环状RNA在白血病中的研究进展

白血病是一类造血干细胞的恶性克隆性疾病,其临床表型具有高度的异质性。环状RNA(circRNA)是一类与多种疾病,特别是癌症相关的新型非编码RNA(ncRNA)。研究表明,circRNA主要作为微小RNA(miRNA)的分子海绵参与白血病的发病机制,并且在白血病细胞的增殖、分化、凋亡及化疗药物耐药等方面中的作用正逐渐被人们所认识。本文对circRNA在白血病中的研究进展进行综述,从而提高人们对circRNA在白血病中作用的认识。     

急性淋巴细胞白血病患儿MTHFR C677T基因多态性与大剂量甲氨蝶呤治疗后肝功能异常的相关性

目的：探讨急性淋巴细胞白血病（ALL）患儿亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）C677T基因多态性与大剂量甲氨蝶呤（HD-MTX）治疗后肝功能异常的相关性。方法：收集2017年10月至2020年3月温州医科大学附属第二医院育英儿童医院66例ALL患儿HD-MTX治疗的临床资料,检测MTHFR C677T的基因多态性,根据基因型将患儿分为野生型（CC）和突变型（CT+TT）,比较2组患儿经HD-MTX治疗后不良反应的发生率、肝功能指标PA、ALT、AST、AST/ALT、TP、ALB、LDH、GGT、TBIL、CHE以及48 h、72 h血药浓度的差异。结果：MTHFR C677T突变型与野生型相比肝功能异常的发生率更高（P＜0.05）,其中血清AST、ALT、CHE含量异常的患儿比例显著升高（P＜0.05）,其他肝功能指标差异无统计学意义（P＞0.05）。进一步分析不同基因型患儿HD-MTX血药浓度的差异,结果显示与野生型相比,突变型48 h、72 h血药浓度均升高（P＜0.05）。结论：MTHFR C677T突变型患儿HD-MTX治疗后,血清AST、ALT、CHE含量异常的患儿比例较高,检测MTHFR C677T基因型对预测HD-MTX治疗后肝功能异常有一定的临床应用价值。     

荧光原位杂交技术和常规细胞学分析在骨髓异常增生综合征患者中的应用

目的探讨荧光原位杂交技术(FISH)和常规细胞学(CC)在骨髓异常增生综合征(MDS)患者中的应用。方法采用R显带技术对186例MDS患者进行CC分析,同时应用6组组合探针进行FISH检测,并采用统计学分析,比较2种方法的检出率。结果 186例MDS患者染色体核型异常检出率为33. 5%,而FISH异常检测率为41. 9%; CC分析联合FISH可以检测出46. 8%的异常检出率;采用修订版国际预后积分系统(IPSS-R)进行等级评分,FISH阳性率也明显高于CC,其中极高危组患者差异有统计学意义(χ2=4. 710,P 0. 05);在世界卫生组织(WHO)分型评分中,难治性贫血伴原始细胞增多-1(RAEB-1)组的FISH检测异常阳性率高于CC法,差异有统计学意义(χ2=4. 952,P 0. 05)。结论 FISH能有效提高MDS患者染色体的异常检出率,特别是针对核型分析失败及小克隆异常的患者,而CC联合FISH可以为MDS患者的诊断和预后分层提供重要依据。     

前列腺按摩后尿液DD3 mRNA的定量检测及临床应用评价

目的探讨前列腺按摩后尿液DD3（differential display code3，DD3）基因mRNA含量在前列腺癌诊断中应用价值。方法收集前列腺癌（PCa）患者21例、良性前列腺增生（BPH）40例，在前列腺穿刺活检前收集前列腺按摩后的尿液，离心取细胞沉淀物，用实时荧光定量RT-PCR方法检测DD3 mRNA和PSA mRNA含量。以DD3 mRNA／PSA mRNA比值表示尿液DD3 mRNA含量。用受试者工作曲线（ROC）评价尿DD3 mRNA对PCa的诊断价值。分析尿液DD3 mRNA阳性率与临床分期和病理分级的相关性。对DD3 mRNA PCR产物进行测序分析。结果DD3 mRNA PCR扩增产物经测序分析证实为DD3 mRNA特异度片段。PCa组尿液DD3 mRNA含量明显高于BPH组，差异具有统计学意义（P〈0．05）。尿液DD3 mRNA诊断PCa的ROC曲线下面积（AUC）为0．705（95％CI：0．578—0．832），以DD3 mRNA／PSA mRNA比值0．116为截断值时，其敏感度和特异度为66．7％和80，0％。尿液DD3 mRNA的阳性率与临床分期和病理分级无关。结论尿DD3 mRNA检测对前列腺癌诊断具有较高特异度和敏感度，作为Pca早期诊断指标具有良好的应用前景。     

受体酪氨酸激酶基因及其变异体在膀胱肿瘤组织中的表达及意义

目的 探讨RON mRNA及其变异体在膀胱肿瘤组织中的表达与临床意义。方法选择63例膀胱移行上皮癌(TCCB)、7例膀胱内翻性乳头状瘤(IPB)、9例膀胱低度恶性潜能尿路上皮瘤(PUNLMP)患者和12例外伤性膀胱破裂且经病理证实无肿瘤细胞的正常膀胱黏膜组织患者。其中,病理Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级患者分别为30、15和18例,临床Tis+ T1和T2 +T3 +T4期患者分别为44例和15例;用实时荧光定量RT-PCR检测其RON mRNA相对表达量,以GAPDH mRNA为内标物,用RONmRNA/GAPDH mRNA比值表示RON mRNA相对表达量;用RT-PCR检测RON mRNA选择性剪切形成的变异体;用测序检测PCR产物中可能存在的变异体,并分析变异体在不同组织间及TCCB中不同病理分级及临床分期间阳性表达率的差异。结果RON mRNA在TCCB、IPB、PUNLMP及正常膀胱黏膜组织中均见阳性表达,其RON mRNA/GAPDH mRNA比值分别为4.9×10-3(1.8×10-3 ～1.0× 10-2)、3.8×10-3（2.4×10-3～1.7×10-2）、4.9×10-3（1.7×10-3～1.1 ×10-2）、1.0×10-3(4.5×10-4 ～2.8×10-3),且不同组织间的表达差异均有统计学意义(x2K-W= 17.278,P＜0.05);RON mRNA/GAPDH mRNA比值在TCCB病理Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级分别为3.7×10-3(1.3×10-3 ～7.5×10-3)、4.9×10-3（1.9X10-3～1.1 ×10-2）、8.9×10-3(2.7×10-3～8.0×10-2),且差异有统计学意义(x2K-W=7.341,P＜0.05);RON mRNA/GAPDH mRNA比值在TCCB临床Tis+ T1、T2 +T3 +T4期分别为3.5×10-3（1.2×10-3 ～7.7×10-3）、9.7× 10-3（2.9×10-3～5.3 ×10-2）,差异也有统计学意义（Z= -2.306,P＜0.05）。但正常膀胱黏膜组未发现RON mRNA变异体,而在膀胱肿瘤组织中外显子11剪切缺失(E11△)的阳性表达率为70％( 55/79)。在TCCB、IPB、PUNLMP中E11△阳性表达率分别为71％ (45/63)、57％ (4/7)、67％ (6/9),而不同病理组织中的E11△阳性表达率差异无统计学意义(x2=0.620,P＞0.05);在不同TCCB病理分级和临床分期中其阳性率差异亦无统计学意义（Z值分别为0.221、0.538,P均＞0.05）。发现1种正常黏膜组织中没有的新变异体,即RON基因外显子的3 476～3 539 bp剪切缺失形成的变异体(E3 476 ～3 539△)。膀胱肿瘤组织中E3 476～3 539△的阳性表达率为56％ (44/79),在TCCB、IPB、PUNLMP中E 3 476 ～3 539△的阳性表达率分别为57％( 36/63)、43％ (3/7)、56％ (5/9),但各病理组织间的阳性率差异无统计学意义(x2=0.517,P＞0.05);在TCCB不同病理分级和临床分期中其阳性率分别为40％ (12/30)、67％ (10/15)、78％ (14/18)、48％(21/44)、80％ (12/15),差异有统计学意义（Z值分别为7.285、5.041,P均＜0.05）。结论 RONmRNA的表达与TCCB病理分级及临床分期相关,RON可能在TCCB发生发展的过程中发挥重要作用;在正常膀胱黏膜中未见RON mRNA剪切形成的变异体,而在膀胱肿瘤组织中都有不同程度的表达;E 3 476～3 539△的表达与TCCB病理分级及临床分期相关,RON mRNA变异体可能参与了膀胱肿瘤的发生。     

实时荧光RT-PCR定量检测前列腺癌组织中AMACR基因表达

目的 建立实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)检测AMACR mRNA的方法学并检测其在前列腺癌(PCa)组织中的表达.方法 在AMACR基因的2、3外显子之间设计一对引物及MGB探针,将PCR扩增产物与pMD18-T载体连接,构建重组质粒作为定量检测的标准品,建立实时荧光定量RT-PCR方法,然后对32例PCa、60例良性前列腺增生(BPH)及34例其它肿瘤组织进行AMACR mRNA的定量检测.结果 重组质粒经PCR扩增及序列测定,表明克隆成功,该方法灵敏度高,线性范围为5～5×108copies/reaction.AMACR mRNA在PCa组织中表达量显著高于BPH组织(P<0.01)及其他类型肿瘤组(P<0.01).ROC曲线分析结果显示,曲线下面积(AUC-ROC)为0.890,AMACR mRNA诊断前列腺癌的敏感度和特异度分别为81.3%和86.7%.PCa组织中AMACR mRNA表达量及检测阳性率与不同临床分期和病理分级之间的差异尚不具有统计学意义(P值均>0.05).结论 实时荧光定量RT-PCR检测AMACR mRNA的方法具有敏感、特异、准确、重复性好等特点.AMACR mRNA在前列腺组织中的表达对PCa的诊断具有一定的临床应用价值.     

TaqMan MGB双探针方法检测慢性乙型肝炎病毒YMDD变异的研究

目的探讨TaqMan MGB双探针方法检测慢性乙型肝炎病毒YMDD变异的可靠性。方法采用荧光定量PCR法检测HBV DNA含量,TaqMan MGB双探针方法和测序方法检测其YMDD变异,以测序方法为参考方法,评价TaqMan MGB双探针方法检测慢性乙型肝炎病毒YMDD变异的可靠性。结果246例HBV DNA阳性患者血清标本中,TaqMan MGB双探针方法阳性检出率为100%,100例正常对照全部为阴性;YMDD无突变106例,YMDD有突变(YIDD变异 YVDD变异)140例,与核酸测序方法比较,符合率为100%;该方法经过敏感度实验,最低检出下限为1×103拷贝/ml。结论TaqMan MGB双探针方法能便捷、灵敏、特异地检测YMDD基序变异情况,适用于临床检测慢性乙型肝炎患者拉米夫定治疗的YMDD基序变异。     

不同HPV亚型的多重感染和年龄因素与宫颈病变的关系

目的:探讨不同亚型人乳头状瘤病毒(human papillomavious,HPV)多重感染及年龄等因素与宫颈不同程度病变的关系。方法:采用核酸分子快速导流杂交基因微阵列分型检测技术对418例女性HPV感染者进行HPV分型检测,同时检测宫颈病变程度。结果:仅感染高危型HPV病毒(包括混合感染多种高危HPV病毒)的女性患者其宫颈癌、尖锐湿疣构成比与仅感染低危型HPV病毒(包括混合感染多种低危HPV病毒)组的相应构成比存在较大差异(χ2=41.81,P<0.001);感染多种高危(低危)HPV与感染单一高危(低危)HPV相比,不同宫颈疾病的构成比并无差别;在不同的年龄段,高危型、低危型以及高低危HPV混合感染类型的构成比有显著性差异(χ2=17.25,P<0.05)。多元logitic回归分析年龄因素及不同类型高危型HPV感染与宫颈癌的关系显示年龄超过40岁(OR=1.63,P<0.05),16型HPV感染(OR=2.78,P<0.01),58型HPV感染(OR=1.69,P<0.05)宫颈癌患病风险大大增加。结论:感染高危型HPV引起宫颈癌的患病风险增加,而低危型HPV则更易引起尖锐湿疣的发生;多重感染并不会促进宫颈疾病的进展;年龄、16型和58型HPV的感染是影响宫颈癌发生的重要因素。     

染色体异常核型二个家系

例1,女,32岁,继发闭经,原发不孕就诊。查体：身高153cm,体重46kg,表型智力正常。乳房对称发育,有腋毛,外阴发育正常。B超：子宫明显偏小,21mm×21mm×18mm，双侧附件区仅见卵巢样痕迹.性激素检查：促黄体生成素0．8U／L（参考范围2．1～10．9U／L），卵泡刺激素1．6U／L（参考范围3．8～8．8U／L），雌二醇41．0pmol／L（参考范围88-410pmol／L），睾酮0．4pmol／L（参考范围0～2．6pmol／L）。细胞遗传学检查：外周血淋巴细胞培养，常规制备染色体，胰酶G带法显带，     

前列腺癌患者抑癌基因PTEN上游序列的突变分析

目的查找前列腺癌患者抑癌基因(phosphataseand tensin homologue deleted chromatosome,PTEN)上游序列是否存在改变,以及该改变与前列腺癌发生发展是否存在关联。方法提取50例前列腺癌(prostate cancer,PCa)及30例正常对照组的外周血DNA,扩增PTEN外显子1上游1200bp左右DNA片段,纯化目的产物后进行测序,观察PCa患者与对照组的差异。结果 PCa患者在PTEN基因外显子1上游-510bp处存在G/A变异,形成3种基因型GG、GA、AA。前列腺癌与对照组相比,3种基因型频率存在差异(χ2=7.78,P<0.05)。结论作为抑癌基因的上游序列,基因的突变有可能导致了PTEN基因转录能力的下降,进而降低了抑癌基因对前列腺癌变进展的抑制作用。