Bmi-1与Ki-67在肺腺癌中的表达及其临床意义

目的明确Bmi-1与Ki-67蛋白在肺腺癌组织中的作用及二者间相关性。方法对病历资料完整的38例肺腺癌癌组织和35例癌旁组织的石蜡切片进行Bmi-1与Ki-67的免疫组织化学(S-P法)染色,检测Bmi-1与Ki-67蛋白的表达,并分析两者的表达水平与临床病理特征的关系及两者之间的相关性。结果 38例肺腺癌的癌组织中,Bmi-1和Ki-67阳性高表达率明显高于癌旁组织(Bmi-1:71.1%vs 14.3%;Ki-67:76.3%vs5.7%,P<0.05)。与临床资料的相关性分析显示:Bmi-1的表达与TNM分期和淋巴结转移相关(P<0.05);而Ki-67仅与淋巴结转移相关(P<0.05)。此外,Bmi-1和Ki-67两者之间呈正相关(P<0.05)。结论 Bmi-1在肺腺癌组织中的高表达参与了肺癌的增殖与转移,Bmi-1和Ki-67的检测可作为临床诊断肺癌、判断转移及预后的重要参考指标。     

Bmi-1 siRNA对宫颈癌Hela细胞体外增殖能力的影响

[目的]观察siRNA沉默Bmi-1表达对Hela细胞增殖能力的影响。[方法]构建了表达Bmi-1 siRNA的重组真核表达载体,将其转染入Hela细胞,利用荧光法观察转染效率。用RT-PCR及Western blot方法检测转染后细胞Bmi-1 mRNA及Bmi-1蛋白的表达情况;用MTT比色法、台盼蓝拒染法检测Bmi-1 siRNA对Hela细胞增殖的抑制作用;用流式细胞仪分析各组细胞的细胞周期;用平板克隆形成实验检测Bmi-1 siRNA对Hela细胞的单细胞增殖能力的影响;应用免疫细胞化学(SP法)及Western blot法检测各组细胞Ki-67及CyclinD1的表达。[结果]将构建好的重组质粒成功转染进入了Hela细胞中且转染效率在90%左右;Bmi-1 siRNA转染Hela细胞Bmi-1 mRNA及Bmi-1蛋白表达沉默,Bmi-1表达沉默后抑制Hela细胞增殖并使细胞周期阻滞于G0-G1期,能明显抑制Hela细胞的单细胞增殖能力;同时Ki-67及CyclinD1的表达均明显下降。[结论]siRNA介导的Bmi-1基因的表达沉默能抑制Hela细胞的增殖能力,Bmi-1表达可能与宫颈癌的发生发展相关。     

Bmi-1基因表达对THP-1细胞化疗敏感性的影响

目的:研究Bmi-1表达对急性单核细胞白血病细胞THP-1化疗敏感性的影响,及其相关作用机制。方法:以瞬时转染法将p Genesil-2-Bmi-11 si RNA、p-MSCV-Bmi-1分别转入THP-1细胞中降低、增强Bmi-1的表达。用PCR和Western blot法验证Bmi-1 m RNA和蛋白的表达;MTT法检测喜树碱(CPT)对THP-1细胞增殖及Bmi-1表达对THP-1细胞化疗敏感性的影响;采用免疫荧光法检测细胞中DNA双链断裂标志物γ-H2AX的表达;流式细胞术检测线粒体膜电位及凋亡情况;Western blot法检测Cytochrome C、Caspase 3、Bax和BCL-2蛋白的表达。结果:沉默Bmi-1能够抑制THP-1细胞的增殖并增强THP-1细胞对CPT的敏感性,而Bmi-1过表达促进细胞增殖并减弱THP-1细胞对CPT的敏感性;沉默Bmi-1能够增强CPT诱导的DNA双链断裂,降低线粒体膜电位并促进CPT诱导的细胞凋亡,Bmi-1基因过表达减弱了CPT诱导的DNA双链断裂,线粒体膜电位升高,CPT诱导的细胞凋亡率明显减少。结论:Bmi-1表达能够改变THP-1细胞对CPT的敏感性,其机制可能涉及DNA双链断裂及线粒体凋亡。     

胃黏膜上皮及胃癌细胞中错配修复基因hMLH1蛋白的表达及意义

[目的]探讨hMLH1蛋白作为胃癌预警标记物的可能性。[方法]免疫组织化学SP法半定量检测24例非肿瘤患者胃黏膜上皮、39例胃癌患者癌旁黏膜上皮及癌细胞hMLH1蛋白的表达情况,比较该蛋白在不同黏膜上皮组织中表达的差异性。[结果]hMLH1蛋白表达率在非肿瘤患者胃黏膜上皮为33％,明显低于胃癌患者癌旁黏膜上皮的72％(P=0．003)及癌细胞的74％(P=0．001),但在癌旁黏膜上皮与癌细胞间无显著性差异(P=0.799)。[结论]hMLH1蛋白在胃癌患者癌旁黏膜上皮及癌细胞的表达强于非肿瘤患者胃黏膜上皮表达的现象,提示其作为胃癌预警组织学标记物的可能性。     

子宫颈癌hMLH1表达及细胞增殖活性研究

[目的 ]了解错配修复基因hMLH1蛋白与增殖细胞核抗原 (PCNA)在子宫颈癌中的表达 ,分析它们与子宫颈癌临床病理生物学行为的关系及在子宫颈癌发病中的意义。 [方法 ]免疫组织化学SP法检测 6 2例宫颈癌和 30例非癌子宫颈上皮细胞hMLH1蛋白与PCNA表达的情况 ,并分析二者的关系及它们的表达与病理参数的关系。[结果 ]hMLH1蛋白在子宫颈癌组阳性表达率为5 6 .5 % ,低于非癌上皮组的 6 3.3% ;PCNA在子宫颈癌组阳性表达率为 79.0 % ,明显高于在非癌上皮组的 2 0 .0 % (P <0 .0 5 )。子宫颈癌组hMLH1蛋白表达阳性例PCNA的阳性表达率 82 .9%高于hMLH1蛋白表达阴性例的 74 .1 % ;非癌上皮组hMLH1表达阳性例PCNA阳性表达率 2 6 .3%也高于hMLH1蛋白表达阴性例的蛋白蛋白 9.1 % ,即在hMLH1蛋白高表达的组织中PCNA表达增高。hMLH1蛋白阳性表达率在临床Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期子宫颈癌分别为 6 1 .4 %、4 6 .7%、33.3% ,有逐渐降低趋势 ;在高、中分化鳞癌与低分化鳞癌分别为 6 0 %与 5 2 .3% ;淋巴结转移组为5 0 % (4 / 8) ,无淋巴结转移组为 6 4.4 % (2 9/ 4 5 )。PCNA阳性表达率在临床Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期子宫颈癌分别为 81 .8%、73.3%、6 6 .7% ;在高、中分化鳞癌与低分化鳞癌分别为 71 .8%与 91 .3% ;淋巴结转移组为 87.5 %     

Gefitinib获得性耐药产生时非小细胞肺癌上皮性标志EGFR及E-cadherin表达的变化

[目的]了解gefitinib获得性耐药产生时非小细胞肺癌上皮性标志EGFR及E-cadherin表达的变化。[方法]采用逐步递增药物浓度、间歇作用体外诱导法诱导人肺腺癌NCI-H1975细胞株gefitinib获得性耐药;倒置显微镜下观察亲本细胞株和耐药细胞株在gefitinib作用前后的细胞形态学变化差异;细胞计数法描绘耐药细胞株和亲本细胞株的生长曲线并计算群体倍增时间;免疫细胞化学法检测耐药细胞株及亲本细胞株的EGFR及E-cadherin蛋白表达状态,并比较二株细胞间两种蛋白表达的差异。[结果]历时6个月诱导建成人肺腺癌gefitinib耐药细胞株NCI-H1975/GR。Gefitinib作用后耐药细胞株NCI-H1975/GR的细胞形态变化与亲本株NCI-H1975有所不同;在gefitinib的作用下,NCI-H1975/GR细胞体积变小,部分细胞变为纺锤形;NCI-H1975/GR细胞株群体倍增时间延长7.14 h(P<0.05);免疫细胞化学结果显示:与亲本株比较,虽然耐药细胞株NCI-H1975/GR细胞细胞膜EGFR蛋白的表达无明显变化,但在细胞浆的表达明显增高;E-cadherin在细胞膜的表达明显降低。[结论]非小细胞肺癌产生gefitinib获得性耐药后EGFR蛋白在细胞浆积聚;而以E-cadherin为代表的上皮分化标记表达减弱。     

血液病理学在医学检验专业的教学实践

随着WHO淋巴系与髓系肿瘤分类在国内的推行,血液病理学检查已成为诊断血液病的重要指标。在医学检验专业开设血液病理学十分必要,这是临床工作的实际需求,也是对血液学检验教学的重要补充。大连医科大学医学检验专业已开设此课程2年,获得满意的教学效果。     

沉默Bmi-1表达对K562/ADM细胞体内外增殖能力的影响

目的:观察沉默Bmi-1表达对慢性髓系白血病阿霉素耐药细胞株-K562/ADM细胞增殖的影响并初步探讨其分子机制。方法:将Bmi-1小干扰RNA(siRNA)序列转染到K562/ADM细胞中降低其Bmi-1的表达;采用MTT法、软琼脂集落形成实验、裸鼠成瘤实验检测沉默Bmi-1表达对K562/ADM细胞体内外增殖能力的影响;应用Western blot检测Bmi-1、PTEN、p-AKT等蛋白表达;免疫组织化学实验分析Bmi-1和Ki-67的表达情况。结果:Bmi-1基因的沉默能够抑制K562/ADM细胞的增殖活性、集落形成及裸鼠成瘤能力;Bmi-1基因沉默后,干扰组PTEN表达明显升高,而p-AKT活性明显下降;p-AKT抑制剂-LY294002处理K562/ADM细胞后,p-AKT表达降低,集落形成及裸鼠成瘤能力相比K562/ADM细胞降低;PTEN抑制剂-Bpv处理K562/ADM-S1细胞后,PTEN的表达降低,而p-AKT表达、集落形成及裸鼠成瘤能力得以重塑;Bmi-1基因沉默使得肿瘤组织中Bmi-1与Ki-67表达均下降。结论:Bmi-1基因有可能参与了对K562/ADM的体内外增殖能力的调控,PTEN/pAKT信号通路可能涉及其中。     

人胃癌细胞BGC-823顺铂耐受后hMSH2蛋白表达下降

[目的 ]初步探讨耐药性产生与错配修复蛋白hMSH2表达的关系 ,以证明其功能丧失是肿瘤细胞产生耐药性的机制之一。[方法 ]1.逐步递增顺铂浓度、间歇作用体外诱导法 ,诱导人胃癌细胞株BGC - 82 3产生顺铂耐受性 ;2 .MTT法检测耐药指数并用免疫细胞化学法检测耐受前后肿瘤细胞表达耐药相关蛋白LRP、GST -π的差异 ;3.免疫细胞化学法检测耐受前后肿瘤细胞表达hMSH2蛋白的差异。[结果 ]与BGC - 82 3相比 ,经耐药诱导所产生的BGC - 82 3/cDDP细胞出现了对顺铂的耐受 ,耐药指数为 3.93;且LRP和GST -π蛋白表达增强 (P <0 .0 1) ,hMSH 2蛋白的表达明显减弱 (P <0 .0 1)。[结论 ]错配修复基因hMSH2蛋白功能降低导致的肿瘤细胞基因不稳定性可能是肿瘤细胞耐药性产生的原因之一。     

肠癌、胃癌化疗药物敏感性的研究

目的　研究胃、肠癌癌细胞在8种不同抗癌药物作用下的细胞抑制率,以筛选出敏感性较强的化疗药物。方法　用微量细胞培养———四氮唑(MTT)法对43例肠癌(包括直肠癌、结肠癌)、33例胃癌新鲜瘤组织进行顺铂(DDP)、卡铂(CBP)、氟尿嘧啶(FU)、丝裂霉素(MMC)、长春新碱(VCR)、羟基喜树碱(OPT)、环磷酰胺(CTX)和表阿霉素(EADM)8种化疗药物进行敏感性检测。结果　上述药物对肠癌细胞的抑制率由高到低依次为DDP、CBP、MMC、FU、CTX、VCR、OPT、EADM,对胃癌细胞依次为DDP、CBP、FUMMC、CTX、VCR、OPT、EADM。肠癌细胞中高度敏感率>50%的药物依次为MMC、FU、DDP、CBP;总敏感率>50%的药物依次为DDP、MMC、FU、CBP。在胃癌细胞中高度敏感率>50%的药物依次为DDP、CBP;总敏感率>50%的药物依次为DDP、CBP、MMC、FU、CTX、VCR。其中胃癌细胞对CTX、VCR的敏感率明显高于肠癌细胞。结论　同一类型肿瘤对抗癌药物的反应虽有一定的共性,但不同个体间存有显著差异。因此,体外检测人实体瘤细胞对化疗药物的敏感性可为临床化疗提供指导,而MTT法是目前临床检测化疗药物敏感性较为准确的方法。