人源TRAIL胞外段基因的克隆、表达与功能的初步检测

目的 获得人源TRAIL胞外段结构域在大肠杆菌中可溶性表达，并初步鉴定其功能。方法 RT-PCR法从人外周血单个核细胞中扩增TRAIL胞外段基因，克隆入pGEM-T-Easy载体，DNA序列测定鉴定正确性。为了便于纯化目的蛋白，将其克隆入原核表达载体pET-30a，并在其氨基端加上组氨酸标签。采用E．coliBL21（DE3）表达，Ni亲和柱分离纯化目的蛋白。SDS-PAGE和Westernblot鉴定原核表达产物。MTT法、PI染色法及瑞氏．姬姆萨染色法观察TRAILHis蛋白的生物学活性。结果 所表达目的蛋白相对分子质量（Mr）与预期蛋白Mc相一致，该蛋白分别可以与抗TRAIL多克隆抗体及抗组氨酸标签抗体反应，并可抑制人淋巴瘤细胞系Jurkat细胞的增殖和诱导Jurkat细胞凋亡。结论 获得了具有生物学活性的TRAIL蛋白，为对其生物学功能及肿瘤治疗的进一步研究奠定了基础。     

DR5胞外段基因的表达及功能初步鉴定

目的：获得具有生物活性的人DR5胞外段蛋白。方法：通过RT-PCR从Jurkat细胞中钓取DR5的胞外段基因（55—183位氨基酸），克隆到pGEM-T Easy载体中，经核酸序列测定正确后，将其再次克隆入原核表达载体pET30a中，在Ecoli B121（DE3）实现蛋白表达。通过SDS—PAGE和Western blot鉴定表达产物。ELISA法分析其与抗DR5单克隆抗体（mAb）结合能力。结果：克隆到人DR5基因的胞外段基因，测序结果和报道的一致；构建了人DR5胞外段基因的原核表达载体并实现在E．coli B121（DE3）中大量表达；SDS—PAGE表明所表达蛋白与预期蛋白的相对分子质量（Mr）一致；Western blot及ELISA的结果表明该蛋白能与抗DR5抗体反应，竞争阻断试验表明DR5胞外段可阻断TRAIL对Jurkat细胞生长的抑制。结论：成功地制备了具有生物活性的DR5胞外区，为后续研究打下了基础。     

姑息治疗方案在高龄晚期胃肠道肿瘤患者中的疗效分析

目的探讨高龄晚期胃肠道肿瘤患者采用姑息治疗方案的临床价值。方法190例高龄晚期胃肠道肿瘤患者,根据随机数字法分为对照组和观察组,每组95例。对照组给予常规治疗,观察组在对照组基础上运用姑息治疗方案。比较两组的治疗效果、疼痛数字评分法(NRS)、卡式功能状态量表(KPS)评分及1、3、5年生存情况。结果治疗后,观察组的NRS评分(5.02±0.34)分低于对照组的(6.53±0.78)分,KPS评分(85.26±1.45)分高于对照组的(76.02±2.14)分,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组治疗总有效率61.05%高于对照组的41.05%,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组的1、3、5年生存率分别为56.84%、50.53%、34.74%,均高于对照组的37.89%、30.53%、17.89%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论临床上运用姑息治疗方案对高龄晚期胃肠道肿瘤患者进行治疗,不仅可以减轻患者疼痛,还能提高患者远期生存率。     

mDRA-6诱导Jurkat细胞凋亡的外源性机制

目的:探讨抗人死亡受体5(DR5)单克隆功能抗体(mDRA-6)对人白血病Jurkat细胞诱导凋亡的外源性机制。方法:用显微镜观察mDRA-6作用后的Jurkat细胞形态学变化,采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术定量分析技术对Jurkat细胞的凋亡进行定量分析;利用免疫印迹技术检测凋亡细胞的Caspase 10、Caspase 9、Caspase8、Caspase 7、Caspase 3等凋亡相关蛋白的表达及活化情况。结果:mDRA-6在5 mg/L浓度作用Jurkat细胞30min时就出现典型的细胞凋亡形态改变,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测显示,Jurkat细胞在30 min、60min1、20 min的凋亡率分别为30.20%、69.03%、79.55%。免疫印迹技术检测显示Caspase 9、Caspase 8、Caspase7、Caspase 3均呈现活化片断的表达,而Caspase 10无变化。结论:mDRA-6可通过细胞膜表面死亡受体信号传导途径诱导Jurkat细胞的凋亡,本研究为mDRA-6的人源化改造及后续的实验研究打下了基础。