兔人工膝关节感染模型的构建

目的:建立兔的人工膝关节感染模型.方法:以长15 mm的3 mm克氏针作为膝关节内置物,通过兔的股骨髁间窝植入股骨远端.对48只成年新西兰大白兔行上述手术,并随机分为A、B、C、D 4组:A组在切口缝合后即刻向关节腔内接种0.5 ml1×107集落形成单位(Colony forming unit,CFU)的金黄色葡萄球菌ATCC25923,B组接种0.5 ml 1×106 CFU的细菌,C组接种0.5 ml 1×105 CFU的细菌,D组不接种细菌.于术后分别观察伤口情况,拍摄X线片,细菌培养、组织学变化及C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)和红细胞沉降率(Erythrocyte sedimentation rate,ESR)的变化.结果:术后14 d,A组100%(11/11)感染,B组100%(12/12)感染,C组83.3%(10/12)感染,D组无感染;光镜下可见感染内置的克氏针周围炎性细胞较未感染者多;血清CRP和ESR在术后持续保持较高水平.结论:应用该方法术后接种0.5ml 1×106CFU金黄色葡萄球菌到膝关节,14 d后可以成功建立膝关节置换术(Total knee arthroplasty,TKA)后感染模型.     

不同分离方法及培养条件对兔骨髓间充质干细胞生物活性的影响

背景:骨髓间充质干细胞常被用作骨组织工程的种子细胞和基因治疗的载体细胞,如何获得纯度较高活性较好的骨髓间充质干细胞是很多研究者关心的问题.目的:观察不同分离方法及培养条件对兔骨髓间充质干细胞生物活性的影响.方法:分别用密度梯度离心法、全骨髓培养法和红细胞裂解液法提取兔骨髓间充质干细胞,48 h后观察各组获得的细胞量,记录各组首次传代时间,相差显微镜观察细胞的形态,流式细胞仪鉴定其CD44抗原表达.分别用DMEM-LG、MEM-HG和DMEM/F12 3种培养基培养第3代细胞和第7代老化细胞,MTT法和计数板计数法比较不同时间点3种培养基培养细胞的生长情况,相差显微镜观察老化细胞的形态变化.结果与结论:3种分离方法均能得到较均一的梭形或者多角形贴壁细胞,胞核大胞浆丰富,CD44抗原表达阳性.其中红细胞裂解液法获得的贴壁细胞的量较其他方法多,首次传代时间短(P＜0.05).用DMEM/F12培养的细胞活力更好,细胞生长更迅速,并且经过DMEM/F12培养一段时间后,部分静止期细胞开始分裂增殖.提示红细胞裂解液法能够提高骨髓间充质干细胞的贴壁效率,是一种方便、有效的提取方法;DMEM/F12更能够促进细胞的增殖,较适合于培养骨髓间充质干细胞.     

不同分离方法及培养条件对兔骨髓间充质干细胞生物活性的影响*

背景：骨髓间充质干细胞常被用作骨组织工程的种子细胞和基因治疗的载体细胞,如何获得纯度较高活性较好的骨髓间充质干细胞是很多研究者关心的问题。 目的：观察不同分离方法及培养条件对兔骨髓间充质干细胞生物活性的影响。 方法：分别用密度梯度离心法、全骨髓培养法和红细胞裂解液法提取兔骨髓间充质干细胞,48 h后观察各组获得的细胞量,记录各组首次传代时间,相差显微镜观察细胞的形态,流式细胞仪鉴定其CD44抗原表达。分别用DMEM-LG、MEM-HG和DMEM/F12 3种培养基培养第3代细胞和第7代老化细胞,MTT法和计数板计数法比较不同时间点3种培养基培养细胞的生长情况,相差显微镜观察老化细胞的形态变化。 结果与结论：3种分离方法均能得到较均一的梭形或者多角形贴壁细胞,胞核大胞浆丰富,CD44抗原表达阳性。其中红细胞裂解液法获得的贴壁细胞的量较其他方法多,首次传代时间短(P < 0.05)。用DMEM/F12培养的细胞活力更好,细胞生长更迅速,并且经过DMEM/F12培养一段时间后,部分静止期细胞开始分裂增殖。提示红细胞裂解液法能够提高骨髓间充质干细胞的贴壁效率,是一种方便、有效的提取方法;DMEM/F12更能够促进细胞的增殖,较适合于培养骨髓间充质干细胞。     

慢病毒介导抗菌肽PR-39基因在兔骨髓间充质干细胞中的表达及抗菌活性检测

目的 构建脯氨酸精氨酸抗菌肽(proline-arginine rich 39-amino acid peptide, PR-39)慢病毒载体,并转染兔骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells, BMSC),检测其在BMSC中的表达及抗菌活性。方法 PCR扩增目的克隆,并连接入慢病毒载体质粒pGC-FU中,与包装质粒pHelper1.0、pHelper2.0在脂质体2000介导下共转染293T细胞生产慢病毒颗粒,Real-Time PCR法检测其滴度;分离培养BMSC,BMSC转染PR-39慢病毒,荧光显微镜观察及流式细胞仪检测其转染效率,RT-PCR检测PR-39基因表达,并检测PR-39抗菌活性。结果 成功包装出滴度为2×109 TU/mL的PR-39慢病毒载体,并转染BMSC,转染72 h后可观察到细胞呈现绿色荧光,转染效率为74.09%,同时RT-PCR检测BMSC表达PR-39基因,其上清液对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用,抑菌率为98.43% (P<0.05)。结论     

诱导小鼠破骨前体细胞成熟分化的实验条件探讨

目的探讨小鼠单核细胞RAW264.7能否在RANKL诱导下向破骨细胞成熟分化。方法 RANKL作用RAW264.7细胞7天～9天,光镜、透射电镜、扫描电镜(scanning electron microscope,SEM)分别观察其细胞形态学变化,用抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色法观察TRAP阳性的多核细胞,RT-PCR检测破骨细胞表型和功能基因表达变化情况,扫描电镜观察破骨细胞在骨片上形成骨吸收陷窝。结果光镜、透射电镜下可见细胞胞体增大,为椭圆形或不规则形,胞核5～10个,扫描电镜下可见细胞表面大量的伪足样突起;此外,RANKL能诱导RAW264.7细胞分化为TRAP染色阳性的多核破骨细胞,细胞多为超过5个核的多核巨细胞;RAW264.7细胞成熟分化后具有骨吸收功能,并且能上调Cathepsin-K、TRAP、RANK等典型破骨细胞表型和功能基因mRNA的表达。结论 RAW264.7细胞是一种较好的破骨前体细胞模型,单用50ng/ml的RANKL体外连续诱导7天以上,能明显促进它向成熟的破骨细胞分化。     

椎弓根螺钉内固定术联合经伤椎椎弓根植骨治疗胸腰椎骨折对患者椎体高度恢复的影响

目的 探讨经后路椎弓根钉内固定联合经伤椎椎弓根植骨治疗胸腰椎骨折的临床疗效.方法 筛选第三军医大学西南医院骨科和重庆市渝北区人民医院骨科2010年1月至2016年12月收治的426例胸腰椎骨折患者,按照不同手术方式分为:观察组(n=118),采用经伤椎椎弓根进行椎体植同种异体骨+后路GSS-Ⅳ型脊柱通用内固定系统固定;对照组(n=308),单纯使用后路GSS-Ⅳ型脊柱通用内固定系统进行治疗.回顾性分析两组患者手术前后功能疼痛视觉模拟评分(VAS评分)、伤椎前缘高度比值、Cobb角改变及其并发症发生率.结果 ①两组手术前后伤椎前缘高度比值、Cobb角改变、VAS评分等比较,差异均具有统计学意义(P＜0.05).②与对照组相比,观察组手术时间差异有统计学意义(P＜0.05);术中出血量较对照组较多,但差异无统计学意义(P＞0.05);术后1个月及1年伤椎前缘高度比值、Cobb角改变差异具有统计学意义(P＜0.05);术后1个月VAS评分差异无统计学意义(P＞0.05);术后1年VAS评分较低,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 经伤椎椎弓根进行植骨可以达到更满意的临床效果,适合临床推广使用.     

单侧经皮球囊扩张椎体后凸成形术治疗26例胸、腰椎压缩性骨折的近期疗效观察

目的探讨单侧经皮球囊扩张椎体后凸成形术(PKP)治疗胸、腰椎压缩性骨折的临床疗效。方法回顾性分析2010年2月至2011年9月该院经单侧入路PKP治疗胸、腰椎压缩性骨折患者26例(28椎)的临床资料。结果手术后24h和15d的视觉疼痛模拟评分法(VAS)评分[(2.4±0.7)、(2.3±0.8)分]低于术前[(7.8±0.7)分],P<0.05。术后24h、15d伤椎前缘平均高度[(19.6±3.2)、(19.5±3.0)mm]和椎体中线平均高度[(21.1±3.6)、(21.1±3.3)mm]及伤椎Cobb′s角(12.8°±2.8°、13.1°±2.9°)与术前[(15.5±4.1)mm、(17.9±3.8)mm、26.8°±3.2°]比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论单侧PKP治疗胸、腰椎压缩性骨折操作简单、手术时间短、创伤小、止痛效果好、纠正脊柱后凸畸形且手术并发症少,是一种安全有效的方法。