CXCR4和VEGF-C在结肠癌组织中的表达及与淋巴结转移之间的关系

目的探讨趋化因子受体(CXCR4)和血管内皮生长因子C(VEGF-C)在人结肠癌组织中的表达及与淋巴结转移之间的关系。方法选择65例结肠癌标本,应用免疫组织化学染色方法,检测CXCR4和VEGF-C在人结肠癌组织中的表达,同时对其与临床病理参数的关系进行统计学分析。结果CXCR4在结肠癌组织中的阳性表达率为43.1%,其中淋巴结转移组表达率为57.9%,无淋巴结转移组表达率为22.2%,差异有非常显著的统计学意义(P<0.01)。VEGF-C在结肠癌组织中的阳性表达率为50.2%,其中淋巴结转移组表达率为68.4%,无淋巴结转移组表达率为25.9%,二者差异非常显著(P<0.01)。而且,CXCR4阳性表达与VEGF-C阳性表达呈显著正相关(P<0.05)。结肠癌CXCR4和VEGF-C的表达水平与肿瘤细胞淋巴结转移密切相关,而与病人的年龄、性别、肿瘤大小、组织学类型、分化程度及肿瘤浸润深度等无相关性(P>0.05)。结论CXCR4和VEGF-C的表达可作为评估结肠癌病人淋巴道转移的一个观测指标。     

RNA干扰Neuropilins-2基因真核表达载体的构建及其鉴定

目的 构建Neuropilins-2(NRP2)基因RNA干扰(RNAi)的真核细胞表达载体.方法 以NRP2为靶基因,以pGenSil-l质粒为载体,设计构件重组体,根据GenBank数据库提供的NRP2基因核苷酸序列,按照Tuschl设计原则,选择设计两条带发夹结构的核苷酸序列,克隆到空载体pGenSil-l中,转化DH5α菌株,提取质粒,进行限制性内切酶酶切鉴定和测序分析.重组pGenSil-NRP2载体转染LOVO细胞48 h,收获细胞,采用Western blotting检测其NRP2蛋白表达.结果 经酶切鉴定筛选出的重组体测序结果与目的序列完全一致,重组载体构建成功.重组体pGenSil-NRP2转染LOVO细胞48 h后NRP2蛋白表达显著降低.结论 利用RNAi技术可成功构建抑制NRP2表达的小干扰RNA重组体.     

VEGF-C基因RNA干扰真核表达载体的构建及其效果鉴定

目的:构建VEGF-C基因RNA干扰(RNAi)的真核细胞表达载体。方法:以VEGF-C为靶基因,以pGenSil-l质粒为载体,设计构建重组体,根据GenBank数据库提供的VEGF-C基因核苷酸序列,按照Tuschl设计原则,选择设计两条带发夹结构的核苷酸序列,克隆到空载体pGenSil-l中,转化DH5α菌株,提取质粒,进行限制性内切酶酶切鉴定和测序分析,将重组的pGenSil-VEGF-C质粒转染LOVO细胞48小时,检测其对LOVO细胞VEGF-C蛋白与mRNA表达的影响。结果:经酶切鉴定筛选出的重组体测序结果与目的序列完全一致,重组载体显著降低Lovo细胞VEGF-C的蛋白和mRNA表达,重组载体构建成功。结论:利用RNAi技术可成功构建抑制VEGF-C表达的小干扰RNA重组体。     

mTOR信号通路调控HK-Ⅱ表达对结肠癌细胞增殖的影响

目的：探讨mTOR信号通路是否可通过调控HK—Ⅱ蛋白表达的途径来影响结肠癌细胞增殖。方法：Western印迹检测结肠癌细胞mTOR、HK—Ⅱ蛋白表达水平，并观察抑制mTOR信号通路对HK—Ⅱ蛋白表达的影响。采用MTT法检测mTOR和HK—Ⅱ特异性抑制剂作用后结肠癌细胞增殖的变化。结果：mTOR、HK—Ⅱ蛋白在4种结肠癌细胞中均明显表达；抑制mTOR可阻断结肠癌细胞HK—Ⅱ蛋白表达；抑制mTOR和抑制HK—Ⅱ均可明显控制结肠癌细胞增殖，且两者有协同效应。结论：mTOR信号通路可能通过调控HK—Ⅱ的表达影响结肠癌细胞增殖。     

结肠癌组织中Tiam1的表达与淋巴管生成之间的关系

目的:我们的实验旨在探讨T淋巴瘤侵袭转移基因1(T-cell lymphoma invasion and metastasis1,Tiam1)与结肠癌淋巴管生成的关系。方法:应用SP免疫组化法检测50例经4%甲醛固定、石蜡包埋结肠癌组织中Ti-am1、VEGF-C/D以及淋巴管密度(LMVD)的表达情况。结果:Tiam1阳性表达组VEGF-C阳性率为64.3%,Ti-am1阴性表达组VEGF-C阳性率为25.0%,二者差异有统计学意义,P=0.039;Tiam1阳性表达组LMVD为11.35±3.34,Tiam1阴性表达组LMVD为7.38±2.27,二者差异有统计学意义,P=0.002。结论:Tiam1过量表达可能与结肠癌淋巴管生成有关。     

单侧延长臂分子信标探针芯片在结核杆菌检测中的运用研究

目的分子信标探针在芯片表面的固定结合是限制其在芯片技术领域运用的难题。本研究拟寻找一种将分子信标探针固定在芯片表面的新方法,同时对其中重要影响因素进行优化探讨。方法本实验设计一种带单侧延长臂分子信标探针,固定在芯片表面进行杂交、扫描等后续实验。提高杂交效率部分优化包括：分子信标探针浓度;杂交温度、杂交时间;杂交液配方;4种分子对分子信标荧光信号比较。结果较理想区分阴阳性信号强度理想的探针浓度：Cy3-BDH分子信标探针浓度约10μmol/L,FAM-DABCLYE约15μmol/L。讨论单侧延长臂分子信标特异性高、敏感性高、技术难度低,对中、高密度芯片杂交可做到“点对点杂交”。     

蛋白激酶C在结肠癌多细胞耐药中的实验研究

目的：探讨蛋白激酶C（protein kinase C,PKC）在结肠癌细胞多细胞耐药中的作用。方法：采用体外三维细胞培养的方法,通过应用不同剂量PKC抑制剂Staurosporine（SP）对三维（3D）培养结肠癌HT-29细胞药物敏感性、核因子-κB（NF-κB）活性及PKC活性的影响的研究,探讨PKC在结肠癌细胞群集耐药中的作用。结果：3D培养结肠癌细胞中PKC、NF-κB活性较二维（2D）培养细胞明显增高,氟尿嘧啶（5-FU）的药物敏感性降低;SP不同浓度处理HT-29球形细胞可抑制其PKC及NF-κB活性,对5-FU的药物敏感性增加,在一定浓度范围内,随着SP浓度的增加,抑制作用逐渐增强,存在量效关系。结论：PKC在结肠癌细胞群集耐药中有一定作用,抑制PKC活性,可增加结肠癌球形细胞对5-FU的敏感性。     

丝裂霉素渗漏性损伤处理方法的实验研究

目的寻找治疗丝裂霉素渗漏性损伤的有效方法.方法制作丝裂霉素渗漏性损伤的家兔动物模型,以消退指数和消退时间作为检测指标,比较不同处理方法的治疗效果.结果冰敷治疗组和冰敷 阿米福汀治疗组效果最好,其消退时间最短,冰敷治疗组动物组织学检查发现无明显皮肤炎性改变及坏死.结论出现丝裂霉素渗漏性损伤后尽早采取冰敷治疗措施,可有效防止皮肤炎性反应及坏死,是一种有效的治疗方法.     

大孔树脂柱层析分离青蒿不同提取物对结肠癌HT-29、Lovo细胞NF-κB活性的影响

目的 通过比较青蒿水煎液经大孔树脂柱层析后所得粗提物对结肠癌HT-29、Lovo细胞核因子-kB(NF-kB)活性的影响,寻找青蒿中对结肠癌细胞NF-kB活性有作用的洗脱相.方法 青蒿水煎液浓缩后加样,AB-8大孔树脂吸附后行柱层析,分别用蒸馏水、30%、50%、75%和95%乙醇对其进行洗脱,收集回旋浓缩得到的不同洗脱相粗提物.MTT法检测经不同浓度(0、50、100、200、400、600μg/ml)的不同洗脱相处理24h后HT-29细胞的活力,以选择粗提物的工作浓度.将HT-29、Lovo细胞分别设为对照组(不加处理因素)和经MTT法检测后获得工作浓度的30%乙醇相组、50%乙醇相组、75%乙醇相组、95%乙醇相组、流出相组,孵育24h后收集细胞,提取细胞核蛋白,采用凝胶阻滞分析(EMSA)法对NF-kB出活性进行测定.结果 MTT法检测发现各相浓度为400、600μg/ml时,HT-29细胞活力均较其他浓度明显降低(P<0.01),因此本实验选择200μg/ml作为工作浓度用于后续实验.HT-29细胞和Lovo细胞经不同洗脱相的青蒿粗提物处理后,以30%乙醇相组的NF-kB活性降低最为明显(积分光密度值分别为29.81±1.62,30.1±1.09),与对照组(积分光密度值分别为55.31±1.07,66.73±1.49)比较有统计学差异(P<0.01),而50%乙醇相组、75%乙醇相组、95%乙醇相组和流出相组NF-kB出活性与对照组比较无统计学差异.结论 青蒿水煎液采用大孔树脂柱层析分离,30%乙醇洗脱相粗提物(200μg/ml)对结肠癌HT-29细胞、Lovo细胞NF-kB出活性具有抑制作用.     

PICC护理安全管理体会

随着现代医学技术的飞速发展，静脉置管技术广泛应用于临床，其中经外周静脉导入中心静脉置管技术（peripherally inserted central catheter，PICC）因其操作简单、创伤小、血管定位准确、留置时间长等优点，倍受护理工作者及患者的欢迎。我院自1999年开展该技术，目前已广泛应用，成为我院的护理特色之一。