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1.
目的:通过噬菌体展示技术筛选iNOS特异性抑制肽。方法:将iNOSFAD结合区及其附近序列的基因片段装入pET-28A( ),在大肠杆菌BL21中表达,His.bind^TM亲和层析柱纯化目的蛋白,使用纯化蛋白筛选Ph.D.-12^TM噬菌体库,筛选iNOS活性抑制作用较高的噬菌体克隆,测序并合成其中具有一致序列的短肽。结果:得到具有较高表达量的目的蛋白,经His.Bind^TM柱亲和层析纯化后纯度大于95%,以纯化蛋白筛选Ph.D.-12^TM噬菌体库,经4轮筛选获得10株iNOS活性抑制作用较高的噬菌体克隆,测序发现其中5株序列完全相同,合成该12肽,初步研究表明其对iNOS表现为高浓度抑制,低浓度兴奋的作用,而对nNOS及eNOS则没有影响。结论:以iNOSFAD片段蛋白为靶蛋白筛选得到的克隆对iNOS活性具有特异性影响,可根据这些特征设计合成小分子前导药物,创造新的活性药物。 相似文献
2.
人胃癌肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的体外诱导培养和抗肿瘤作用 总被引:3,自引:0,他引:3
人胃癌肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的体外诱导培养和抗肿瘤作用扬州医学院(扬州225001)吴明生,徐立春,童鲲南京军事医学研究所许祥裕,丁树标肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)在抗肿瘤中的重要作用比LAK细胞强50~100倍[1,2].近年来已成为国内外研究的... 相似文献
3.
4.
细胞性一氧化氮供体的建立及其对肿瘤细胞凋亡的诱导效应 总被引:5,自引:0,他引:5
目的一氧化氮(NO)供体细胞系的建立及其对肿瘤细胞凋亡的诱导效应研究。方法采用3H-胍氨酸转换法进行NO合成酶(NOS)活性测定;亚硝酸盐检测;DNA片段的提取及凝胶电泳分析;凋亡细胞的DAPI染色观察;Westernblot分析。结果将iNOS真核表达质粒、pCMV/iNOS转染至Sp2/0骨髓瘤的变异株中,并获得能稳定表达iNOS和合成NO的重组细胞系(SPmt/iNOS),表达iNOS的效率为每升培养物含400μg蛋白。利用该细胞作NO细胞性供体,成功地证实NO能诱导Sp2/0骨髓瘤细胞发生凋亡。结论所建细胞性NO供体应用于NO的生物学功能研究具有NO合成稳定;更能模拟体内细胞间NO的信息传递过程;不需任何外源刺激即可合成NO等独特优点。所建NO供体细胞可以用于肿瘤细胞凋亡的研究。 相似文献
5.
目的 双吡啶单肟HI 6是目前救治小鼠和家犬等神经性毒剂中毒较为有效的胆碱酯酶重活化剂 ,但仍需进一步验证HI 6对高等动物的疗效 ,为HI 6过渡到人体临床应用提供依据。As 80方是作者以HI 6为主药组成的抗神经毒复方。本研究采用与人较为接近的灵长类动物猕猴 ,通过救治猕猴梭曼中毒进一步验证As 80方的效价。方法 6只健康猕猴随机分为 2个实验组和 1个对照组。第一实验组猴im 10 μg·kg- 1梭曼 ,第二实验组猴im 2 5μg·kg- 1梭曼。待中毒猴出现惊厥时 ,立即给实验动物一次imAs 80方注射液 0 .1mL·kg- 1,对照动物注射等剂量的生理盐水。观察猴肌注梭曼后中毒症状出现时间 ,实验动物用As 80方救治后中毒症状缓解情况及时间 ,实验动物 3,5 ,7d活存率及恢复情况。结果 猴肌注梭曼后其中毒症状与狗梭曼中毒的症状相似 ,主要表现为肌颤、流涎、惊厥等 ,瞳孔缩小不明显 ,中毒症状的轻重及出现时间快慢与梭曼剂量大小呈正相关。As 80方救治猴梭曼中毒的效价明确。第一实验组 (10 μg·kg- 1梭曼 ) 7d活存率为 2 /2 ,第二实验组 3,5 ,7d活存率分别为 3/3,2 /3,1/3。对照组 1只动物于中毒 15h内死亡。实验结果还表明 ,As 80号复方对猕猴梭曼中毒症状控制好 ,治疗后机体恢复快。结论 实验结果均表明HI 6、 相似文献
6.
人重组促红细胞生成素增强耐缺氧作用的实验研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的观察人重组促红细胞生成素(EPO)对小鼠缺氧耐受力的影响。方法小鼠随机分为EPO组和对照组,经皮下注射不同剂量的EPO和0.9%氯化钠注射溶液,1次/d,连续1周。检测小鼠血红蛋白、红细胞比容改变,测定常压耐氧实验、亚硝酸中毒存活试验以及急性脑缺血性缺氧试验等指标。结果EPO能明显增加小鼠血液内血红蛋白含量和红细胞比容(与对照组相比,P<0.01),缺氧存活时间显著延长(与对照组相比,P<0.01)。结论EPO能明显增强机体的耐缺氧能力。 相似文献
7.
8.
人EPO cDNA基因在CHO细胞中的稳定表达 总被引:2,自引:0,他引:2
建立稳定表达人红细胞生成素(EPO)的工程细胞株。方法:用 DNA磷酸钙共转染法,将人EPO cDNA的表达质粒 pCDB与标志质粒 pSV-dhfr共转染到 CHO-dhfr-细胞中。用 ELISA法检测到 70个克隆的细胞培养上清,筛选出50个克隆细胞系。结果:经MTX加压扩增,获得4系高效表达EPO的细胞系(B4、C3、F10、G7),表达量为 2. 2~10 μg/(106 cell· 24 h),EPO的分泌量在上述细胞系扩增了 11~31倍。 F10细胞系表达量为最高,并进一步亚克隆纯化。其中F10-6亚克隆细胞株的平均表达水平为10 ug/(106cell·24 h),细胞冻存后复苏传代15次,EPO的表达水平无明显改变。结论:以F10-6亚克隆细胞株建立了工程细胞株。 相似文献
9.
目的 探讨TIL免疫治疗晚期大肠癌的疗效。方法 18例患者进行TIL治疗,观察治疗前后临床症状,检测CD4/CD8值、SIL2R、NKC、BCG等免疫指标。结果 患者腹水明显减少或消失,瘤体部分缩小,存活期延长,体重增加,疼痛减轻,免疫功能明显提高。结论 TIL治疗晚期大肠癌可调节机体免疫平衡,促进机体免疫功能提高,增强机体的抗癌消瘤能力,有关轻痛苦、延长寿命的作用。 相似文献
10.