卡氏肺孢子虫病的实验诊断研究现状

卡氏肺孢子虫 (Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓｃａｒｉｎｉｉ,ＰＣ)是一种机会致病寄生虫 ,可引起严重的卡氏肺孢子虫肺炎(Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓｃａｒｉｎｉｉｐｎｅｕｍｏｎｉａ ,ＰＣＰ) ,主要发生于获得性免疫缺陷综合征、肿瘤化疗及器官移植术后等免疫力低下的病人 ,是此类病人的主要并发症和重要致死病因 ,因此ＰＣＰ的早期诊断显得尤为重要。但目前采用的诊断方法各有利弊 ,本文就其实验诊断现状展开综述。1　动物模型的研究1.1　动物模型的建立　卡氏肺孢子虫体外培养技术已有报道 ,但结果并不理想。迄今为止动物模型仍然是人们常用…     

刚地弓形虫RH株速殖子外泌体的分离与鉴定

目的: 分离与鉴定刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）RH株速殖子外泌体。方法: 收集弓形虫速殖子与人结肠癌SW480细胞共培养上清液,经离心、过滤,采用基于聚合物沉淀技术的试剂盒法分离外泌体;透射电镜观察外泌体形态特征,纳米颗粒跟踪分析（nanoparticle tracking analysis,NTA）检测外泌体粒径大小,蛋白质印迹法检测外泌体经典标志分子CD63、HSP70以及弓形虫特异蛋白表面抗原1（surface antigen 1,SAG1）、棒状体蛋白16（rhoptry protein 16,ROP16）、ROP18和致密颗粒蛋白1（dense granule protein 1,GRA1）。结果： 从弓形虫与细胞共培养上清液中分离出囊泡样物质,其外形为圆形,有完整的膜结构,直径为30~150 nm;表达外泌体特异性蛋白CD63、HSP70;检测出弓形虫特异性蛋白SAG1、ROP16、ROP18和GRA1。结论： 从弓形虫速殖子与SW480细胞共培养上清液中获得弓形虫外泌体。     

SPA—ELISA一步法检测囊虫病患者血清特异性抗体的研究

用ＳＰＡ－ＥＬＩＳＡ一步法检测了囊虫患者血清特异性抗体，并与快速ＳＡＰ－ＥＬＩＳＡ进行对比。两法同时检测了５９例囊虫病患者，３６例囊虫病病人和３０例正常人血清。结果表明：ＳＡＰ－ＥＬＩＳＡ一步法和快速ＳＰＡ－ＥＬＩＳＡ的阳性率分别为９４．９１％和９８．３１％，几何平均滴度分别为１：４２５．８９和１：５６５．７２，均无显著性差异。对１例肝吸虫病和１例包虫病人血清均起交叉反应。说明ＳＰＡ－ＥＬＩＳＡ一     

银杏外种皮提取物杀灭钉螺的初步研究

目的：比较银杏外种皮的石油醚提取物与水提物对钉螺的杀灭作用。方法：采用超声萃取和热水浴凹流的方法分别制得银杏外种皮石油醚提取物和水提物浸膏,再用去氯水分别制成不同浓度的药液,采用浸泡法杀灭钉螺,并定时观察灭螺效果。结果：两种提取物的药液均有杀灭钉螺的作用,其中石油醚提取物的杀螺效果尤佳,其浓度为0.125g／L浸泡24h时,钉螺死亡率达100％。结论：用银杏外种皮提取物制备的生药剂杀灭钉螺效果良好,是一种很有开发前景的植物杀螺剂。     

安氏隐孢子虫在HCT-8和AGS细胞中增殖效果的研究

目的比较安氏隐孢子虫（Cryptosporidium andersoni）在人结肠腺癌（human ileocecal adenocarcinoma,HCT-8）细胞和人胃腺癌（humanstomachadenocarcinoma,AGS）细胞中的增殖。方法取培养至对数生长期的HCT-8细胞和AGS细胞,接种于6孔培养板中,待细胞生长融合至60％～70％时,加入2．5×10^5个安氏隐孢子虫卵囊,培养至24h和48h,以Giemsa染色法和Real—time PCR技术检测虫体在细胞中的增殖。结果Giemsa染色法观察24h和48h HCT-8细胞中虫体数量均高于ACTS细胞（P〈0.05）。Real—time PCR技术测得24h和48h HCT-8细胞中安氏隐孢子虫卵囊COWP基因拷贝数均高于AGS细胞（P〈0.05）。结论与AGS细胞相比,以HCT-8细胞作为体外感染模型更利于安氏隐孢子虫的增殖。     

日本血吸虫6种粗抗原和组分抗原的比较

目的 比较日本血吸虫6种抗原（粗抗原及其组分抗原各3种）的敏感性和特异性。方法①用阳性钉螺逸出的尾蚴感染新西兰家兔，制作日本血吸虫病动物模型。②于感染后42天分别收集雌、雄成虫和虫卵，制作粗抗原及其组分抗原。③采用ELISA法检测抗原的敏感性和特异性,并以X^2检验作统计学处理和分析。结果除雌虫组分抗原的敏感性（51％）较差外,都显示出日本血吸虫成虫及其虫卵组分抗原的较好敏感性和特异性。结论日本血吸虫组分抗原用于免疫诊断．具有较好的敏感性和特异性。但抗原分离、纯化方法有待进一步探讨。     

超鞭毛虫支气管肺感染1例

超鞭毛虫（Hypermastiote）属于原生动物门，鞭毛虫纲，动鞭亚纲，是白蚁、蠊及一些以木质为食的昆虫消化道内共生的鞭毛虫。如寄生在白蚁肠道中的披发虫（Trichonympha）、寄生于蠊肠道内的缨滴虫（Lophomonas）。在人体内较少见，国内报道甚少，2006以来有上升趋势。为提高对超鞭毛虫感染人体的诊断及治疗，现对我院发现的1例超鞭毛虫感染支气管肺部患者的临床表现和实验室资料进行分析，报道如下。     

隐孢子虫病常用病原学诊断方法的探讨

隐孢子虫 (Cryptosporidium)是一种危害广泛的人兽共患寄生原虫。隐孢子虫病 (cryptosporidiosis)是由寄生于人或其他动物胃肠道和呼吸道的隐孢子虫所引起的 ,可造成哺乳动物尤其是反刍动物和人的严重腹泻[1] 。对于人体 ,隐孢子虫病已被列为世界最常见 6种腹泻病之一 ,在婴幼儿、营养不良者、器官移植者、化疗的癌症患者、长期住院治疗病人等免疫低下者和免疫缺陷患者中感染率高且危害严重 ,是公认的引起人类腹泻的重要原因 ,其引起的腹泻是艾滋病 (AIDS)患者主要死亡因素之一。我国首例病例是由韩范 1 987年在南京地区发现的[2 ] 。为进…     

果糖氨基酸氧化酶的原核表达及在糖化血红蛋白检测中的初步应用

摘要：目的：原核表达果糖氨基酸氧化酶（FAOX）,建立检测糖化血红蛋白A1c（HbA1c）的酶法并作初步评价。 方法：构建重组质粒pET32a(+)/FAOX,转化大肠埃希菌Rosetta(DE3),获得重组FAOX;以糖基化六肽为底物检测酶活性;初步建立检测HbA1c的酶法并进行方法学评价。 结果：重组FAOX在Rosetta(DE3)中高效表达,SDS-PAGE电泳分析显示其相对分子质量（Mr）约65 000;酶比活性为22 U/mg;建立的检测HbA1c酶法的批内、批间、日间CV均<5%;低值（5.1%）和高值（15.8%）HbA1c的回收率分别为98.1%和98.9%;总胆红素(＜220 μmol/L）、三酰甘油(＜10.8 mmol/L）和维生素C(＜500 mg/L）对酶法检测HbA1c无影响;与HPLC法和HA-8160型全自动糖化血红蛋白仪测定结果进行比较,相关系数分别为0.977和0.993。 结论：FAOX可在大肠埃希菌Rosetta(DE3)中高效表达,用其建立的检测HbA1c的酶法可满足临床对HbA1c测定的要求。     

8种旋毛虫随机扩增多态性DNA指纹图及其与异构酶分析结果的比较

文献已报道用异构酶、DNA分析及结合生物学研究等方法将旋毛虫属分为8种,即T_s、T_(ne)、T_(na)、T_(ps)、T_b及T_5、T_6、T_8。但以上鉴定技术需要培养许多活幼虫(历时40—50天),掌握特异的核苷酸序列的信息,并进行大量的数据分析,费时费力。为寻找一种简单、快速的鉴定方法。作者从保种的瑞士CD_1雌鼠及自然感染鼠的肌肉中取得40份旋毛虫分离物,在不同的PCR条件下用10或20