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1.
目的 构建人His-ARPC2融合蛋白表达载体,并在原核细胞中进行表达与纯化.以研究其功能及鉴定与其相互作用的蛋白。方法 采用PCR方法从人肝cDNA文库扩增ARPC2基因编码区,使用常规酶切、连接方法将其重组至pET-14b载体中。对阳性克隆进行酶切、PCR和测序鉴定。转化BL21(DE3)大肠杆菌株,用异丙基β-D硫代半乳糖(IPTG)诱导融合蛋白表达,并利用Ni-NTA亲和层析纯化该融合蛋白。结果 所构建的人ARPC2的His融合蛋白表达载体是正确的,该载体可在大肠杆菌内高效表达,用Ni-NTA纯化获得了相对分子质量约36000的融合蛋白。结论 成功构建了人His-ARPC2融合蛋白表达载体,并在原核细胞中获得了高效表达和纯化,为进一步研究ARPC2的生理功能提供了重要的实验材料。 相似文献
2.
目的 应用以核磁共振氢谱(HNMR)技术为基础的代谢组学方法,结合机器学习,建立多发伤患者微循环损伤程度的预测模型,从而达到对多发伤患者进行及早精准治疗的目的。方法 本研究纳入2021年6月至2022年5月四川省人民医院急诊科收治的30例多发伤合并失血性休克患者,在患者进入急诊抢救室后2h内采集血清样本,经预处理后采集HNMR数据。根据休克指数(SI)将多发伤患者分为A组(SI≥1.5)和B组(1.5>SI≥1),利用MestReNova软件提取两组的HNMR数据,再利用MetaboAnalyst 5.0进行偏最小二乘判别分析(PLS-DA),结合人类代谢组数据库(HM-DB)和京都基因和基因组百科全书(KEGG),找出能够区分两组的代谢物及相关的代谢途径。结果A组共纳入20例,B组共纳入10例。与B组比较,A组的烟酰胺、L-5-羟色氨酸、3-羟基苯乙酸、4-羟基苯甲醛、烟尿酸、L-犬尿氨酸、N-甲基烟酰胺、烟酸、5-羟基吲哚、伞形花序酮、N-乙酰血清素、N-氧代烟酰胺、肌苷水平升高;L-乙酰肉碱水平降低(P<0.05)。通路富集分析得出色氨酸代谢及烟酸和烟碱胺代谢途径在两组间的差异均有统计学意义(P<0.05),其中色氨酸代谢途径的影响最大(影响因子=0.29)。结论 本研究首次通过检测不同休克指数多发伤患者血清,找到了组间的代谢差异,为今后使用其他更方便的样本建立多发伤患者微循环损伤程度的预测模型提供了理论支持,但本研究样本量偏小,未来还需要对更大的样本量进行定量实验。 相似文献
4.
目的:构建小鼠髓样相关蛋白14(MRP14)的真核表达载体,观察其在NIH3T3细胞中的表达定位情况。方法:提取BALB/c小鼠肝脏组织的总RNA,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增得到MRP14编码序列。然后将该编码序列克隆到带有血凝素(HA)标记的载体pcDNA3-HA上,随后转染NIH3T3细胞,在荧光显微镜下观察结果。结果:重组质粒经聚合酶链反应(PCR)、酶切和测序鉴定证明构建正确。转染实验发现,该质粒能够在NIH3T3细胞中表达,表达产物主要定位在细胞质中。结论:成功构建带HA标签的MRP14真核表达载体。该载体能在哺乳动物细胞中有效表达并正确定位,为下一步深入研究MRP14作用细胞的信号通路提供了一个重要工具。 相似文献
5.
6.
目的建立研究DNA-蛋白质相互作用的新方法。方法选择6只SPF级BALB/c小鼠,模型组经尾静脉注射脂多糖(LPS)25mg/kg,使平均动脉压(MAP)降至40mmHg(1mmHg=0.133kPa)造成内毒素休克,然后迅速处死,正常对照组同期处死,取肝脏组织。利用生物素一链亲和素系统结合磁珠分离技术筛选内毒素诱导基因(LIG)启动子的结合蛋白。用聚合酶链反应(PCR)扩增末端带生物素标记的LIG启动子探针,提取动物肝脏组织胞核蛋白,与制备的LIG启动子探针进行孵育,再以标记有链亲和素的磁珠分离LIG启动子-蛋白反应复合物,使用不同浓度NaCl洗脱结合的蛋白,使用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)分离样品蛋白,并对凝胶进行银染显色,比较模型组与正常对照组的差异条带。结果两组胞核蛋白中共观察到15条差异条带。分析差异条带显示,与正常对照组比较,在低亲和力作用水平,LPS作用后有4个蛋白开始与LIG启动子作用力增强,而有1个蛋白则同启动子的相互作用减弱;在DNA-蛋白质高亲和力作用水平,则有9个蛋白因LPS刺激而同DNA的结合力增强,有1个蛋白同启动子的相互作用消失。结论成功建立了生物素-链亲和素结合磁珠分离技术的新方法,为研究DNA-蛋白质相互作用开拓了新思路,并从“转录调控组学”角度深入理解基因表达调控机制奠定了基础。 相似文献
7.
目的:构建高迁移率族蛋白B1(HMGB1)中细胞因子诱导片段1(CIF1)与串联亲和纯化(TAP)系统中纯化标签链霉亲和素结合肽(SBP)和钙调蛋白结合肽(CBP)序列相融合的原核表达载体,观察重组蛋白对小鼠单核/巨噬细胞白血病细胞释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,为HMGB1参与炎症反应作用机制的研究以及CIF1结构域细胞膜表面受体蛋白的获得和鉴定奠定基础。方法:采用PCR方法分别扩增出cBP-SBP和CIF1的编码序列,构建表达质粒pET-14b/CBPSBP—CIF。利用Ni—NTA亲和树脂纯化融合蛋白,纯度达85%以上。采用纯化后的蛋白诱导小鼠单核/巨噬细胞白血病细胞RAW264.7,利用LiquiChip液相蛋白芯片系统检测RAW264.7细胞释放TNF-a的水平变化。结果:表达载体构建正确,CIF1重组蛋白表达量高,纯度好。当蛋白浓度大于0.5ng/μl时,CIF1重组蛋白诱导细胞TNF-α的分泌量与对照组相比差异具有显著性(P〈0.05),并且在CIF1蛋白浓度O~2.5ng/μl范围内,TNF-α的分泌量与CIF1重组蛋白的浓度呈显著的剂量依赖关系。结论:原核表达纯化了His—CBP—SBP—CIF1融合蛋白,该融合蛋白可以有效地作用于巨噬样细胞内的信号转导过程,介导了炎症因子TNF—α的分泌表达。 相似文献
8.
肝癌是目前最常见的恶性肿瘤之一,肝癌发病率位居恶性肿瘤发病率第5位,病死率居第3位[1]。随着医学水平的提高,肝癌的治疗比以往取得了有较大的进展,尽管采取了积极的手术治疗结合化疗、放疗等治疗方案,但肝癌的长期生存率仍然很低,主要原因在于肝癌术后复发[2]。所谓肝癌的复发包括原发部位的复发、肝内其他部位肿瘤的形成和肝外远处转移,肝内肝癌的复发率为68%~96%[3]。即使行肝癌根治切除的患者,术后3年的复发转移率也有40%~50%,术后5年复发率高达60%~70%[4]。 相似文献
9.
10.
【目的】 观察益气活血通脉颗粒对冠心病经皮冠状动脉介入术(PCI)后气虚血瘀证患者心功能、血液流变学和炎症指标的影响。【方法】 将60例冠心病PCI术后气虚血瘀证患者随机分为试验组和对照组,每组各30例。对照组给予冠心病PCI术后常规治疗,试验组在对照组的基础上加用益气活血通脉颗粒治疗,疗程为8周并随访6个月。观察2组患者治疗前后中医证候评分、心功能指标、炎症指标、血液流变学指标的变化情况,比较2组患者的中医证候疗效和不良事件发生率。【结果】(1)中医证候疗效方面:治疗8周后,试验组的总有效率为86.7%(26/30),对照组为70.0%(21/30),组间比较,试验组的中医证候疗效明显优于对照组(P<0.05)。(2)中医证候评分方面:治疗后,2组患者的各项主症评分和次症评分均较治疗前明显降低(P<0.05),且试验组的降低作用均明显优于对照组(P<0.05)。(3)心功能指标方面:治疗后,2组患者的左心室射血分数(LVEF)和每分心输出量(CO)水平均较治疗前明显提高(P<0.05),且试验组的提高作用均明显优于对照组(P<0.05)。(4)血液流变学指标方面:治疗后,2组患者的全血高切黏度、全血低切黏度、血浆黏度、红细胞聚集指数均较治疗前明显降低(P<0.05),且试验组的降低作用均明显优于对照组(P<0.05)。(5)炎症指标方面:治疗后,2组患者的超敏C反应蛋白(hs-CRP)和白细胞介素6(IL-6)水平均较治疗前明显降低(P<0.05),且试验组的降低作用均明显优于对照组(P<0.05)。(6)不良事件方面:经6个月随访,试验组的不良事件发生率为16.7%(5/30),明显低于对照组的43.3%(13/30),差异有统计学意义(P<0.05)。【结论】 益气活血通脉颗粒治疗冠心病PCI术后气虚血瘀证患者疗效确切,可有效改善患者临床症状、心功能和血液流变学指标,降低患者的炎症水平和心血管不良事件发生率。 相似文献