红藻氨酸对大鼠海马锥体细胞钙电流的影响

目的：应用膜片钳技术,观察红藻氨酸（KA）对大鼠海马锥体细胞ca2＋电流的影响,以研究癫痫的发病机制。方法：采用酶加机械分离法制备出生10～12d的大鼠海马锥体神经元标本,用全细胞膜片钳技术测定其生理学特性及观察KA对ca2＋电流的影响。结果：分离出的海马锥体细胞形态正常,有较长突起;用膜片钳技术证实,其保存了主要的离子通道活性。KA20μmol／L和100μmol／L的浓度均可使海马锥体细胞ca2＋电流峰值增大（n=8,P〈0．01）。结论：①大鼠海马锥体神经细胞具有明显的突起,细胞膜表面光洁、晕光好,适用于膜片钳实验研究;②KA使ca2＋内流增加,引起“Ca”超载”导致细胞毒性等一系列反应;③KA通过激活α-氨基羟甲基恶唑丙酸（AMPA）受体,诱发快速的兴奋性突触后电位（EPSP）,参与兴奋性突触传递。AMPA受体的激活可能是癫痫的发病机制之一。     

大鼠海马锥体神经元的急性分离方法

目的：建立一种适用于膜片钳技术的大鼠海马锥体神经元急性分离方法,并对其离子通道进行描述。方法：采用酶加机械分离法制备10~12 d鼠龄的大鼠海马锥体神经元,用全细胞膜片钳技术测定其生理学特性。结果：分离出的神经元形态正常,有较长突起;用膜片钳技术证实,其保存了主要的离子通道活性。结论：建立一种简单快速的适用于膜片钳技术的大鼠海马锥体神经元急性分离方法。     

胰淀素抑制高糖刺激INS-1细胞内钙离子浓度升高的作用机制

 目的 分析阐明胰淀素短时间作用于INS-1细胞、抑制高糖刺激的细胞内钙离子浓度（［Ca²⁺］_i）升高的机制。方法 采用钙离子荧光指示剂Fluo-4/AM负载细胞后,激光共聚焦显微镜下连续动态观察INS-1细胞经胰淀素孵育前后在葡萄糖、KCl、咖啡因和卡巴胆碱存在条件下［Ca²⁺］_i荧光强度变化。结果 （1）单纯16.7 mmol/L葡萄糖刺激使细胞内钙离子荧光强度变化的曲线下面积（AUC）为990±16;0.5 μmol/L胰淀素使16.7 mmol/L葡萄糖刺激的胞内荧光强度有所下降（AUC为831±10）, 1.0、5.0、10.0 μmol/L胰淀素均可使细胞内荧光强度显著降低（AUC分别为555±9、535±6、531±5）,与单纯葡萄糖刺激组比较差异有统计学意义,且呈现剂量依赖趋势。（2）10.0 μmol/L胰淀素可使30 mmol/L KCl刺激的荧光强度明显减低,与单纯KCl刺激组相比（AUC：168±5比311±11）差异有统计学意义。（3） 10.0 μmol/L胰淀素预处理后咖啡因和卡巴胆碱刺激的胞内荧光强度与单纯咖啡因和卡巴胆碱刺激组相比差异无统计学意义。结论 高浓度胰淀素的短时间作用对INS-1细胞经咖啡因和卡巴胆碱刺激的内质网鱼尼丁受体(ryanodine receptor,RyR)、三磷酸肌醇(IP₃)钙库释放没有影响,但可使高糖及KCl刺激的胞内荧光强度降低。推测胰淀素短时间作用使 ［Ca²⁺］_i减少的现象,主要是通过影响膜上钙通道实现的,与胞内钙库的释放无直接相关性。     

胰淀素对大鼠胰岛β细胞电压门控L-型钙通道的影响

目的 观察胰淀素对大鼠胰岛β细胞电压门控L-型钙通道的影响.方法 用全细胞膜片钳技术观察胰淀素作用前后胰岛β细胞电压门控L-型钙通道门控特性、电流变化.结果 在葡萄糖5.5 mmol/L条件下,大鼠胰岛β细胞L-型钙通道电流约在-40 mV激活,+20 mV左右达高峰,峰值约为-120 pA,胰岛素分泌量为(0.76±0.12)μg/L;16.7 mmol/L葡萄糖刺激下峰电流电压左移、峰电流达-140 pA左右,胰岛素分泌量为(1.78±0.13)μg/L.用0.5、1.0、5.0、10.0μmol/L浓度胰淀素分别孵育胰岛β细胞,在5.5、16.7 mmoL/L葡萄糖条件下,0.5、1.0μmol/L胰淀素浓度的峰电位激活电压、电流、胰岛素分泌最与对照组相比,差异均无统计学意义,在5.5 mol/L葡萄糖条件下,5.0、10.0μmol/L胰淀素浓度的激活电雎增加为-30 mV,峰电流分别减小至-80 pA、-60 pA左右,胰岛素分泌量分别降低至(0.49±0.11)、(0.36±0.12)μg/L;在16.7 mmol/L葡萄糖条件下,激活电压由-40 mV增加到-30 mV,峰电流分别减小至-80 pA、-40 pA,胰岛素分泌量分别降低至(1.20±0.13)、(0.89±0.14)μg/L,与对照组相比差异具有统计学意义.结论 葡萄糖刺激胰岛β细胞电压门控L-型钙通道开放与胰岛素分泌同步,胰淀素抑制胰岛β细胞电压门控L-型钙通道开放和抑制胰岛素分泌作用同步并与其作用浓度正相关.     

可溶性Aβ25-35对大鼠海马CA3区神经元延迟整流钾电流的抑制作用

目的研究可溶性β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)对大鼠海马CA3区锥体神经元延迟整流钾电流(IK)的影响。方法采用酶消化法急性分离新生大鼠海马CA3区神经元,全细胞膜片钳技术观察加入可溶性Aβ25-35后IK的变化。结果可溶性Aβ25-35对IK的作用具有时间依赖性,IK随Aβ25-35作用时间的延长而减小,加药5～7min后作用趋于稳定。可溶性Aβ25-35对IK有明显抑制作用,加入5μmol/LAβ25-35前后IK峰值分别为(6.987±1.152)和(2.540±0.349)nA(n=8,P<0.01);该抑制作用没有明显的浓度依赖性,1、2.5和5μmol/L3个浓度的Aβ25-35使IK峰值减小率都在60%左右。5μmol/LAβ25-35可显著影响IK激活过程,作用前后的半数激活电压分别为(4.114±0.730)和(-5.463±0.950)mV(n=15,P<0.05),但不改变激活曲线的斜率因子。结论可溶性Aβ25-35对海马CA3区神经元IK的抑制作用可能是其产生神经毒性的作用机制之一。     

非凝聚态淀粉样蛋白对大鼠海马神经元瞬时外向钾电流的影响

目的 探讨凝聚前的β淀粉样蛋白(Aβ25-35)对新生大鼠海马CA3区锥体神经元瞬时外向钾电流(IA)的影响.方法 采用伞细胞膜片钳技术记录非凝聚态Aβ25-35作用前后IA峰值和动力学变化.结果 非凝聚态Aβ25-35对新生大鼠海马CA3区神经元IA有明显抑制作用,其效应具有时间依赖性,浓度依赖性和电压依赖性,同时使IA的激活动力学曲线和失活动力学曲线均明显左移.结论 β淀粉样蛋白在凝聚成老年斑之前就对大鼠海马CA3区神经元的瞬时外向钾电流有抑制作用,町能是其产生神经毒性作用的机制之一.