I型糖尿病患者单个核细胞对大鼠胰岛素分泌的影响

目的：探讨Ⅰ型糖尿病患者发病过程中的细胞免疫变化。方法：采集新发病及病程较长的Ⅰ型糖尿病患者和Ⅱ型糖尿病患者的外周血单个核细胞(PBMCs)与新生大鼠的胰岛细胞共同培养24 h,观察PBMCs对胰岛素分泌的影响。用正常人的PBMCs作对照。结果：只有初发病的Ⅰ型糖尿病患者的PBMCs对大鼠胰岛素的分泌有抑制作用,表现为刺激后胰岛素分泌减少((127.4±26.3)mU／L(n=12)Vs(209.6±41.8)mU／L(空白对照n=6)及(200.9±41.7)mU／L(健康对照n=5),P＜0.05)。结论：初发病的Ⅰ型糖尿病患者存在细胞免疫的异常;且这种异常主要存在于发病前后的较短的时间内;这种异常可能是机体胰岛功能减退的原因之一。     

Ⅰ型糖尿病患者单个核细胞对大鼠胰岛素分泌的影响

目的 :探讨Ⅰ型糖尿病患者发病过程中的细胞免疫变化。方法 :采集新发病及病程较长的Ⅰ型糖尿病患者和Ⅱ型糖尿病患者的外周血单个核细胞 (PBMCs)与新生大鼠的胰岛细胞共同培养 2 4h ,观察PBMCs对胰岛素分泌的影响。用正常人的PBMCs作对照。结果 :只有初发病的Ⅰ型糖尿病患者的PBMCs对大鼠胰岛素的分泌有抑制作用 ,表现为刺激后胰岛素分泌减少 ((12 7 4± 2 6 .3)mU/L(n =12 )Vs(2 0 9.6± 41.8)mU/L(空白对照n =6 )及(2 0 0 9± 41 7)mU/L(健康对照n =5 ) ,P <0 .0 5 )。结论 :初发病的Ⅰ型糖尿病患者存在细胞免疫的异常 ;且这种异常主要存在于发病前后的较短的时间内 ;这种异常可能是机体胰岛功能减退的原因之一。     

泪液乳铁蛋白夹心法酶联免疫吸附试验的建立及初步临床应用

泪液乳铁蛋白（lactoferrin，LF）是泪液中最主要的抗菌蛋白质，对眼表组织起积极防护作用，其含量在很大程度上能反映泪腺的外分泌功能。干眼是与泪膜密切相关的眼表疾病，病因复杂、临床表现多样，诊断存在较大困难。多项研究表明，泪液LF含量检测可能是诊断干眼最敏感特异的指标。本研究应用噬菌体抗体库技术和动物免疫制备了抗人LF单链抗体和兔抗人LF多克隆抗体，建立LF的双抗夹心酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）法，以检测泪液LF含量，评价该指标对于干眼的诊断价值。     

5个X染色体STR基因座的群体遗传学分析

目的 调查苏州汉族群体中5个X-STR的等位基因和单倍型分布,以及分析这些基因座间的连锁不平衡关系.方法 应用Chelex法提取样本DNA,PCR扩增5个X-STR,应用自动测序仪对PCR产物进行分型.结果 苏州汉族群体中,DXS7423、DXS10147、DXS10146、DXS10134、DXS8377分别观察到5、6、15、21、15个等位基因;男女性样本间,DXS7423、DXS10147、DXS10134的等位基因频率差异无统计学意义,P值分别为0.161、0.756、0.179;DXS10146、DXS8377等位基因频率差异具有统计学意义,P值分别为0.008和0.005.5个X-STR的观察杂合度在0.505～0.845间,DPf值在0.684～0.977间,DPm值在0.487 ～0.902间,MCEtrio值在0.469～0.894间,MCEduo值在0.266～0.860间.男性样本中,观察到111种单倍型,单倍型变异度为0.9916.结论 苏州汉族群体中,5个X-STR中DXS10146、DXS10134、DXS8377多态性较好;5个X- STR构成的单倍型鉴别能力较高.     

苯扎氯铵对人结膜上皮细胞黏蛋白MUC1表达的影响

目的 探讨防腐剂苯扎氯铵(BAC)对体外培养的人结膜上皮细胞黏蛋白MUC1表达的影响及毒性作用.方法 采用培养的3～5代人结膜上皮细胞,将不同浓度(0.0100%、0.0050%、0.0010%、0.0005%、0.0001%)的BAC单次作用于结膜上皮细胞15 min,分别于处理细胞后0、6、12、24、48、72 h提取RNA及蛋白,采用RT-PCR及Western杂交方法检测MUC1表达水平.结果 0.0100%和0.0050%BAC作用后12～72 h可观察到结膜上皮细胞MUC1基因表达下调,0.0010%和0.0005%BAC作用后,24～48 h出现MUC1基因表达的下调,72 h恢复.0.0100%BAC作用后6～72 h检测到MUC1蛋白表达下降,而0.0050%BAC作用后12～72 h MUC1蛋白表达下降,0.0010%BAC作用后72 h MUC1蛋白表达减少.结论 BAC具有下调人结膜上皮细胞MUC1表达的作用,其下调作用具有时间依赖性和剂量依赖性.     

角膜中期保存液的基础研究及初步临床应用

目的研制一种配方简单、适合我国国情的角膜中期保存液。方法人角膜27片、23片分别保存于角膜中期保存液与Optisol GS液,保存结束取周边角膜行苔盼兰和茜素红联合染色,计算角膜内皮细胞密度及角膜内皮细胞活性率,比较两组数据,保存7d和14d各取2片角膜进行扫描电镜检查。取8片角膜保存于中期保存液,所保存角膜用于临床角膜移植,对患者定期进行裂隙灯检查,角膜内皮照相。结果角膜中期保存液组平均保存时间（8.39±0.72）d,角膜内皮细胞平均密度为（2743.48±366.54）个/mm^2;Optisol GS液组平均保存时间（7.58±0.34）d,角膜内皮细胞密度为（2568.95±245.47）/mm^2,两组比较,差异无统计学意义;角膜中期保存液组的内皮细胞平均活性率（96.65±2.59）%高于Optisol GS液组（93.47±3.81）%,差异具有统计学意义。角膜中期保存液所保存角膜用于临床,4例病人术后随访4d～11m,角膜平均内皮细胞计数（2285.75±534.05）个/mm^2。结论角膜中期保存液可活性保存人角膜片长达2w,其保存效果与Optisol GS液相似,初步临床使用显示了较好的效果。     

应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术检测载脂蛋白 E基因多态性

[目的]应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术检测人类载脂蛋白 E(apoE)基因的多态性.[方法]用 PCR扩增出含 apoE两个单核苷酸多态性( SNPs)位点 (334 T/C和 472 C/T)的 DNA片段作为模板,经延伸反应,产物纯化后利用 MALDI-TOF MS进行检测.从而确定样本 apoE基因型.[结果]应用本技术对 50例广东地区无关个体进行 apoE 基因多态性检测,共检出 3种常见的 apoE基因型,其中以 apoEΣ 3/3型最多,占总数的 74.00%;等位基因频率分布以ε 3( 87.00%)最高.[结论]本实验建立的基于 MALDI-TOF MS与引物延伸技术检测 apoE基因多态性的方法 ,具有快速、准确和可靠的特点.     

22个常染色体单核苷酸多态性的群体遗传学研究

目的 评估非二态单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)的遗传多态性及其法医学鉴别效能.方法 采集100名广东东莞汉族个体,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱方法对22个常染色体SNP进行分型.结果 广东汉族群体中,9个SNP观察到1个等位基因,4个SNP是二态SNP,9个SNP观察到3个等位基因.13个多态性SNP的累积个人识别率和非父排除率分别为0.99998、0.9330,9个非二态SNP的累积个人识别率和非父排除率分别为0.9998、0.8956.单亲鉴定时,13个多态性SNP的累积非父排除率分别为0.7266,9个非二态SNP的累积非父排除率为0.6405.结论 个人识别和亲权鉴定方面,非二态SNP具有较高的鉴别效能.