泪液乳铁蛋白夹心法酶联免疫吸附试验的建立及初步临床应用

泪液乳铁蛋白（lactoferrin，LF）是泪液中最主要的抗菌蛋白质，对眼表组织起积极防护作用，其含量在很大程度上能反映泪腺的外分泌功能。干眼是与泪膜密切相关的眼表疾病，病因复杂、临床表现多样，诊断存在较大困难。多项研究表明，泪液LF含量检测可能是诊断干眼最敏感特异的指标。本研究应用噬菌体抗体库技术和动物免疫制备了抗人LF单链抗体和兔抗人LF多克隆抗体，建立LF的双抗夹心酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）法，以检测泪液LF含量，评价该指标对于干眼的诊断价值。     

1％环孢霉素滴眼液联合0.02％洗必泰滴眼液治疗棘阿米巴角膜炎（附1例报告）

棘阿米巴角膜炎是一种难治性、预后不良的感染性角膜疾病[1].棘阿米巴角膜炎首先见于西方发达国家报道,随着对此病认识的逐步加深,我国陆续有文献报道棘阿米巴角膜炎[2～4].棘阿米巴角膜炎表现为顽固性的化脓性感染,疾病进展过程中角膜病灶先后出现大量的中性粒细胞及巨噬细胞浸润,角膜组织坏死,角膜胶原溶解[5],炎症细胞在疾病的发生、发展及角膜病理损害中起着非常重要的作用.目前,棘阿米巴角膜炎的药物治疗效果不理想[3].角膜移植是治疗棘阿米巴角膜炎的有效方法[6].但是目前国内角膜供体缺乏,严重制约角膜移植治疗棘阿米巴角膜炎工作的开展.     

带状疱疹病毒性角膜炎非活动期眼表改变的临床研究

目的 探讨带状疱疹病毒性角膜炎(herpes zoster keratitis,HZK)非活动期患者眼表症状、角膜厚度、散光及泪膜稳定性变化.方法 采用前瞻性对照研究方法,收集2009年9月至2012年3月20例右眼患病的HZK非活动期患者,行角膜厚度、干眼症状、眼表指数评分、泪膜四项和屈光状态检查,同时选取20例性别、年龄等相匹配的健康自愿者作为对照,分析其眼表变化情况.结果 两组患者右眼角膜9个方位厚度比较差异均有统计学意义(均为P＜0.05),但左眼差异均无统计学意义(均为P＞0.05).HZK组患者双眼角膜9个方位厚度比较差异均无统计学意义(均为P＞0.05).对于反映垂直和水平方向散光的J0和矢量大小的P,HZK组两眼比较差异均有统计学意义(均为P＜0.05),而两眼J45比较差异无统计学意义(P＞0.05);对照组两眼比较差异均无统计学意义(均为P＞0.05);两组间右眼J0及P比较差异均有统计学意义(均为P＜0.05),而J45比较差异无统计学意义(P＞0.05).HZK组两眼干眼症状眼数、眼表指数评分、泪膜破裂时间、角膜荧光素染色、基础泪液分泌试验及泪河高度比较差异均有统计学意义(均为P＜0.05),对照组两眼比较差异均无统计学意义(均为P＜0.05);两组间右眼干眼症状眼数、眼表指数评分、泪膜破裂时间、角膜荧光素染色、基础泪液分泌试验及泪河高度比较差异均有统计学意义(均为P ＜0.05);左眼比较差异也均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 HZK非活动期患者角膜厚度、散光、干眼症状、眼表指数评分、泪膜四项和屈光状态均存在异常.     

多西环素诱导单核细胞系THP-1凋亡的实验研究

目的： 研究多西环素诱导THP-1细胞凋亡的作用。方法： 以PMA诱导THP-1细胞分化贴壁，分别按0 mg/L、5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、40 mg/L、80 mg/L的浓度梯度加入多西环素，作用12 h或48 h，设空白对照组。观察细胞形态变化，采用MTT法检测THP-1细胞活性，AnnexinⅤ和PI双染色后用流式细胞仪检测THP-1细胞早期凋亡，末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)检测THP-1细胞晚期凋亡。结果： 随着多西环素浓度增高，THP-1细胞收缩变圆，细胞间距增宽乃至完全分离，死亡、崩解的THP-1细胞逐渐增多。MTT法显示随着多西环素作用浓度增高，活性THP-1细胞数量逐渐下降。流式细胞仪检测和TUNEL检测显示THP-1细胞的早期凋亡和晚期凋亡率均伴随多西环素作用浓度的升高而升高。结论： 本实验首次阐明多西环素可以诱导人THP-1细胞凋亡，其效应呈明显的剂量依赖关系。     

浅析影响医学生学习积极性的因素及其应对方法

目前我国正处于一个特殊的社会转型阶段。我国要由一个生产力低下的计划经济时代转变为一个生产力高度发展的、市场起主导作用的市场经济时代。近30年的改革开放使得中国的社会生产力得到了巨大的发展,社会上的方方面面都产生了翻天覆地的变化。伴随着社会的巨大改变,我国的医疗事业也正在经历一场深刻的变革。医学生是明天的医生。处于这么一个剧烈变动的环境,医学生的心理会受到一定程度的影响,从而影响其学习的积极性。因此,作为学校或者教师,应该探寻医学生学习积极性不高的具体原因,对症下药,方能唤起学生的学习积极性,树立良好的学风,为社会培养出一批批高素质的医学人才,促进祖国医学事业的蓬勃发展。影响医学生学习积极性的因素是多方面的。医学课程繁重,实践性强,不容易学习,特别是很多新生难以适应如此大强度的学习,以至于学习兴趣低下。新形势下产生的就业难,待遇低下,更进一步打击医学生学习的积极性。具体分析如下:1就业形势不容乐观失业是当今社会的一个普遍现象。不仅在社会主义国家存在,在西方发达国家一样存在。它是市场经济发展到一定程度的产物。各行各业都有失业现象。我国医疗行业的失业有其特殊性。目前我国的医疗机构主要是国有形式,由国家投入资金建立,...     

胶原酶二步消化法分离培养牛角膜基质成纤维细胞*

背景：获得纯度高、活性强、生物学特性更接近体内状态的角膜基质成纤维细胞是角膜损伤后修复研究的基础。 目的：探索体外培养牛角膜基质成纤维细胞的新方法。 方法：用Ⅰ型胶原酶对牛角膜基质层进行二步消化分离后制成细胞悬液转入培养瓶中培养,取生长良好的细胞进行传代培养。采用锥虫蓝染色检测消化分离后细胞即刻存活率;倒置相差显微镜动态观察细胞的生长状态;波形蛋白免疫组织化学染色鉴定角膜成纤维细胞;MTT法检测细胞增殖情况;取处于对数生长期的细胞,绘制细胞生长曲线并计算细胞群倍增时间。 结果与结论：在体外成功分离培养牛角膜基质成纤维细胞,显微镜下观察及波形蛋白免疫组织化学染色后证实所培养的细胞为角膜基质成纤维细胞。锥虫蓝染色,细胞即刻成活率达93.5%。细胞生长曲线近似“S”形,其群体倍增时间为        38.70 h。说明二步消化法细胞培养技术简便、经济、高效,为原代培养角膜基质成纤维细胞提供了有效渠道。 关键词：角膜;成纤维细胞;细胞原代培养;细胞形态;生物学特性;消化法 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.07.015     

急入高海拔环境后对听觉的影响研究

目的 通过模拟高海拔环境对急进入高原人群听力的变化进行研究,并建立动物模型研究急进高原对听觉系统的影响,为急性缺氧引起的耳聋治疗提供理论依据。方法 选择拟急进入高原的受试者,在进入高原前,受试者进入模拟海拔5 000 m的低压氧舱内适应5 h,在入舱前后进行纯音测听(测试频率为250 Hz、500 Hz、1 kHz、2 kHz、4 kHz、8 kHz)。比较受试者入舱前后纯音测听的结果,并进行统计学分析。根据此结果建立动物模型,选取健康雄性C57小鼠50只,将小鼠随机分为对照组、缺氧5 h组、缺氧10 h组、缺氧24 h组、缺氧48 h组,每组10只。低压低氧动物实验舱模拟海拔5 000 m高原环境,采用听觉脑干诱发电位(ABR)测量小鼠听力变化情况。结果 受试者入舱后听力较入舱前有一定变化,双耳听阈及大多数频率(250 Hz、500 Hz、1 kHz、8 kHz)的纯音测听阈值较入舱前升高,差异有统计学意义(P<0.05),右耳中频(2 kHz)纯音测听阈值较入舱前无显著变化(P>0.05)。在动物实验中,实验组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ波潜伏期较对照组延长(P<0.05),Ⅴ...     

角膜中期保存液的基础研究及初步临床应用

目的研制一种配方简单、适合我国国情的角膜中期保存液。方法人角膜27片、23片分别保存于角膜中期保存液与Optisol GS液,保存结束取周边角膜行苔盼兰和茜素红联合染色,计算角膜内皮细胞密度及角膜内皮细胞活性率,比较两组数据,保存7d和14d各取2片角膜进行扫描电镜检查。取8片角膜保存于中期保存液,所保存角膜用于临床角膜移植,对患者定期进行裂隙灯检查,角膜内皮照相。结果角膜中期保存液组平均保存时间（8.39±0.72）d,角膜内皮细胞平均密度为（2743.48±366.54）个/mm^2;Optisol GS液组平均保存时间（7.58±0.34）d,角膜内皮细胞密度为（2568.95±245.47）/mm^2,两组比较,差异无统计学意义;角膜中期保存液组的内皮细胞平均活性率（96.65±2.59）%高于Optisol GS液组（93.47±3.81）%,差异具有统计学意义。角膜中期保存液所保存角膜用于临床,4例病人术后随访4d～11m,角膜平均内皮细胞计数（2285.75±534.05）个/mm^2。结论角膜中期保存液可活性保存人角膜片长达2w,其保存效果与Optisol GS液相似,初步临床使用显示了较好的效果。     

泪液缺乏型干眼的角膜内皮细胞密度及形态学观察

目的了解泪液缺乏型干眼患者的角膜内皮细胞密度和形态的改变。方法应用SP2000P型角膜内皮计对2005年8月至2006年2月于我院门诊就诊的20例(32眼)典型泪液缺乏型干眼患者进行角膜内皮细胞照相,并以23例(36眼)正常人作为对照,对两组角膜内皮细胞密度及形态进行分析和比较。结果泪液缺乏型干眼组的角膜内皮细胞密度为(2605.4±316.9)个/mm2,内皮细胞平均面积为(389.3±47.1)!m2;正常对照组角膜的内皮细胞密度为(2607.9±313.3)个/mm2,内皮细胞平均面积为(388.7±45.3)!m2,两组比较差异无显著性。泪液缺乏型干眼组内皮细胞平均面积变异系数为(37.3±10.1)%,角膜内皮六边形细胞比例为(52.3±8.9)%;正常对照组内皮细胞平均面积变异系数为(35.3±4.7)%,角膜内皮六边形细胞比例为(47.5±10.9)%,两组比较差异无显著性。结论泪液缺乏型干眼患者与正常人相比,角膜内皮细胞密度和形态无明显改变。