AEBP1通过激活Wnt/β-catenin信号通路调控EMT促进结肠癌细胞增殖迁移

目的:探讨脂肪细胞增强结合蛋白1（AEBP1）对结肠癌细胞增殖迁移的影响及其机制。方法:Oncomine数据库对结肠癌中AEBP1表达情况进行分析;GEPIA、ualcan数据库对AEBP1表达与结肠癌患者预后进行分析。分析AEBP1在正常结肠上皮细胞和结肠癌细胞中的表达情况。在HCT116细胞过表达AEBP1建立过表达细胞系,在过表达细胞系中对AEBP1进行敲降。利用CCK-8实验、克隆形成实验检测AEBP1对细胞增殖的影响;Transwell实验检测AEBP1对细胞迁移能力的影响。实时荧光定量PCR与免疫组化实验检测结肠癌组织及配对正常组织AEBP1表达水平,Western blot法检测过表达AEBP1的结肠癌细胞AEBP1、β-catenin、cyclinD1、c-myc、E-cadherin、Vimentin蛋白的水平。结果:结肠癌组织中AEBP1表达增加。高表达AEBP1与结肠癌患者总生存期、无病生存期负相关,高表达AEBP1与结肠癌患者肿瘤分期、淋巴转移相关。过表达AEBP1后,HCT116结肠癌细胞增殖加快,克隆形成数增加、Transwell迁移细胞数增加,在过表达细胞中敲降AEBP1后得到相反结果。过表达AEBP1后β-catenin,cyclinD1,c-myc,Vimentin蛋白表达增加,E-cadherin蛋白表达下降。结论:AEBP1在结肠癌中高表达并通过激活Wnt/β-catenin信号通路诱导EMT进程促进结肠癌细胞增殖迁移。     

虎杖苷改善氧化应激介导的肺泡上皮细胞线粒体损伤的机制

目的探讨虎杖苷对氧化应激介导的肺泡上皮细胞线粒体损伤的影响及其可能机制。方法A549细胞分为4组:对照组接受0.1%浓度的DMSO处理60 min;模型组给予同等浓度DMSO预处理30 min后以H 2O 2250μmol/L刺激30 min;治疗组接受虎杖苷50μmol/L预处理30 min后予以H 2O 2250μmol/L刺激30 min;抑制剂组接受线粒体自噬抑制剂mdivi-110μmol/L及虎杖苷50μmol/L预处理30 min后以H 2O 2250μmol/L刺激30 min。Western blotting法检测线粒体膜蛋白[线粒体外膜转位酶(TOM20)和线粒体内膜转位酶(TIM23)],及线粒体生成调节因子[线粒体转录因子(mTFA)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC-1α)],同时Keima法检测细胞红色/绿色荧光面积以反映线粒体自噬水平。JC-1探针检测线粒体膜电位(MMP)。DCFH-DA荧光探针检测细胞活性氧(ROS)水平。荧光素-荧光素酶法检测细胞ATP水平。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活性。应用SPSS 20.0软件进行统计分析。结果(1)线粒体自噬水平。与对照组比较,模型组细胞TOM20及TIM23表达显著下降;与模型组比较,治疗组TOM20及TIM23表达显著下降;与治疗组比较,抑制剂组TOM20及TIM23显著增加,差异均有统计学意义(P<0.01)。但4组细胞mTFA及PGC-1α水平比较差异均无统计学意义(P>0.05)。Keima法显示,4组细胞红色/绿色荧光面积比值变化趋势与TOM20及TIM23水平变化相反。(2)MMP水平。对照组、模型组、治疗组与抑制剂组MMP分别为(100.0±5.9)%、(54.2±4.8)%、(70.8±3.6)%和(56.0±6.1)%。与对照组比较,模型组细胞MMP显著下降,治疗组MMP较模型组显著增加,而抑制剂组MMP较治疗组显著下降,差异有统计学意义(P<0.01)。(3)ROS水平、细胞活性及ATP水平。与对照组比较,模型组细胞ROS水平显著上升,细胞活性、ATP水平显著下降;与模型组比较,治疗组ROS水平显著下降,细胞活性、ATP水平显著增加;与治疗组比较,抑制剂组细胞ROS水平显著上升,细胞活性、ATP水平显著下降,差异有统计学意义(P<0.01)。结论虎杖苷可以显著改善氧化应激介导的肺泡上皮细胞线粒体损伤,其机制可能与上调线粒体自噬有关。     

京尼平对脂多糖介导的血管通透性增加的影响及其可能机制

目的探讨京尼平对脂多糖(LPS)介导的血管通透性增加的影响及可能机制。方法体外实验:将人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分为4组,对照组仅接受0.1%的二甲基亚砜(DMSO)处理24.5 h(DMSO);模型组接受同等浓度DMSO预处理30 min后与500 ng/ml LPS共孵育24 h(DMSO+LPS);治疗组接受京尼平50μmol预处理30 min后与500 ng/ml LPS共孵育(京尼平+LPS);抑制剂组接受10μmol EX527及京尼平50μmol预处理30 min后与500 ng/ml LPS共孵育(京尼平+EX527+LPS)。检测各组细胞内皮通透性Pa值(Transwell法)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)活性(酶标仪检测荧光强度)、Sirtuin-1蛋白(SIRT1)表达(Western blotting)、线粒体膜电位变化(JC-1探针法)及细胞凋亡情况(TUNEL染色法)。体内实验:另将雌性大鼠24只按随机数表法分为4组,对照组大鼠注射0.5 ml DMSO 30 min后注射生理盐水0.5 ml(DMSO+生理盐水);模型组大鼠注射0.5 ml DMSO 30 min后注射LPS 10 mg/kg(DMSO+LPS);治疗组大鼠注射京尼平5 mg/kg 30 min后注射LPS 10 mg/kg(京尼平+LPS);抑制剂组大鼠接受5 mg/kg京尼平及5 mg/kg EX527 30 min后注射LPS 10 mg/kg(京尼平+EX527+LPS)。生理盐水或LPS注射60 min后检测大鼠血管通透性ΔI(FITC-白蛋白荧光法)及SIRT1表达(Western blotting)。应用SPSS 20.0软件进行统计分析。根据数据类型,组间比较采用单因素方差分析、LSD两两比较或Tamhane′s T2检验;组内比较采用单因素重复测量的方差分析。结果体外实验:与对照组[Pa:1.00±0.04;caspase-3活性:100.0±4.4;JC-1绿色/红色荧光比例:(100.0±4.8)%;细胞凋亡率:(2.3±1.4)%;SIRT1:(100.0±8.9)%]比较,模型组[1.68±0.09、216.0±23.5、(343.0±28.3)%、(40.8±8.9)%、(61.0±8.5)%],治疗组[1.35±0.07、165.0±15.0、(220.0±13.3)%、(28.2±6.6)%、(86.7±7.6)%]及抑制剂组[1.60±0.10、202.0±16.5、(309.0±18.5)%、(38.0±9.5)%、(64.3±4.8)%]细胞Pa值、caspase-3活性、JC-1绿色/红色荧光比例及细胞凋亡率显著增加,SIRT1水平显著降低;与模型组比较,治疗组Pa、caspase-3、绿色/红色荧光比例及细胞凋亡率显著下降,SIRT1表达显著升高;与治疗组比较,抑制剂组Pa、caspase-3、JC-1绿色/红色荧光比例及细胞凋亡率显著增加,SIRT1表达显著降低,差异均有统计学意义(P0.05)。体内实验:模型组、治疗组及抑制剂组大鼠在LPS注射30 min及60 min后,与处理前及对照组比较血压明显下降(P0.05),但3组大鼠间血压比较差异无统计学意义(P0.05)。与对照组[SIRT1:(100.0±4.0)%,ΔI:(0.12±0.03)]比较,模型组[(49.3±8.3)%、0.54±0.07],治疗组[(87.3±4.7)%、0.32±0.05]及抑制剂组[(55.3±4.9)%、0.53±0.06]SIRT1表达量显著降低,ΔI显著增加;与模型组比较,治疗组SIRT1表达显著上升,ΔI显著减弱;与治疗组比较,抑制剂组SIRT1表达显著降低,ΔI显著增强,差异均有统计学意义(P0.05)。结论京尼平通过抑制线粒体凋亡信号激活最终抑制LPS介导的血管通透性增加,其作用可能与上调SIRT1有关。     

GLP-1受体在脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤中的作用及其机制

目的研究glucagon like peptide-1(GLP-1)受体在急性肺损伤(ALI)中的作用及相关机制。方法通过气管内注射脂多糖(LPS)法建立ALI模型。采用随机数表法将30只大鼠随机分为5组,每组6只。对照组大鼠建立假模型后接受生理盐水(NS)处理;空白药物组大鼠建立假模型后接受GLP-1受体激动剂利拉鲁肽(2 mg/kg)处理;模型组大鼠建立ALI模型后接受NS处理;治疗组大鼠建立ALI模型后接受利拉鲁肽(2 mg/kg)处理;抑制剂组大鼠建立ALI模型后接受利拉鲁肽(2 mg/kg)及自噬抑制剂3-methyladenine (3MA,10 mg/kg)处理。蛋白免疫印迹实验法检测各组大鼠肺中LC3II、Beclin-1、P62、Bax、Bcl-2蛋白的表达。采用TUNEL染色法检测细胞凋亡。应用SPSS 20.0软件进行数据处理。组间比较采用单因素方差分析和LSD多重比较。结果模型组LC3II、Beclin-1及P62表达分别为100.0%±5.3%、100.0%±5.6%、100.0%±6.1%,治疗组中LC3II及Beclin-1表达分别显著增加至214.0%±12.3%及329.0%±33.8%,P62表达显著下降至50.0%±7.0%(均P0.01)。对照组肺损伤分数、湿/干重比(W/D)、Bax、Bcl-2及凋亡细胞分别为0.3±0.5、4.08±0.14、100.0%±7.0%、100.0%±3.6%、1.0±0.9,模型组肺损伤分数、湿/干重比(W/D)、Bax及凋亡细胞分别显著增加为4.6±0.8、4.83±0.23、284.0%±25.6%及42.5±8.2,Bcl-2显著下降至63.0%±6.2%(均P0.001);与模型组比较,治疗组肺损伤分数、W/D、Bax、及凋亡细胞分别显著下降至2.5±1.0、4.42±0.15、198.0%±24.8%及17.0±3.4,Bcl-2显著增加至83.0%±5.3%(均P0.01);与治疗组比较,抑制剂组肺损伤分数、W/D、Bax及凋亡细胞分别显著增加至4.3±0.8、4.77±0.25、277.0%±25.5%及39.5±6.2,Bcl-2下降至54.0%±5.0%(均P0.01)。结论激活GLP-1受体可以显著改善脂多糖介导的急性肺损伤,其机制与其通过上调细胞自噬、进而减轻细胞凋亡有关。     

血浆置换治疗急性呼吸窘迫综合征有效性的探索性随机对照研究

目的探讨血浆置换在急性呼吸窘迫综合征(ARDS)治疗中的临床有效性。方法本研究为前瞻性随机平行对照研究, 将郴州市第一人民医院重症医学科中符合纳入标准的42例患者随机分为对照组及血浆置换组。对照组患者采取常规治疗;血浆置换组患者在采取常规治疗的同时接受血浆置换治疗。比较分析两组患者机械通气时间、重症监护室(ICU)住院时间、28 d病死率及90 d病死率、治疗前后氧合指数、序贯器官衰竭估计评分(SOFA评分)、去甲肾上腺素(NE)使用剂量、C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)及白细胞介素6(IL-6)水平。结果组内比较, 对照组患者治疗后氧合指数、IL-6、PCT及CRP水平较治疗前显著改善(t=-4.50、2.46、Z=-3.53、t=5.55, 均P<0.05), 治疗前后SOFA评分及NE使用剂量差异无统计学意义(t=1.98, Z=-0.47, 均P>0.05);血浆置换组患者治疗后氧合指数、SOFA评分、IL-6、PCT、CRP水平及NE使用剂量较治疗前均显著改善(t=2.18、9.23、5.26、Z=-3.77、t=7.27、Z=-2.54, 均P<0...     

虎杖苷对脂多糖介导的肺泡上皮细胞线粒体损伤的影响

目的探讨虎杖苷对脂多糖(LPS)介导的肺泡上皮线粒体损伤的影响及可能机制。方法 A549细胞分为4组:对照组为细胞仅接受0.1%DMSO处理7 h;模型组为细胞给予DMSO预处理,1 h后与LPS(5 mg/L)共孵育6 h;治疗组为细胞接受虎杖苷(50μmol/L)预处理,1 h后与LPS(5 mg/L)共孵育6 h;抑制剂组为细胞接受沉默信息调节因子2相关酶3(SIRT3)抑制剂(50μmol/L 3-TYP)及虎杖苷50μmol/L预处理,1 h后与LPS(5 mg/L)共孵育6 h。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞活性;荧光素-荧光素酶法检测细胞ATP水平;钙黄绿素-氯化钴探针检测线粒体通透性转变孔(mPTP)状态;DCFH-DA荧光探针检测细胞活性氧(ROS)水平;荧光探针JC-1检测线粒体膜电位(MMP);Western blotting检测细胞SIRT3表达。应用SPSS 20.0软件进行统计分析。组间比较采用单因素方差分析、LSD两两比较或Tamhane′s T2检验。结果与对照组比较,模型组中SIRT3表达、JC-1红色/绿色荧光、钙黄绿素荧光、ATP水平及细胞活力分别显著下降至(73.3±4.5)%、(54.0±6.5)%、(2 035±217)U、(72.2±4.8)%及(73.7±3.7)%,ROS水平显著增加为(218.0±21.7)%;与模型组比较,治疗组中SIRT3表达、JC-1红色/绿色荧光、钙黄绿素荧光、ATP水平及细胞活力分别显著上升为(86.7±7.6)%、(75.8±7.6)%、(2 571±199)U、(86.7±6.3)%及(83.0±3.6)%,ROS水平显著下降为(180.0±18.1)%;与治疗组比较,抑制剂组中SIRT3表达、JC-1红色/绿色荧光、钙黄绿素荧光、ATP水平及细胞活力分别显著下降为(69.0±7.8)%、(62.8±6.2)%、(2 116±254)U、(72.8±5.8)%及(73.3±4.1)%,ROS水平显著增加为(212.0±18.2)%。结论虎杖苷可以显著改善LPS介导的肺泡上皮线粒体损伤,其机制可能与激活SIRT3有关。