人载脂蛋白E基因型测定方法的建立

目的：建立一种准确、简便和经济的适用于大范围测定载脂蛋白Ｅ基因型的方法。方法：自中血中采用ＴＫＭ法提取人基因组ＤＮＡ,ＰＣＲ－ＲＦＬＰ确定载脂蛋白Ｅ的基因型,硝酸银染色聚丙烯酰胺凝胶,若银染效果不佳可用硝酸脱色后重染。结果：ＴＫＭ法获得ＤＮＡ在产量和质量上均能满足ＰＣＲ需求;电泳凝胶经银染可得清晰的ＤＮＡ特异带,据此能准确确定样品载脂蛋白Ｅ的基因基因型;用硝酸溶液脱色后的凝胶经重染仍可得到清晰的图     

脂蛋白脂肪酶基因突变的研究

目的：筛查国人脂蛋白脂肪酶(LPL)基因的突变，并探讨其与高甘油三酯血症的关系。方法：对高甘油三酯血症组(48例)和正常甘油三酯对照组(121例)的各扩增片段进行分析，电泳图谱异常者进行PCR产物测序。对于频率较高的多态性位点，引入限制性核酸内切酶位点利用PCR-RFLP进行鉴定。结果：在高甘油三酯血症人群中，检出2例内含子3受位剪接点上游6bp的C→T转换的突变杂合子，1例外显子5Pm^207→Leu突变杂合子，在全部样品中检出1例Ser^447→stop突变纯合子，50例Ser^447→stop杂合子。结论：天津地区人群中存在着LPL基因突变，除Ser^447→stop外，内含子3和外显子5的突变多与高甘油三酯血症相关，可能是高甘油三酯血症的遗传易感因子。     

载脂蛋白E等位基因与血清胆固醇水平的关系

本文报告95例健康人组与123例非继发性高脂蛋白血症疾病组的载脂蛋白 E 表型分布和血脂水平。疾病组载脂蛋白 E 等位基因ε_4频率和血清总胆固醇平均值分别为10.95%和189mg/dl,健康组相应数值分别为6.40%和150mg/dl;疾病组总胆固醇高于平均值人群的ε_4频率比低于平均值人群的ε_4频率明显增高,分别为14.05%和8.30%;分别计算具不同等位基因人群的血消总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇的平均水平,二者均是ε_4最高,ε_3居中:ε_2最低。这些结果提示,载脂蛋白 E 是影响机体血清胆固醇水平的内在因子,等位基因ε_4是机体高胆固醇血症的遗传易患因素。     

人血清载脂蛋白E表型的测定(简报)

人血清载脂蛋白E显示有明显的多形性,不同的Apo E具有不同的受体结合活性。Apo E的某些表型与高脂蛋白血症和动脉粥样硬化的形成关系密切,Apo E_2纯合子是Ⅱ型高脂蛋白血症必要的诊断条件之一。 国外测定Apo E表型首先利用长达约20小时的超速离心分离人血清VLDL,然后进行等电点聚焦电     

国人脂蛋白脂肪酶基因突变的筛查

目的筛查天津地区脂蛋白脂肪酶基因突变情况,并探讨其对血脂水平的影响。方法利用聚合酶链反应—单链构象多态性分析技术对386例样本(血脂正常组278例,血脂异常组108例)的脂蛋白脂肪酶基因进行突变筛查,对可疑突变的扩增样品进行DNA序列测定。对于频率较高的多态性位点,引入限制性核酸内切酶位点利用聚合酶链反应限制片长多态性进行鉴定。结果在386例样本中,共检出4种突变,检出率为14.5%,其中1例为目前国内外未见报道的外显子3 Leu103→Leu同义突变杂合子,1例为目前亚洲首报的外显子5 Pro207→Leu突变杂合子,3例内含子3受位剪接点上游6 bp的C→T转换的突变杂合子,1例Ser447→stop突变纯合子,50例Ser447→stop突变杂合子。结论我国天津地区人群存在着广泛的脂蛋白脂肪酶基因变异,既具有与大多数国家相同的Ser447→stop多态性位点,也具有自身的特点。     

老年人血脂水平与载脂蛋白E等位基因的关系

为了解老年人血脂水平与载脂蛋白Ｅ基因多态性的关系，并探讨载脂蛋白Ｅ等位基因对老年人血脂水平的内在影响，利用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法测定了载脂蛋白Ｅ基因型，并用酶学方法对其血脂水平进行了测定。结果发现存在五种不同基因型：与携有ε３等位基因的人群相比，携有ε４等位基因的人群倾向具有较高的总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇水平以及较低的甘油三酯水平，而携有ε２等位基因的人群则有较低的低密度脂蛋白胆固醇水平以及较高的     

一种新的脂蛋白脂肪酶基因突变（C^56→T）

目的：筛查国人（天津地区）脂蛋白脂肪酶基因突变情况，并探讨其对血脂水平的影响。方法：利用聚合酶链反应-单链构象多态性分析技术，对386例患者（血脂正常组278例，血脂异常组108例）的脂蛋白脂肪酶基因进行突变筛查，对可疑突变的扩增样品进行DNA序列测定。结果：在386例样本中，检出1例外显子3 C^56→T（Leu^103→Leu）同义突变杂合子。结论：新LPL突变（C^56→T）的发现，对进一步阐述IJPL结构与功能的关系有重要的参考价值。     

胆固醇酯转运蛋白D~(442)→G突变对高密度脂蛋白胆固醇水平的影响

目的探讨胆固醇酯转运蛋白D442→G变异对国人血脂水平的影响。方法收集天津地区189例健康人群,检测其血脂水平,并应用聚合酶链反应限制片长多态性分析方法对胆固醇酯转运蛋白D442→G突变进行检测。结果高密度脂蛋白胆固醇水平较高组与对照组D442→G等位基因频率分别为6.03%和1.53%,具有统计学差异(P<0.05)。D442→G基因变异携带组高密度脂蛋胆固醇水平显著高于对照组(P<0.01),其它血脂水平无显著性差异。结论胆固醇酯转运蛋白第15外显子D442→G突变与高密度脂蛋白胆固醇水平升高密切相关。     

PCR-SSCP法测定人载脂蛋白E基因型

目的：建立一种既可以测定人载脂蛋白E常见基因型，又可以筛查罕见异构体的新方法。方法：利用RFLP和SSCP法对人载脂蛋白E编码基因的PCR扩增产物进行基因型的检测和分析，采用双脱氧DNA链合成终止法进行PCR产物直接测序，确认基因型的测定结果。结果：两种方法测得的基因型结果完全相符，并经测序证实结果正确。结论：PCR-SSCP法对于单碱基突变的高检出率使其具有筛查罕见异构体的可能，同时该法还可以准确快捷地进行人载脂蛋白E常见基因型的测定。