蛋白质非酶糖基化导致理化性状改变

目的观察蛋白质糖基化后理化特性的改变。方法牛血清白蛋白(BSA)与葡萄糖在体外共同孵育后,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)及荧光分光光度计测定荧光值和扫描荧光光谱。结果糖基化BSA荧光光谱改变,糖基化终产物(AGEs)荧光值增加;单体BSA在PAGE上向正极泳动加速,SDS-PAGE近负极段出现新的弥散带。结论蛋白质非酶糖基化可导致棕色变、阴电荷增加、分子量增大、荧光光谱改变。     

Effect of advanced glycosylation end products on activity of protein kinase C in human peripheral blood mononuclear cells

Objectives To investigate the effect of advanced glycosylation end products (AGEs) on the a ctivity of protein kinase C (PKC) in human peripheral blood mononuclear cells (P BMC) and to observe whether aminoguanidine (AG) can influence the effect of AGEs .Methods After PBMC were isolated from human peripheral blood and incubated with differen t concentrations of AGEs-BSA for various periods, total PKC activity in PBMC wa s determined by measuring the incorporation of (32)P from ［γ-(32) P］ ATP into a special substrate using Promega PKC assay kit.Results AGEs-BSA increased the total PKC activity in PBMC from 83.43±6.57 pmol/min/ mg protein to 116.8±13.82 pmol/min/mg protein with a peak at 15 min. AGEs -BSA also increased the total PKC activity in a concentration-dependent manner fro m 83.1±6.4 pmol/min/mg protein (control) to 119.1±13.3 pmol/min/mg prote in (control vs AGEs-BSA 400 mg/L, P<0.01).Furthermore, AGEs-BSA induc ed an elevation of PKC activity in a glycosylating time-related manner, from 80 .9±8.2 (control) to 118.3±11.5 pmol/min/mg protein (glycosylation for 12 wk, P<0.01).The total PKC activity stimulated by AGEs-BSA pretreated wi th AG (100, 200 mg/L) was markedly lower than that of AGEs-BSA group not pretr eated with AG (P<0.05, P<0.01).Conclusions AGEs-BSA increased the total PKC activity in PBMC in a concentration and incuba tion time dependent manner. The ability of AGEs-BSA to stimulate PKC activity was markedly decreased by pretreatment of AGEs-BSA with AG.     

超声联合微泡促进骨髓间充质干细胞迁移的实验研究简

目的 探讨体外超声联合微泡对骨髓间充质干细胞迁移的影响,为超声微泡促进干细胞迁移的体内研究提供依据.方法 体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,分为超声联合微泡组、单纯超声组、单纯微泡组及空白对照组.超声探头频率1 MHz,强度1 W/cm2,进行脉冲超声辐射,采用transwell小室培养法,观察超声联合微泡对骨髓间充质干细胞运动的影响.结果 空白对照组、单纯微泡组骨髓间充质干细胞的迁移能力较低,超声联合微泡组与单纯超声组细胞的迁移能力无显著差异（P〉0.05）,但两者比空白对照组、单纯微泡组迁移能力有显著差异（P〈0.01）.结论 超声及超声联合微泡作用能明显增强间充质干细胞的迁移能力.     

超声联合对比剂对内皮祖细胞一氧化氮生成的影响

背景:已有动物实验证实超声联合对比剂能够显著增强骨髓干细胞心肌内归巢治疗心肌梗死,改善心功能.目的:体外观察超声联合对比剂对内皮祖细胞一氧化氮生成及产生途径的影响.方法:体外提取、分离和培养猪骨髓内皮祖细胞,随机分为对照组、超声组、超声对比剂组,干预后分别收集内皮祖细胞和上清液.采用硝酸还原法检测上清液一氧化氮水平,分光光度计检测内皮祖细胞一氧化氮合酶的相对活力.结果与结论:超声对比剂组内皮祖细胞上清液一氧化氮表达、内皮祖细胞诱导型一氧化氮合酶和结构型一氧化氮合酶活力均较对照组显著增加(P < 0.05);超声组一氧化氮水平无明显改变,各型一氧化氮合酶活力较对照组有下降趋势,但差异无显著性意义(P > 0.05);超声联合对比剂作用下,L-精氨酸和双氧水可反应生成一氧化氮,较对照组明显增加,而单纯超声无此促进作用.提示超声联合对比剂作用显著增强内皮祖细胞各亚型一氧化氮合酶活性,并可能同时促进内皮祖细胞一氧化氮非酶合成途径,是其增效骨髓干细胞治疗心肌梗死的机制之一.     

超声联合微泡作用下即时产生非酶化一氧化氮的实验

背景:一氧化氮是体内重要的气体信号分子,近年来研究发现一氧化氮可以在无一氧化氮合成酶存在的条件下合成,即非酶化一氧化氮合成,而非酶化途径合成一氧化氮,可能是许多生物学效应的机制之一.目的:观察超声联合微泡是否可以实现或者增效一氧化氮非酶途径的产生.方法:将L-精氨酸和H2O2按照1:1,10:1,10:0.1,1:10的比例混合,应用频率为1 MHz,输出功率为0.5,1.0,1.5 W/cm2的超声分别持续辐射60 s,论证最优的L-精氨酸和H2O2的浓度比例以及最适的超声输出功率.确定最适浓度比和超声输出功率后,实验设立4组,分别进行超声联合微泡、单纯超声、微泡进行干预,空白对照组不进行干预,比较各组一氧化氮生成量.结果与结论:体外试验中,L-精氨酸和H2O2的浓度比例以10:1为最佳,选择1.5 W/cm2声强作为超声最优值.以此最适浓度比和超声输出功率干预,超声联合微泡组的一氧化氮生成量多于超声组(P < 0.01);超声组一氧化氮生成量优于空白对照组(P < 0.01);而微泡组的一氧化氮生成量与空白对照组没有差异.结果表明超声联合微泡可以增效一氧化氮的非酶合成.     

血管内超声指导下行冠状动脉左主干介入治疗

目的探讨应用血管内超声(IVUS)对冠状动脉无保护左主干(ULMCA)检查并行介入治疗的效果及安全性。方法在IVUS指导下植入支架治疗ULMCA病变21例(A组),未行IVUS检查经冠脉造影确诊行支架植入术49例(B组),比较两组患者近期疗效及术后6个月的随访结果。结果两组患者住院期间病死率、非致死性心肌梗死率、急诊冠脉旁路移植术率均无显著性差异,胸痛复发和再狭窄率A组低于B组(P<0.05)。结论应用IVUS指导ULMCA支架植入有助于选择适应证和合适的支架、实时评价支架扩张的满意度以达到最佳植入效果,且相对安全。     

超声微泡增效骨髓干细胞移植效率的实验研究

目的在动物水平研究超声联合微泡增效骨髓干细胞(BMSCs)心肌移植的作用,为临床上提高心肌梗死后BMSCs移植效率提供一种新的思路。方法12只中国家猪分别体外分离纯化BMSCs,超顺磁性氧化铁颗粒标记;介入法建立急性心肌梗死模型,成功后14d经冠状动脉注入自体BMSCs;实验组先注入微泡后再注入BMSCs,同时行超声辐射。术后行磁共振检查;心肌做病理切光镜、透射电镜观察。结果①两组在心肌梗死区和梗死周边区磁共振上均见SPIO标记的BMSCs形成的低密度区;②实验组较对照组普鲁士蓝染色阳性细胞明显增多(P<0.01);③两组心肌超微结构无差异,但B1组见血管内皮间隙增宽。结论超声辐射微泡可增加自体BMSCs心脏的移植效率。     

64层螺旋CT与冠状动脉造影同步评价冠状动脉支架置入后血管再狭窄☆

背景：支架置入后复查冠状动脉造影对判定再狭窄有重要参考价值，而目前其微创性和价格等因素均影响了造影复查率。 目的：以选择性冠状动脉造影为“金标准”，分析64层螺旋CT在冠状动脉支架置入后再狭窄评价中的应用价值。 设计、时间及地点：回顾性病例分析，于2007-03/2008-07在东南大学附属中大医院完成。 对象：选择门诊复查和住院的冠心病患者22例，于支架置入后同步进行64层螺旋CT冠状动脉成像和选择性冠状动脉造影检查。男12例，女10例；平均年龄（68.0±9.6）岁。 方法：采用64层螺旋CT对22例冠心病患者的38个冠状动脉支架进行检查和重建分析，对支架的再狭窄情况进行评价，与“金标准”选择性冠状动脉造影结果进行对照。 主要观察指标：64层螺旋CT图像和选择性冠状动脉造影评价血管再狭窄情况。 结果：64层螺旋CT可以清晰的显示冠状动脉主干及其主要分支，对置入的支架均能清楚显示。在置入的38枚支架中，CT显示32枚支架保持通畅，并与常规“金标准”冠状动脉造影结果相吻合；另有6枚支架64层CT显示存在不同程度的再狭窄。与选择性冠脉造影结果对照后发现其中有4枚互相吻合，而另外2枚再狭窄未得到选择性冠状动脉造影的证实。64层CT诊断支架再狭窄的敏感性和特异性分别为100%和94.18%。 结论：64层螺旋CT在评估冠心病支架置入后的再狭窄问题上有很高准确性，能较准确地区分支架开通和闭塞。     

糖尿病小鼠血清糖基化终产物水平增高

DCCT[1 ] 和 UKPDS[2 ] 研究均证明长期持续高血糖与糖尿病慢性血管病变的发生密切相关。高血糖导致血管病变发生发展的机制尚不完全清楚 ,蛋白质非酶糖基化形成的糖基化终产物 (advanced glycation end products,AGEs)可能发挥重要作用 [3 ]。为了从整体水平研究 AGEs与糖尿病慢性并发症之间的关系 ,我们运用酶联免疫吸附试验 (EL ISA)测定糖尿病小鼠血清 AGEs水平 ,并分析其与肾功能、尿蛋白及尿微量白蛋白排泄之间的关系 ,现报告如下。材料和方法一、材料1.试剂 :牛血清白蛋白 (BSA)为 BM产品 ,人血清白蛋白(HSA)、明胶、四…     

超声联合微泡对内皮祖细胞体外增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的:体外探讨超声联合微泡对内皮祖细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响,为进一步体内研究提供科学依据.方法:体外提取、分离和培养猪骨髓内皮祖细胞,随机分为对照组、超声组、超声微泡组,干预后24 h分别采用CCK-8检测细胞增殖活性,PI染色流式细胞仪分析细胞凋亡坏死及细胞周期.结果:(1)低声强超声(0.25～1.0 W·cm-2)联合微泡作用下对内皮祖细胞增殖活性无明显影响;较高声强(﹥1.0 W·cm-2)作用下,随声强逐渐增大,细胞增殖活性逐渐降低.(2)与对照组比较,超声微泡组(频率1 MHz,输出功率1.0 W·cm-2,辐照90 s)对内皮祖细胞凋亡坏死及细胞周期无明显影响,而同样条件下超声组细胞凋亡坏死明显增加,同时显著抑制细胞DNA合成.结论:1.0 W·cm-2超声联合微泡干预内皮祖细胞对细胞增殖活性、凋亡坏死及细胞周期无明显不良影响,为进一步应用超声微泡体内干预内皮祖细胞移植的研究提供可能.