用cDNA微阵列研究内毒素休克小鼠基因表达谱的改变

感染性休克的发病机制十分复杂 ,涉及多种组织、细胞的激活及大量炎症介质的表达。以往的研究常限于测定单个炎症介质的表达或分析单一细胞内信号转导途径的作用 ,难以获得对感染性休克的全面而系统的认识。因此 ,其发病机制至今尚未完全阐明 ,死亡率仍高达 40 %～ 6 0 %。本研究采用Ｃｌｏｎｔｅｃｈ公司生产含 1176个基因的ｃＤＮＡ微阵列膜 (ＡｔｌａｓＴＭ Ｍｏｕｓｅ 1.2Ａｒｒａｙ)研究内毒素休克小鼠基因表达谱的改变。Ｂａｌｂ/ｃ小鼠经腹腔注射大肠杆菌内毒素 (15ｍｇ·ｋｇ-1) 2 0ｈ后 ,摘取心、肝、肺、肾、脑等组织 ,提取总ＲＮＡ ,经反转录及α 3 2 ｐ ｄＡＴＰ掺入合成ｃＤ     

αB-晶状体蛋白在保护过氧化氢所致心肌细胞损伤中的作用

采用热休克对新生大鼠心肌细胞进行预处理 ,以诱导αB 晶状体蛋白的表达 ,并观察其对 1mmol·L- 1 的过氧化氢 (H2 O2 )所致心肌细胞损伤的保护作用。发现 :热休克预处理组心肌细胞中αB 晶状体蛋白表达明显增加 ,H2 O2 所致的细胞死亡率及LDH释放率降低 ,总抗氧化能力增强 ;H2 O2 可引起αB 晶状体蛋白从胞浆向胞核及微丝移位。提示热休克预处理的心肌细胞保护作用与其诱导αB 晶状体蛋白的表达增加有关。αB 晶状体蛋白可能通过细胞内移位 ,保护某些核结构 ,稳定细胞骨架 ,并增强心肌细胞抗氧化能力 ,从而发挥其保护作用     

10个脆性X综合征家系的基因诊断研究

运用ＦＭＲ—１基因位点探针ＳｔＢ１２．３，通过ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｌｏｔ方法调查了１０个脆性Ｘ综合征家系，其中包括细胞遗传学确诊的男性患者３人，女性患者３人，女性携带者６人；细胞遗传学诊断可疑的男性患者５人，女性携带者３人。仅发现２个男性患者（２／３）、２个女性患者（２／３）、２个女性携带者（１／３）、１个可疑男性患者（１／５）、１个可疑女性携带者（１／３）的ＦＭＲ—１基因（ＣＧＧ）ｎ顺序具有等于或大于０．５Ｋｂ的插入，提示ＦＭＲ—１基因中（ＣＧＧ）ｎ顺序的插入并不是导致脆性Ｘ综合征的唯一原因。     

用cDNA微阵列研究内毒素休克小鼠基因表达谱的改变

感染性休克的发病机制十分复杂 ,涉及多种组织、细胞的激活及大量炎症介质的表达。以往的研究常限于测定单个炎症介质的表达或分析单一细胞内信号转导途径的作用 ,难以获得对感染性休克的全面而系统的认识。因此 ,其发病机制至今尚未完全阐明 ,死亡率仍高达 40 %～ 6 0 %。本研究采用Ｃｌｏｎｔｅｃｈ公司生产含 1176个基因的ｃＤＮＡ微阵列膜 (ＡｔｌａｓＴＭ Ｍｏｕｓｅ 1.2Ａｒｒａｙ)研究内毒素休克小鼠基因表达谱的改变。Ｂａｌｂ/ｃ小鼠经腹腔注射大肠杆菌内毒素 (15ｍｇ·ｋｇ 1) 2 0ｈ后 ,摘取心、肝、肺、肾、脑等组织 ,提取总ＲＮＡ ,经反转录及α 3 2 ｐ ｄＡＴＰ掺入合成ｃＤ     

用cDNA微阵列研究内毒素休克小鼠肺组织基因表达谱的改变

目的利用cDNA微阵列研究小鼠在内毒素休克早期及晚期肺组织基因表达谱(Gene expression profile)的改变,从基因组水平阐明内毒素休克的发生机制,并试图发现某些未知的内毒素休克相关基因.方法BALB/c小鼠经腹腔注射大肠杆菌内毒素0111B4(15mg/kg)2h及20h后摘取心、肝、肺、肾、脑等组织,Trizol提取总RNA,经反转录及a-32P-dATP掺入合成cDNA探针,与Clontech公司产含1176个基因的cDNA微阵列膜进行杂交并放射自显影,X光胶片经透射扫描仪扫描后用本科室开发的密度分析软件分析微阵列中各点阵杂交密度.结果1.注射内毒素后小鼠死亡率为59%,其中44%在24h内死亡.2.内毒素处理2h小鼠肺组织有128个基因表达明显上调(上调＞10倍者33个,5-10倍者24个,2-5倍者71个),并有4个基因表达明显下调.3.内毒素处理20h小鼠肺组织有51个基因表达明显上调(上调＞10倍者16个,5-10倍者7个,2-5倍者28个),并有21个基因表达明显下调.4.内毒素处理20h与处理2h小鼠肺组织相比有13个基因表达明显上调(上调5-l0倍者1个,上调2-5倍者12个),有105个基因表达明显下调.5.在内毒素处理2h表达明显上调的128个基因中,内毒素处理20h后有93个明显恢复或下调;有36个仍然上调.6.内毒素处理2h表达明显下调的4个基因中,内毒素处理20h后有2个明显恢复或上调;有2个仍然下调.7.为证实cDNA微阵列分析结果的可靠性,从休克20h表达增加的基因中选出4个进行RT-PCR检测,发现检测结果与cDNA微阵列分析结果相符.讨论内毒素休克的发病机制十分复杂,涉及多种组织、细胞的激活及大量炎症介质的表达.以往的研究常限于测定单个或几个炎症介质的表达或分析单一的细胞内信号转导途径的作用,忽略了多种炎症介质及信号传导途径的同时存在及相互作用,难以全面揭示内毒素休克的分子机制.本研究采用cDNA微阵列技术,首次发现内毒素休克2h有128个基因表达上调,表明内毒素休克早期是基因表达的活跃期,这些基因改变可能启动和维持了后续的病理生理变化.在休克20h有51个基因表达上调及21个基因下调,这些基因表达的变化可能是内毒素休克转入不可逆期的分子基础.目前本室正对上述基因表达变化的意义及内毒素休克小鼠其它组织中基因表达的改变做进一步的分析.本研究有助于从基因组水平阐明内毒素休克的分子机制,可能为进一步探讨内毒素休克的干预措施提供实验依据.     

热休克对心肌细胞中αB—晶状体蛋白移位及表达的影响

采用热休克对新生大鼠心肌细胞进行处理,观察αB-晶状体蛋白在细胞内的分布及其表达变化。结果：（1）Western-blot显示热休克后胞浆中可溶性αB-晶状全蛋白迅速移位至细胞内的不溶性结构中,2h左右基本复位;（2）免疫双荧光细胞化学显示热休克导致αB-晶状体蛋白在热休克时主要移向Z线及核膜等细胞骨架部位;（4）Norhern-blot显示热休克诱心肌细胞αB-晶状体蛋白mRNA的表达增加。热休克处理使αB-晶状体蛋白迅速移位至细胞骨架,表明其在心肌预适应早期相中可能发挥保护作用。而αB-晶状体蛋白的诱导表达,可能是心肌预适应延迟相保护的重要机制之一。     

热休克对心肌细胞中αB-晶状体蛋白移位及表达的影响

采用热休克对新生大鼠心肌细胞进行处理 ,观察αB 晶状体蛋白在细胞内的分布及其表达变化。结果 :①Western blot显示热休克后胞浆中可溶性αB 晶状体蛋白迅速移位至细胞内的不溶性结构中 ,2h左右基本复位 ;②免疫双荧光细胞化学显示热休克导致αB 晶状体蛋白在细胞浆内发生分布变化 ,而HSC70从胞浆向胞核移位 ;③免疫电镜定量分析进一步证实αB 晶状体蛋白在热休克时主要移向Z线及核膜等细胞骨架部位 ;④Northern blot显示热休克诱导心肌细胞αB 晶状体蛋白mRNA的表达增加。热休克处理使αB 晶状体蛋白迅速移位至细胞骨架 ,表明其在心肌预适应早期相中可能发挥保护作用。而αB 晶状体蛋白的诱导表达 ,可能是心肌预适应延迟相保护的重要机制之一。