辐射防护基因治疗现状与展望

放射治疗是恶性肿瘤的主要治疗手段之一,超过50%的肿瘤患者在病程的不同阶段都需要接受放疗。尽管影像引导靶向治疗技术不断发展,使患者受到的辐射剂量大大降低,但仍然存在严重的不良反应——正常组织细胞的辐射损伤。为了减少正常组织损伤,研究人员一直在寻找辐射防护的新方法。目前的辐射防护方法多是采用化学合成小分子物质及天然植物提取物作为辐射防护剂使用,但疗效并不十分理想,研究人员迫切想找到一种高效可行的辐射防护新方法。基因治疗以其靶向明确、细胞毒性小、不良反应少等优点在增强细胞和组织相关性能上具有很大优势,使其成为极好的辐射防护新方法。笔者对辐射防护的基因治疗研究及其未来的改进方向做一综述。     

湘江衡阳段水体总α、β放射性水平调查与评价

目的 对湘江衡阳段水体中总放射性水平进行检测,并对数据进行放射卫生学评价。方法 利用²⁴¹Am和KCl作为总α、β放射性测量的标准物质,采用中等厚度相对测量法测量衡阳段湘江水中总放射性水平。结果 水样中总α放射性水平为0.0012~0.058 Bq/L,总β放射性水平为0.013~0.3742 Bq/L,经方差分析,各水样间差异无统计学意义(P > 0.05)。结论 水样中总α、总β放射性活度均低于国家标准限值,可知湘江衡阳段水体未受到人工放射性核素的污染。     

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目的探讨耐辐射奇球菌(DR)pprI基因对丝裂霉素C(MMC)诱导H9C2心肌细胞损伤的保护作用及机制。 方法细胞分为空白对照组(不干预)、未转染组(MMC处理)、空质粒转染组(pCMV-C-Flag+MMC)与pprI基因转染组(pCMV-C-Flag-pprI+MMC)。CCK-8、抗氧化酶相关试剂盒、TUNEL、JC-1荧光探针和qRT-PCR测定细胞存活率、氧化应激、细胞凋亡率、线粒体损伤、凋亡途径相关基因mRNA的表达。 结果与空白对照组比较,未转染组细胞存活率、线粒体膜电位、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)mRNA表达下降;氧化应激反应、细胞凋亡率及Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)、Caspase-3、多腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)mRNA表达增加(P＜0.05)。与未转染组比较,pprI基因转染组细胞存活率、线粒体膜电位、Bcl-2 mRNA表达增加;氧化应激反应、细胞凋亡率及Bax、Caspase-9、Caspase-3、PARP mRNA表达下降(P＜0.05)。 结论耐辐射奇球菌pprI基因对丝裂霉素C诱导的H9C2心肌细胞损伤具有保护作用,其机制可能与激活线粒体凋亡途径有关。     

丝裂霉素C对黑腹果蝇寿命及生育与运动能力的影响

目的探究不同浓度丝裂霉素C(mitomycinC,MMC)对野生型黑腹果蝇寿命、生育能力及运动能力的影响.方法使用含不同浓度MMC(0、40、80、120 μg/ml)的培养基培养野生型黑腹果蝇,测定各组果蝇半数死亡时间、平均寿命、最高寿命、子代数量、羽化率及攀爬能力,并进行统计学分析,组间比较均采用t检验.结果80和...     

术前应用CT辅助下3D打印技术模拟复杂骨盆骨折的价值研究

目的探讨术前应用CT辅助下3D打印技术模拟复杂骨盆骨折的价值。方法选取2017年5月至2018年3月我院收治的骨盆骨折患者45例作为3D打印组,采用激光快速自动成型机快速制作骨盆骨折个体化标本,标本需囊括解剖动、静脉血管,临床医生根据3D模型个体化标本情况,讨论最终方案。另选择同时期45例骨盆骨折患者作为常规组,常规组手术前仅进行X线、CT检查。比较两组患者手术效果、手术时间、术中出血量、输血量及围手术期并发症。结果两组患者手术时间、术中出血量、输血量比较存在明显差异,3D打印组患者手术时间、术中出血量、输血量明显低于常规组(P<0.001);常规组患者优良率为95.55%(43/45),3D打印组优良率为82.22%(37/45),3D打印组优良率显著高于常规组,差异有统计学意义(P<0.05);两组患者均为出现明显并发症,常规组患者出现1例(2.22%)切口感染、1例(2.22%)下肢静脉血栓,3D打印组出现1例(2.22%)切口感染,两组患者围手术期并发症发生率比较无明显差异(P>0.05)。结论复杂骨盆骨折术前应用CT辅助下3D打印技术可直观了解骨折实际情况,手术前模拟手术方案更有利于优化手术效果。     

耐辐射奇球菌pprM基因回补株的构建与鉴定

目的 构建耐辐射奇球菌pprM基因缺失回补菌株, 为进一步研究PprM蛋白的功能奠定实验基础。 方法 设计并合成HA-pprM基因(HA为流感病毒血凝素)全长的引物, 以无突变的pGEX-6p-1-pprM载体为模板, PCR扩增出携带NdeⅠ酶切位点的HA-pprM基因全长, 经NdeⅠ酶切后, 与pRADK载体连接并转化大肠杆菌, 经培养、提取质粒及纯化后, 采用酶切鉴定以及基因测序方法确认插入序列的正确性; 采用CaCl₂法将构建好的重组质粒pRADK-HA-pprM转化到耐辐射奇球菌pprM基因缺失的菌株中, 通过Western blot验证HA-PprM融合蛋白的表达。 结果 构建的重组质粒pRADK-HA-pprM经NdeⅠ酶切鉴定结果符合目的条带大小(438 bp), 测序结果显示插入的寡核苷酸序列及方向与预期的一致, Western blot结果显示HA-PprM融合蛋白的相对分子质量约为13000。 结论 笔者成功构建了重组质粒pRADK-HA-pprM, 为进一步研究与PprM蛋白相互作用的靶DNA的筛选奠定了良好的基础。     

过氧化氢对W1118品系果蝇寿命、生育能力、运动能力及抗氧化能力的影响

目的探讨不同浓度的过氧化氢对W1118品系果蝇寿命、生育能力、运动能力及抗氧化能力的影响。方法将果蝇放到含不同浓度过氧化氢的培养基中饲养,测定各浓度组果蝇寿命、生育能力、运动能力及抗氧化能力,数据分析采用方差分析和LSD-t检验进行多重比较。结果随着过氧化氢浓度的增加,果蝇蛹化率和羽化率降低、运动能力减弱、羽化后48 h死亡率升高;当过氧化氢浓度为1 200 mmol/L时效果最为明显(P＜0.05),此条件下果蝇运动能力、半数死亡时间、寿命、蛹化率和羽化率均明显低于对照组(P＜0.05),而羽化后48 h死亡率明显高于对照组(P＜0.05),体内谷胱甘肽(GSH)含量和过氧化氢酶(CAT)活性明显低于对照组(P＜0.05)。结论过氧化氢对果蝇具有多重毒性,过氧化氢可能破坏果蝇的抗氧化系统抑制果蝇的运动能力、生育能力以及预期寿命。     

耐辐射奇球菌pprM基因在真核细胞中的表达

目的扩增耐辐射奇球菌辐射抗性基因pprM,构建pEGFP-C1-pprM重组载体,转入293T细胞并表达PprM蛋白,为研究原核细胞辐射抗性基因pprM是否提高真核细胞的辐射抗性及其可能存在的作用机制奠定实验基础。方法以无任何突变的pGEX-6p-1-pprM重组质粒为模版,设计引物PCR扩增pprM基因,利用琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒纯化回收目的片段,EcoR Ⅰ、BamH Ⅰ双酶切回收的目的片段及质粒pEGFP-C1,将双酶切产物进行连接,连接产物转化至大肠杆菌JM109感受态细胞后涂布于含卡那霉素（Kan）抗性的Luria-Bertani（LB）固体培养基上进行筛选,所筛选的阳性克隆进一步用菌落PCR,EcoR Ⅰ、BamH Ⅰ双酶切及测序鉴定。通过Lipofectamine2000转染试剂将pEGFP-C1-pprM重组质粒转入293T细胞,倒置荧光显微镜观察绿色荧光融合蛋白的表达。裂解细胞抽提蛋白,Western blot进一步验证PprM蛋白的表达。结果菌落PCR结果及双酶切结果显示,在400 bp左右处有一条明显的目的条带,测序结果显示碱基序列与原基因序列一致,载体构建成功。荧光拍照结果显示,pEGFP-C1-pprM重组质粒成功转染293T细胞并表达绿色荧光融合蛋白;Western blot结果显示在40×103处有融合蛋白表达。结论笔者成功将所构pEGFP-C1-pprM重组质粒转入293T细胞,并表达相应蛋白,为后续实验研究原核基因pprM及其产物对真核细胞辐射抗性的影响奠定了良好的实验基础。