基。该GPI PLDcDNA与从人肝组织和胰腺组织克隆到的GPI PLDcDNA的碱基序列的同源性分别为 95 %和 99%。人GPI PLD基因组基因定位于 6p2 2 .1～ 2 2 .3区域 ,包含 2 5个外显子 ,其上游调控区具有启动子 (TATA盒与CAAT盒 )、增强子核心序列 (TGGAAG)及同源转换盒Pit 1/GHF 1结合序列 (TATGCATAA)等顺式作用元件。     

糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D的研究进展

羧基端结合有糖基化磷脂酰肌醇 (GPI)结构的膜蛋白 ,称为 GPI锚定蛋白 ;此后不久又鉴定出一种 GPI锚定蛋白专一性的磷脂酶 D(GPI- PL D)。 GPI- PL D能特异性地水解 GPI、释放出锚定蛋白并调节锚定蛋白的表达和生物功能等。本文概述了近年来有关 GPI- PL D的研究状况 ,包括它的组织和器官来源、生理功能、病理条件下的活性改变、分子结构以及 c DNA克隆等     

竞争性RT-PCR法定量检测糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D基因的表达

目的 :建立一种定量检测糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPI PLD)基因表达水平的竞争性RT PCR方法 ,以研究GPI PLD与白血病等疾病的关系。方法 :首先用PCR定点诱变法构建GPI PLD的竞争性cDNA模板 ,该模板与靶cDNA具有相同的引物结合区 ,但在长度上要比靶cDNA少 2 0个碱基。把该竞争性cD NA模板在体外转录出的竞争性RNA作为RT PCR的内标准 ,与白血病细胞株K5 6 2细胞的总RNA在同一体系内进行逆转录和PCR扩增 ,二者的PCR产物因长度不同可经电泳区分开 ,然后对电泳图像进行光密度扫描 ,根据已知的竞争性RNA模板的量计算出GPI PLDmRNA的量 ,从而得到GPI PLD基因的绝对表达量。结果 :构建和制备了长度为 198bp的GPI PLD竞争性RNA模板 ,该模板与靶模板呈明显的竞争性RT PCR反应 ;测得K5 6 2细胞GPI PLD基因的表达水平为每纳克 (44 0± 2 0 )拷贝。结论 :成功地建立了一种定量检测GPI PLD基因表达水平的竞争性RT PCR方法 ,该方法具有灵敏、准确等优点。     

人糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D的基因结构初探

探讨人糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D（GPI-PLD）的cDNA及其基因组基因的结构。从人骨髓基质细胞克隆出的GPI-PLD cDNA中发现,它能编码信号肽,其编码的酶蛋白成熟肽为817个氨基酸残基。该GPI-PLD cDNA与从人肝组织和胰腺组织克隆到的GPI-PLD cDNA的碱基序列的同源性分别为95%和99%。人GPI-PLD基因组基因定位于6p22.2-22.3区域,包含25个外显子,其上游调控区具有启动子（TATA盒与CAAT盒）、增强子核心序列（TGGAAG）及同源转换盒Pit-1/GHF-1结合序列（TATGCATAA）等顺式作用元件。     

正常人与白血病患者GPI-PLD基因外显子1多态性分析

现已发现1 5 0余种蛋白质通过糖基化磷脂酰肌醇(GPI)锚定于细胞表面,包括细胞黏附分子、淋巴细胞分化抗原、肿瘤标志物等。人类造血细胞膜上的分化抗原(CD)约1 0 %是GPI锚定蛋白[1 ] ,对造血细胞的生成、分化、成熟等起着重要作用。人体中能水解GPI、释放锚定蛋白的酶只有GPI特异性磷脂酶D(GPI PLD)。不同病理状态下人血浆中GPI PLD活性改变不同[2 ] 。为探讨白血病患者外周血有核细胞GPI PLD基因是否存在单核苷酸多态性(SNP)及GPI PLD活性水平,我们对湖南地区白血病患者与正常人GPI PLD基因外显子1多态性分布情况及外…