PBL教学法在临床微生物学教学中的应用

临床微生物学是一门重要的专业课,对于研究病原体特征、诊断病原体、指导合理使用抗菌药物及监控院内感染等方面发挥重要作用.为了提高教学效果,在教学中实践了PBL教学法,激发了学生的学习兴趣,促进了学生综合能力的培养及创造性思维的建立.     

产单核细胞李斯特菌感染小鼠脾脏树突状细胞亚群和表型的变化

目的:利用产单核细胞李斯特菌(LM)感染BALB/c小鼠模型,研究LM感染对小鼠脾脏树突状细胞(DC)亚群及表型变化的影响。方法:LM尾静脉感染BALB/c小鼠,感染后第3、5、7天取小鼠脾脏,平板稀释法进行脾脏细菌载量分析;流式细胞术检测脾脏DC亚群及DC相关表面分子CD80、CD86的表达情况。结果:感染小鼠脾脏细菌载量感染后第3天有高水平的菌落形成单位计数,随着时间的推移细菌的数量迅速降低,直到第7天基本被清除;CD11c+DC的数量在感染第5天高于对照组(P<0.05),CD4+DC的数量在感染后第5天和第7天均高于对照组(P<0.05),CD8α+DC的数量在感染后第3、5和7天及CD4-CD8α-DC的数量在感染后的第3和第5天亦均高于对照组(P<0.05～P<0.01);LM感染后,DC表面CD80和CD86的表达增加,均于感染后第3天和第5天显著高于对照组(P<0.01)。结论:LM感染早期,小鼠脾脏DC亚群出现的增殖和成熟表型特征性分子表达上调,决定了其在细胞免疫应答活化中的作用地位。     

沙门菌外膜囊泡对小鼠髓源树突状细胞的免疫调控作用

  目的   研究鼠伤寒沙门菌（Salmonellatyphimurium, ST）外膜囊泡（outer membrane vesicles, OMVs）对树突状细胞（dendritic cells, DC）超微结构及免疫功能的影响。   方法   无菌取小鼠骨髓细胞,体外经重组鼠源粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子（recombinant mouse granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, rm GM-CSF）和重组鼠源白细胞介素-4（recombinant mouse interleukin-4, rm IL-4）联合诱导扩增出DC,倒置相差显微镜下观察细胞形态,流式细胞术鉴定表型;超速离心分离获取ST-OMVs,CCK-8法测其对DC存活情况的影响,确定OMVs刺激浓度;透射电镜观察细胞负载OMVs后超微结构特征;流式细胞术检测DC细胞因子分泌、表面分子表达、吞噬能力。   结果   体外诱导和扩增的DC具有典型的细胞形态,纯度达85%以上,透射电镜可见DC表面有大量丝状伪足;OMVs负载后,可见DC表面树突状结构减少,胞浆内有大量囊泡状结构,线粒体增多,肿胀以及细胞凋亡;OMVs 5 μg/mL和10 μg/mL 处理后,DC吞噬能力下降（P<0.05）,成熟表型特征性分子表达上调（P<0.05）,肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α, TNF-α）和白细胞介素-1β（interleukin-1β, IL-1β）表达升高（P<0.05）。   结论   ST-OMVs可诱导DC分泌TNF-α和IL-1β,具有促进DC成熟和抗原提呈的能力。      

金葡菌及其L型诱导脐静脉内皮细胞凋亡及相关基因的研究

目的:探讨金黄色葡萄球菌(金葡菌)及其L型诱导细胞凋亡的作用及可能的分子机制.方法:用流式细胞术检测金葡菌及其L型感染人脐静脉内皮细胞(HUVECs) 后2 h、4 h、6 h、8 h和10 h的细胞凋亡率,并同时用免疫组化方法检测各时间点bcl-2及Fas基因的表达情况. 结果:金葡菌及其L型均能诱导HUVECs发生凋亡,与对照组比较差异有显著性(P<0.05～P<0.01).金葡菌L型诱导细胞的凋亡率均低于金葡菌(P<0.01);bcl-2及Fas基因表达率在感染后6 h与对照组比较差异均有显著性(P<0.01),在诱导的时间内bcl-2基因表达率逐渐降低,而Fas基因表达率逐渐增加(P<0.01).结论:金葡菌及其L型均能诱导HUVEC发生凋亡,其机制可能与下调bcl-2蛋白及上调Fas蛋白有关.     

应用小鼠体外全胚胎培养研究金葡菌L型对胚胎发育的影响

金葡菌是细菌感染性疾病中最常见的细菌之一 ,在体内外因素作用下可以缺壁变异成L型。金葡菌L型除可引起各种化脓性感染和败血症外 ,实验证明也可引起小鼠的不孕和肿瘤 ,可通过胎盘垂直感染并与子代先天畸形有一定的关系 ,但这些研究均是通过母体感染的体内试验 ,本实验采用体外全胚胎培养 (WEC)方法观察金葡菌L型对体外胚胎发育的影响。将妊娠 8 .5天龄小鼠脱颈处死 ,无菌条件下剪开子宫壁 ,分离出蜕膜团 ,在体视显微镜下剥离蜕膜组织与Reichert′s膜 ,将胚胎和卵黄囊、外胎盘圆椎一起移入培养瓶中培养。每只胚胎加入 1ml大白鼠血清培养…     

金黄色葡萄球菌L型垂直感染对子代小鼠免疫功能影响的初探

目的研究金黄色葡萄球菌L型垂直感染对子代小鼠红细胞免疫、T细胞亚群及NK细胞数量影响。方法采用流式细胞术检测感染后的子代成年小鼠T细胞亚群、NK细胞数量的变化,酵母菌红细胞花环试验法测定红细胞C3b受体花环率(C3bRR)、红细胞免疫复合物花环率(ICR)。结果L型感染组子鼠C3b受体花环率(C3bRR)、红细胞免疫复合物花环率(ICR)降低;子鼠脾脏CD4+细胞明显降低,CD8+细胞明显升高,CD4/CD8的比值降低、NK细胞数量明显降低。结论金葡菌L型垂直感染后对子代免疫功能有一定影响。     

痢疾杆菌致病的分子机制

志贺菌属细菌通称痢疾杆菌,是一类具有高度传染性和危害严重的革兰阴性肠道致病菌,临床感染可导致细菌性痢疾(菌痢)。     

一种简便高效制备伯氏疟原虫蛋白的实验方法

目的：探讨建立简便有效的大量制备鼠伯氏疟原虫蛋白的方法.方法：采集伯氏疟原虫感染晚期的大鼠外周血经肝素抗凝,通过白细胞滤器过滤去除白细胞,再使用30%阿拉伯胶溶液经密度梯度离心法分离含虫红细胞,经皂素溶血,收集纯化的原虫,虫体经超声波破碎后离心,上清液经SDS-PAGE电泳分析.采用蛋白凝胶灰度扫描方法分析蛋白电泳条带的分布.结果：从大鼠含虫外周血可分离制备出大量的可溶性疟原虫蛋白,对大鼠分离的疟原虫可溶性蛋白与小鼠来源的原虫可溶性蛋白比较,两种蛋白的电泳图谱完全相同.结论：利用大鼠模型可简便高效地制备大鼠伯氏疟原虫,结合超声波破碎法可提取足量的可溶性疟原虫蛋白抗原.     

数字切片扫描系统在医学形态学实验教学中的应用与探索

为提高高等教育的教学质量,不断地探求教学改革。应用数字切片扫描系统建立医学形态学实验教学的数字切片库,并结合显微数码互动系统将其应用于形态学实验教学,显示数字切片库的较大潜力,对提高形态学实验教学效果及学生开展自主性和创造性学习能力起着重要作用。     

新形势下医学微生物学教学方法初探

在医学微生物学的新知识、新理论不断增加而教学学时数减少的新形势下,如何在有限的学时内让学生学得精而广,并对教学方法进行积极探讨,应用多媒体技术教学、开展兴趣性知识小讲座、利用实验课促进理论教学、积极开设选修课实施学分制等方式,取得了较好教学效果。