Nurr-1对小胶质细胞微环境的影响

目的:探讨Nurr-1基因对小胶质细胞活化状态及其微环境的影响。方法:分离培养新生SD大鼠小胶质细胞,纯化、鉴定并分别用脂多糖(LPS)刺激活化和过表达Nurr1基因。实验随机分为小胶质细胞组、Nurr1过表达组、LPS处理组、Nurr1过表达+LPS处理组。ELISA分析过表达Nurr1基因对不同状态小胶质细胞分泌TNF-α、IL-1等炎症相关因子和BDNF、GDNF和PDNF等神经营养因子的影响。结果:(1)小胶质细胞混合培养、纯化、CD11b/c免疫细胞化学鉴定为阳性,纯度在95%;(2)Nurr1基因过表达小胶质细胞转染阳性率90%;(3)ELISA法检测结果显示:过表达Nurr1基因的小胶质细胞显著降低了TNF-α、IL-1的分泌,并促使了BDNF、GDNF和PDNF等神经营养因子的分泌。结论:Nurr1基因可抑制小胶质细胞的活化和减少炎症相关因子的产生,同时可促进GDNF、BDNF、PDNF等与DA能神经元存活和成熟等相关的神经营养因子的分泌。     

原发性三叉神经痛的临床治疗进展

<正>原发性三叉神经痛多发于中老年,发病率约15.5/10万人;疼痛影响刷牙、洗脸、咀嚼等日常活动,可诱发焦虑、抑郁等精神卫生方面的问题[1]。三叉神经痛(trigeminnal neuralgia,TN)是一种常见的慢性疼痛,典型与非典型TN具有不同的临床特点及治疗效果不一,给治疗方案的选择带来了较多困难,因此目前尚无统一的治疗方案[2]。为改善三叉神经痛的症状及缩短三叉神经痛的病程,临床应用最广泛的治疗方式是破坏性治疗及功能性治疗[3],药物治疗仅是病程初始时的保守性治疗,随着症状的加重及药物的耐受,我们最终的选择是手术治疗。总结原发性三叉神经痛的临床应用治疗中的手术时机、手术方式及并发症,现综述如下。     

星形胶质细胞瘤干细胞的体外分离、培养与鉴定

背景：肿瘤干细胞理论认为肿瘤中存在一小部分具有无限增殖潜能和自我更新能力,能够分化为成熟细胞表型的干细胞样细胞,对肿瘤发生、增殖、侵袭起关键作用。目的：建立体外分离、培养与鉴定星形胶质细胞瘤干细胞的方法。方法：采用直接培养法分离培养星形胶质细胞瘤干细胞。参照神经干细胞培养条件,进行体外培养。观察其增殖、分化并进行巢蛋白、CD133免疫细胞化学鉴定和诱导分化后神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白及O4免疫细胞化学鉴定。结果与结论：培养7-10d,可形成大量悬浮生长巢蛋白及CD133免疫阳性的神经球,经诱导分化后细胞呈神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白或O4免疫阳性。提示星形胶质细胞瘤中存在具有神经干细胞特性的肿瘤干细胞。CD133和巢蛋白是星形胶质细胞瘤干细胞重要的表面标记,可以用于星形胶质细胞瘤干细胞的分离。     

人β神经生长因子基因真核表达载体的构建与表达

目的 构建人NGF-β基因真核表达载体并观察其在子鼠脊髓神经干细胞内的表达.方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从人脑肿瘤旁组织总RNA中扩增出750 bp片段,将其克隆至真核表达载体pcDNA3中经酶切鉴定产生750 bp和5.2 kd)的片段,完成序列分析.分离培养E14子鼠脊髓神经干细胞,以非脂质体转染试剂FuGENE HD介导质粒peDNA3-hNGFb转染培养第3代的细胞,应用免疫细胞化学和Western blot鉴定NGF-β在细胞内的表达.结果 RT-PCR产物为750 bp的片段,重组质粒peDNA3-hNGFb经双酶切产生750 bp和5.2kd)的片段,测序结果与文献报道结果完全一致.免疫细胞化学、Western blot结果表明NGF-β能在细胞中正确表达.结论 成功构建了peDNA3-hNGFb真核表达载体,其转染的子鼠脊髓神经干细胞能正确表达NGF-β.     

pcDNA3-hNGFb真核表达载体的构建及其表达

目的构建人神经生长因子β（NGF-β）基因真核表达载体并观察其在L929细胞内的表达。方法以RT-PCR从人脑组织总RNA中扩增NGF-βcDNA,将其克隆到真核表达载体pcD-NA3中,经酶切鉴定和序列分析后,以Lipofectamine2000介导转染L929细胞,应用免疫细胞化学和western blot鉴定NGF-β在细胞内的表达。结果RT-PCR产物为750bp的特异片段,重组质粒pcDNA3-hNGFb酶切后产生750bp和5.2kb的片段,DNA测序证实750bp片段的碱基序列与人NGF-βcDNA完全一致。将其转染L929细胞后,免疫细胞化学、western blot结果表明NGF-β及其前体proNGF-β能在真核细胞中正确表达。结论成功构建了重组真核表达质粒pcDNA3-hNGFb,为后续的研究奠定基础。     

CBL教学法在神经外科临床教学中的应用研究

神经外科专业性较强,但由于其为外科教学的非主干课程,内容较多而授课时间相对较少,因而讲授难度较大,传统的课堂教学难以将知识点与临床实际联系,进一步转变为临床技能.在神经外科临床教学中,我们采用以病例为基础的学习（case based learning,CBL）法,取得了良好的教学效果.     

人神经生长因子β基因克隆及其真核表达载体的构建

神经生长因子(nerve growth factor,NGF)是神经营养因子家族中最早被发现,也是迄今为止研究得最为清楚的细胞生长因子.研究表明,NGF能够维持神经元的生长、发育、分化、存活.此外,NGF还参与神经损伤的再生与修复,促进受损神经元的修复和再生[1].然而,NGF属生物大分子,不能通过血脑屏障,限制了其应用.基因治疗是目前解决NGF给药途径问题最有希望的方案.本研究将克隆人NGF-β基因编码序列并构建其真核表达载体,为进一步应用其开展帕金森病(Parkinson's dis-ease,PD)的基因治疗研究奠定基础.     

白介素-10对脊髓损伤后炎症影响的研究

目的 研究IL-10对脊髓损伤(SCI)后NF-κB表达和单核/巨噬细胞浸润的作用及意义.方法 制作大鼠SCI模型,伤后半小时分别给予IL-10(实验组)和生理盐水(对照组)腹腔注射,常规方法提取脊髓组织核蛋白完成核蛋白定量,Trans AMTM NF-κB P65试剂盒检测NF-κB P65表达.结果 两组脊髓组织中均有NF-κB P65表达,两组表达水平具有显著差异(P＜0.05,＜0.01);两组单核/巨噬细胞数目和密度具有显著差异(P＜0.01).结论 IL-10对脊髓损伤后炎症介质核因子NF-κB表达和局部单核/巨噬细胞浸润有抑制作用,两种机制共同作用有效抑制了SCI早期炎症的发生.     

雌雄猕猴束缚时应激的情绪反应差异

目的：观察雌雄猕猴束缚时应激的情绪反应性别差异．方法：雌雄猕猴各5只，将其束缚30min观察反映应激的情绪反应的三个方面。并记录反应的强烈程度，进行对比．结果：束缚时雌猴的恐惧情绪与摆脱束缚的反应明显比雄猴强烈。表现为不停的挣扎、撕咬和不时发出叫声；雄猴则表现的相对平静．结论：束缚时雌猴应激的情绪反应比雄猴强烈，产生这种差异的原因可能是性别选择和性激素作用的结果。雌雄猴在种群生存和延续中所担负的功能不同。决定了应激时情绪反应的性别差异．