人血液酪氨酸蛋白激酶的研究——(Ⅲ)1—异丙基—6—氨基—噻吩骈[3,4—d]嘧啶—2,4—二酮对人淋巴细胞膜TPK活性的抑制作用

文报道了人工合成的1—异丙基—6—氨基—噻吩骈〔3,4—d〕嘧啶—2,4—二酮对人淋巴细胞膜TPK活性的抑制作用,IC_(50)约为300μmol/L。动力学实验结果表明,该化合物对TPK的抑制作用与ATP呈竞争性,而与多肽底物Poly(Glu—Ala—Tyr)_(6;3:1)呈非竞争性。放射自显影结果进一步证实了该化合物对TPK的抑制作用。     

蛋白转移鉴定法及其在钙蛋白研究中的应用

本文综合了蛋白转移鉴定法的应用范围、操作要点和发展情况。并结合作者的工作经验介绍了本法在钙蛋白研究中的应用。     

小鼠脑Ca~(2+)/CaM依赖性蛋白激酶Ⅱ的鉴定及苄普地尔对其酶活力的抑制作用

用DE_(52)、磷酸纤维素和Sephaery S—300柱层析从小白鼠脑中提纯了Ca~(2+)/CaM依赖性蛋白激酶Ⅱ并进行了鉴定。凝胶过滤法测定全酶分子量为55万,在SDS-PAGE中显示出两条区带,其亚基分子量分别为5万和5.7万。该酶活力依赖于Ca~(2+)和CaM,AC_(50)分别为28μmol/L和2.2μmol/L。苄普地尔对酶有抑制作用,IC_(50)约为250μmol/L。     

钙调素在脑缺血与再灌注时含量和分布的变化

本文采用ELISA和免疫胶体金标记电镜技术,研究了蒙古沙土鼠急性脑缺血及再灌注后CaM的含量和分布变化。ELISA测定结果;结扎双侧颈总动脉10分钟后,CaM含量较正常组显著降低(P<0.01),再灌注20分钟,CaM含量较缺血10分钟组显著降低(P<0.01),免疫胶体金电镜观察表明,缺血组和缺血再灌组每个视野胶体金颗粒数明显低于正常组(P<0.01),在缺血神经元突触附近,可见胶体金颗粒明显减少。     

重金属离子对骨骼肌肌动球蛋白的超沉淀作用

从家兔骨骼肌中提取肌动球蛋白,并对重金属离子对其超沉淀的影响进行了研究。低浓度的Cd~(2+)和Pb~(2+)表现出与Cd~(2+)类似的激活作用,主要是加快超沉淀的速度,Hg~(2+)的激活作用较小。离子浓度大于100μmol/L,Cd~(2+)和Pb~(2+)开始表现抑制作用,即抑制超沉淀的速度和幅度。Hg~(2+)的抑制效应最为强烈,浓度大于10μmol/L即开始出现抑制,大于20μmol/L便可阻止超沉淀的发生。重金属离子作用于肌钙蛋白调节体系,为金属中毒机制提供了新的佐证。     

同时分离纯化猪脑中钙调素和S—100

利用DEAE-Sephadex和Phenyl-Sepharose层析,同时从猪脑中分离纯化了两种钙结合蛋白,即S-100和CaM。分子量为10,500的钙结合蛋白对牛脑PDE无激活作用;与CaM抗体无交叉反应;在SDS-PAGE中,迁移速度不受Ca~(2+)的影响;而在碱性甘油PAGE中,迁移速度在有Ca~(2+)时比无Ca~(2+)时慢,并且出现多区带;在250、260、266、270、279和284nm处具有六个吸收峰。以上特征及其氨基酸组成分析表明,此蛋白为S—100。另一种钙结合蛋白分子量为18,000;对牛脑PDE的激活作用和电泳行为与标准CaM相同;与CaM抗体呈阳性反应。     

重金属离子刺激兔主动脉条的收缩

实验研究了重金属离子Pb~(2+)和Cd~(2+)对家兔主动脉条等长收缩的影响。Pb~(2+)和Cd~(2+)都能模拟Ca~(2+)的作用,在低浓度时刺激血管平滑肌的收缩,而高浓度时表现阻遏作用,与分子模型实验所得的结果一致。为重金属离子对血管平滑肌的毒害作用提供了新的解释。     

脑缺血生化机制的研究——脑缺血CaM含量和分布及亚细胞结构的变化

用ELISA和免疫胶体金标记电镜技术,研究了蒙古沙土鼠急性脑缺血CaM的含量、分布和亚细胞形态结构变化。ELISA测定结果;缺血10分钟,CaM下降25％;缺血30分钟,CaM下降45％。免疫胶体金检查:正常组每个视野胶体金颗粒数为9.95±3.76,缺血组为5.32±2.44,两组相比,P值<0.001。电镜下可见缺血神经元粗面内质网脱颗粒,线粒体基质密度增加等改变。     

钙调节蛋白

生物作用广泛的细胞信使主要是Ca~(2+)和cAMP。Ca~(2+)在生物体内通过其受体蛋白,即钙调节蛋白发挥功能。钙调节蛋白可分为两类:一类主要在胞外起作用,如与凝血有关的钙蛋白;另一类在胞内起作用,如多功能的钙媒介蛋白。后者具有特殊的、但非专一的钙结合区,正常生理条件下能与Ca~(2+)可逆性结合。形成的钙媒介蛋白·Ca~(2+)络合物可直接激活靶蛋白或酶,也可通过靶蛋白间接调节磷酸化和去磷酸化,从而发挥多种生物功能。     

软骨肉瘤cDNA探针制备及其临床意义

制备了软骨肉瘤ｃＤＮＡ探针，峰长０．１至３．５Ｋｂ，并以此同骨肉瘤、软骨瘤、直肠粘液腺癌、食管鳞癌进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交，结果前二者出现杂交带并以骨肉瘤为强。表明该探针能够区分原发性骨间叶性肿瘤和继发性骨癌，并为构建减数杂交文库打下了基础。