尘螨肠道微生物蛋白Hypothetical protein CE2118的表达及纯化

目的 研究尘螨肠道微生物蛋白Hypothetical protein CE2118的表达和纯化,为研究其在尘螨疫苗免疫治疗中的作用奠定基础。方法 采用生物信息学方法,根据GenBank中Hypothetical protein CE2118蛋白的基因序列,将其中稀有密码子改造为大肠杆菌常用密码子并进行二级结构优化,合成Hypothetical protein CE2118基因,构建原核表达载体pGEX 6P-1-hypothetical protein CE2118并经酶切鉴定,在大肠埃希菌Rosetta(DE3)中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,重组产物采用GST亲和层析纯化柱纯化。结果 经密码子改造和二级结构优化后Hypothetical protein CE2118基因长度为588bp,其编码蛋白理论分子量为21 kDa。重组表达载体经酶切鉴定与理论推测结果相符,该基因经IPTG诱导在大肠埃希菌Rosetta(DE3)中得到高效的可溶性表达,纯化后的重组蛋白分子量约为21 kDa,其单一蛋白纯度达95%以上。结论 本研究成功构建了Hypothetical protein CE2118基因的pGEX6P-1原核重组质粒,获得的可溶性重组蛋白为进一步研究肠道微生物蛋白Hypothetical protein CE2118在尘螨疫苗免疫治中的作用机理奠定基础。     

转位蛋白配体XBD173对香烟烟雾提取物诱导小鼠肺炎症反应的减轻作用及其机制

目的：探讨转位蛋白(TSPO)配体XBD173对香烟烟雾提取物(CSE)诱导小鼠肺炎症反应和巨噬细胞M1型极化的影响,阐明其相关分子机制。方法：18只成年雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、CSE组和CSE+XBD173组,CSE组小鼠采取20μL CSE滴鼻,CSE+XBD173组小鼠给予相同剂量CSE和腹腔注射10 mg·kg^-1 XBD173。采用HE染色和PAS染色观察各组小鼠肺组织病理形态表现。培养小鼠RAW264.7巨噬细胞,分为对照组、CSE组和CSE+XBD173组,CSE给药浓度为1%,XBD173给药浓度为4 mg·L^-1,对照组给予相同体积的二甲基亚砜;刺激18 h后,流式细胞术检测各组RAW264.7细胞中CD80、CD86、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)和活性氧(ROS)表达水平及细胞凋亡率,Western blotting法检测各组RAW264.7细胞中核因子κB/p65 (NF-κB/p65)和磷酸化NF-κB/p65 (p-NF-κB/p65)蛋白表达水平。采用siRNA敲低RAW264.7细胞中TSPO表...     

桔梗元参汤对过敏性哮喘小鼠气道炎症和黏液分泌的影响及其机制

目的：探讨桔梗元参汤（JGYST）对过敏性哮喘小鼠气道组织炎症和黏液分泌的影响,并阐明其相关作用机制。方法：40只雄性C57BL/J小鼠随机分为对照组、 JGYST组、卵清蛋白（OVA）组及OVA+JGYST组。OVA组和OVA+JGYST组小鼠用50μg OVA腹腔注射致敏,每周2次,致敏后连续7 d用OVA 20μg滴鼻激发哮喘;OVA+JGYST组小鼠每次OVA激发前1 h用JGYST 200μL灌胃,共灌胃7次;对照组用相同剂量的PBS缓冲液腹腔注射、滴鼻和灌胃;JGYST组小鼠用相同剂量PBS缓冲液腹腔注射和滴鼻,用相同剂量JGYST灌胃。采用HE染色和过碘酸-雪夫（PAS）染色观察各组小鼠肺组织病理形态表现并计算炎症评分和PAS评分,流式细胞术检测各组小鼠肺组织中嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、辅助性T淋巴细胞1 (Th1)、辅助性T淋巴细胞2 (Th2)和树突状细胞（DCs）数及成熟DCs百分率和活性氧（ROS）水平,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组小鼠肺组织中白细胞介素4 (IL-4)、白细胞介素10 (IL-10)和肿瘤坏死因子α (TNF-α)mRNA表达...     

25羟维生素D3与抗菌肽在反复上呼吸道感染中的作用研究及相关性分析

目的 探讨25羟维生素D3与抗菌肽在反复上呼吸道感染的作用.方法 选择连续3年就诊的上呼吸道感染患者,其中,1年上呼吸道感染次数大于或等于2次患者46例,男20倒,女26例,平均(32.35±9.10)岁;选择15例人作为对照组,平均(31.35±10.20)岁,对照组在年龄上与上呼吸道感染患者差异无统计学意义(P＞0.05).采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测外周血血清中25羟维生素D3水平和诱导痰上清液抗菌肽LL-37水平并做相关性分析.用人气道上皮细胞株分析25羟维生素D3对抗菌肽LL 37水平影响.结果 反复上呼吸道感染患者外周血血清25羟维生素D3水平低于对照组(P＜0.05),并且反复上呼吸道感染患者诱导痰上清液人抗菌肽LL-37水平低于对照组(P＜0.05).上呼吸道感染平均次数与上呼吸道感染患者外周血25羟维生素D3呈负相关(r=-0.54,P＜0.05),上呼吸道感染平均次数与诱导痰上清液抗菌肽LL-37水平呈负相关(r=-0.65,P＜0.05),上呼吸道感染患者外周血25羟维生素D3和诱导谈上清液抗菌肽LL-37水平呈正相关(r=0.59,P＜0.05).体外细胞实验显示1,25羟维生素D3能上调上皮细胞抗菌肽LL-37表达.结论 25羟维生素D3的缺乏可能是上呼吸道反复感染患抗菌肽LL-37的表达下调的重要原因.     

Lyn对屋尘螨诱导的人支气管上皮细胞中MUC5AC表达的影响及其机制

目的：探讨Lyn对屋尘螨（HDM）诱导的人支气管上皮细胞中MUC5AC表达的影响,并初步阐明其可能的相关作用机制。方法：选取人支气管上皮16HBE细胞,将其分为PBS组（给予PBS）和HDM组（给予1 μg·L^-1HDM）,采用脂质体转染法将LynsiRNA分别转至PBS组和HDM组细胞。构建人MUC5AC启动子荧光素酶报告基因,采用Promega双荧光素酶报告基因试剂盒检测相对荧光素酶活性（RLU）,采用免疫荧光法检测16HBE细胞中MUC5AC的表达,并在共聚焦显微镜下观察。采用Western blotting法检测16HBE细胞中STAT6的表达水平。结果：双荧光素酶报告基因检测,HDM组16HBE细胞中MUC5AC启动子的RLU高于PBS组（P<0.05）;与未干扰时比较,LynsiRNA干扰后HDM组RLU明显升高（P<0.05）。免疫荧光法检测,HDM组MUC5AC表达水平高于PBS组（P<0.05）;与未干扰时比较,LynsiRNA干扰后HDM组MUC5AC表达水平升高（P<0.05）。Western blotting法检测,LynsiRNA干扰后,HDM组细胞中STAT6表达水平升高（P<0.05）。结论：Lyn缺失能增加人支气管上皮细胞中MUC5AC的表达,其机制可能与Lyn调控STAT6信号途径有关。     

白藜芦醇对中性粒细胞性哮喘小鼠肺组织炎症的抑制作用及其机制

目的：探讨白芦藜醇对中性粒细胞性哮喘小鼠肺组织炎症的抑制作用,并阐明其作用机制。方法：选取18只C57BL/6J雌性小鼠,采用脂多糖（LPS）+卵白蛋白（OVA）联合致敏方法建立中性粒细胞性哮喘小鼠模型,随机分为模型组（LPS+OVA组）、白藜芦醇组（Res组,于激发前2 h灌胃30 mg·kg^-1白藜芦醇）和N-乙酰半胱氨酸组（NAC组,于激发前2 h灌胃3 mmol·kg^-1 N-乙酰半胱氨酸）;同时选取6只同周龄小鼠作为正常对照组（PBS组）。于乙酰甲胆碱雾化期间观察各组小鼠的行为学变化,采用肺功能仪分析小鼠气道高反应（AHR）,光学显微镜观察支气管肺泡灌洗液（BALF）中细胞总数和炎症细胞,HE染色观察各组小鼠肺组织病理形态表现,酶联免疫法（ELISA）检测各组小鼠BALF上清中白细胞介素17（IL-17）水平,特异性荧光探针DCF-DA染色分析肺组织活性氧（ROS）水平,丙二醛（MDA）试剂盒检测肺组织匀浆中MDA水平。结果：与PBS组比较,LPS+OVA组小鼠Penh值、细胞总数、炎症细胞、气道炎症及评分均明显升高（P<0.05或P<0.01）,BALF上清中IL-17水平明显升高（P<0.01）,肺组织内ROS荧光强度明显升高,肺匀浆中MDA水平明显升高（P<0.01）。与LPS+OVA组比较,Res组和NAC组小鼠Penh值、细胞总数、炎症细胞、气道炎症及评分明显降低（P<0.05或P<0.01）,BALF上清中IL-17水平均明显降低（P<0.05）,肺组织内ROS荧光强度降低,肺匀浆中MDA水平明显降低（P<0.01）。结论：白藜芦醇能够有效抑制中性粒细胞性哮喘小鼠肺组织中的炎症反应,其机制可能与白藜芦醇抑制体内发生的氧化应激反应有关。     

以呼吸系统症状为突出表现的获得性免疫缺陷综合征临床分析

目的 分析以呼吸系统症状为突出表现的获得性免疫缺陷综合征(AIDS)临床及影像学特点.方法 回顾性分析11例经蛋白印迹法(WB法)测抗HIV抗体阳性而确诊,以呼吸系统症状为突出表现的AIDS患者临床及胸部影像学资料.结果 主要以咳嗽、咳痰、呼吸困难呈进行性加重、低氧血症等呼吸系统症状为突出表现.胸部X片示双肺弥漫性磨玻璃样影,以双肺中下肺野及肺门处明显,胸部CT提示磨玻璃样影、斑片状密度增高影的肺间质性改变.7例放弃治疗后1周内死亡,2例转入专科医院治疗2周~1个月后死亡,2例经积极治疗双肺间质性肺炎大部分吸收出院.结论 以呼吸系统症状为主要表现的AIDS患者病情重,胸部影像学表现主要为磨玻璃样影的间质性肺炎,易误诊,预后差.     

二氧化硅通过调节人气道上皮细胞自噬促进MUC5AC表达

目的 探讨二氧化硅(SiO₂)对人气道上皮细胞株(Beas-2b)黏蛋白5AC(MUC5AC)表达的影响及其作用机制。方法 用含10%胎牛血清的DMEM高糖培养基在37℃和5%CO₂的培养箱培养Beas-2b。使用NC-siRNA、ATG5-siRNA、BECN1-siRNA及mCherry-EGFP-LC3等慢病毒转染Beas-2b。各转染组细胞用相应慢病毒(MOI=20)转染12 h后换新鲜培养基，并用嘌呤霉素(1μg/mL)进行筛选，获得稳定转染细胞株。用SiO₂(100μg/mL)刺激前述稳定转染细胞株24 h，并设PBS对照组。免疫荧光和免疫印迹检测MUC5AC、自噬相关蛋白5(ATG5)、BECN1和微管相关蛋白轻链3(LC3)的蛋白水平；共聚焦显微镜观察人气道上皮细胞自噬情况。结果 SiO₂组的MUC5AC、ATG5、BECN1和LC3Ⅱ的表达高于对照组(P <0.05);ATG5和BECN1敲减细胞株中，SiO₂刺激后MUC5AC和LC3Ⅱ的表达均低于对照...