人vWF-A1区蛋白的表达及其对血小板聚集的抑制作用

目的:进一步研究血栓形成的机制,开发抗血栓药物。方法: 应用基因重组技术在大肠杆菌中表达人vWF-A1区蛋白,经过纯化、复性,获得重组蛋白(rvWF-A1),同时用流式细胞术检测rvWF-A1与血小板膜糖蛋白血小板膜糖蛋白(glycoprotein, GP)Ib的结合能力,应用血小板聚集仪测定rvWF-A1对瑞斯托霉素(ristocetin)诱导的血小板聚集抑制作用。结果: 重组表达载体pQE-31-vWF-A1在大肠杆菌M15中得到高效表达,表达的重组蛋白量占菌体总蛋白的30%,Ni-NTA agrose柱纯化后,其纯度为95%,经复性的rvWF-A1蛋白具有良好的生物学活性。它可与血小板模糖蛋白血小板膜糖蛋白GPIb结合,阳性率为78.6%;它可以抑制ristocetin诱导的血小板聚集,抑制率为84.7%。结论: 在原核细胞中可以成功地高效表达人vWF-A1区蛋白,该重组蛋白有可能开发为有效的抗血栓药物。     

应用流式细胞仪对脐血细胞免疫学特点的检测

目的　研究脐血造血干 /祖细胞和淋巴细胞的免疫学特点以及脐血干 /祖细胞含量和细胞抗原特征对骨髓重建造血的影响。方法　收集 34份脐血 ,用流式细胞仪双标法同时检测细胞表面的两种不同抗原。结果　 34份脐血平均有核细胞数每份为 (12 3± 4 3)× 10 8个 ,CD34 的绝对细胞数每份为 (1 98± 1 30 )× 10 7,其中CD34 CD38 细胞占CD34 细胞的 84 6 %± 9 1% ;脐血淋巴样细胞群体中CD3 表达率为 6 0 5 0 %± 11 80 % ,CD4 为 38 6 6 %±11 80 % ;CD8 为 2 1 70 %± 6 37% ,CD4 /CD8 比值是1 93± 0 91;CD8 CD45RA 细胞占CD8 细胞群体的98 93 %± 0 36 % ;CD4 CD45RA 胞细胞占CD4 细胞的90 96 %± 6 96 %。结论　脐血中干 /祖细胞数量可以满足正常体重的成人脐血移植对干 /祖细胞的需要。脐血中T淋巴细胞多为功能未成熟细胞 ,具有较小的抗原反应性 ,这有利于降低移植中移植物抗宿主反应。     

脐血造血细胞培养的特性

目的　培养脐血中具有造血潜能的造血细胞 ,分析脐血中造血细胞的特性。方法　用密封的采血袋采集脐血 ,采用羟乙基淀粉一次沉淀法分离有核细胞 ,用半固体培养体系培养 ,7天计数红系集落形成单位 (CFU E) ,14天后计数红系爆式集落形成单位 (BFU E)、粒单系集落形成单位 (CFU GM) ,同时染色分析集落的组成成分。结果　采集 34份脐血 ,平均体积为 (99± 2 2 )ml;有核细胞数为 (0 6 4～ 2 5 9)×10 9,有核细胞回收率为 79 2 %± 13 7% ,回收的有核细胞绝对值为 (1 2 2± 0 43)× 10 9;平均每份脐血中含有BFU E(1 39± 0 75 )× 10 6,CFU GM (2 15± 1 2 2 )× 10 6。结论　脐血富含各期具有造血潜能细胞 ,每份脐血在有核细胞数和各种集落总数都可以满足成人移植的需求。     

喉癌及癌旁组织端粒酶活性检测在喉癌手术切缘定界中的意义

目的探讨喉鳞状细胞癌、相应癌旁切缘组织的端粒酶活性表达及其在喉癌手术定界研究中的意义.方法采用多聚酶链反应-酶联免疫吸附法(PCR-ELISA)对47例喉鳞状细胞癌、21例不同距离的相应癌旁组织、20例喉炎性息肉组织的端粒酶活性进行定量检测.结果47例喉癌组织中39例端粒酶呈阳性(83%),而20例喉炎性息肉组织端粒酶均为阴性,两组具有显著性差异(P＜0.001).21例癌旁5 mm处的切缘组织中有6例端粒酶呈阳性(28.6%),但其活性水平均低于相应原发肿瘤组织.而10 mm处的切缘组织端粒酶均呈阴性,两组差异有显著性(P＜0.001).结论端粒酶在喉癌组织中有较高的表达,在不同距离的癌旁切缘组织中有不同程度的表达.喉癌及癌旁组织端粒酶活性可能作为预测喉癌浸润性的指标.可望从分子水平评估喉癌手术的切缘状态,以期为指导喉癌手术分子定界提供客观而有价值的资料.     

血小板胶原受体糖蛋白Ⅵ体外表达及功能研究

为了深入研究血小板胶原受体糖蛋白Ⅵ(glycoproteinⅥ，GPⅥ)功能及筛选特异性抑制剂，利用基因重组技术体外表达GPⅥ胞外区片段。采用PCR方法扩增GPⅥ胞外区片段eDNA，构建表达载体pET-20b( )-GPⅥ，转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS，经IPTG诱导表达。表达产物经Ni—NTA Resin纯化、复性：使用Western blot方法鉴定重组蛋白性质；采用胶原结合试验测定重组蛋白的胶原结合能力。结果表明，经测序证明PCR扩增产物与GPⅥ胞外区eDNA序列完全一致；酶切分析证明成功构建了表达载体pET-20b( )-GPⅥ；原核细胞经诱导表达后出现新的相对分子量32kD蛋白条带，诱导产物以包涵体形式存在；Western blot分析表明重组蛋白可与抗Penta—His抗体和抗GPⅥ多抗特异性结合；胶原结合试验表明重组蛋白拥有较好的生物学功能。结论：正确构建了GPⅥ表达载体并成功表达重组蛋白，纯化、复性后的重组蛋白具有良好的抗原性和生物学活性。     

流式细胞术检测单个淋巴细胞内的细胞因子表达

各种辅助性Ｔ淋巴细胞 (Ｔｈ)之间的失衡与自身免疫病、过敏性疾病、肿瘤、移植排斥反应以及感染性疾病的发生发展有密切的关系 ,而掌握一种准确、灵敏、快速的检测Ｔｈ的方法 ,是研究Ｔｈ细胞间平衡与疾病关系的前提。我们采用免疫荧光抗体双标记法 ,用流式细胞仪检测单个淋巴细胞内的细胞因子的表达 ,能准确地了解淋巴细胞的极化状态 ,对研究疾病的发病机制以及相应的治疗策略具有实用意义。一、材料和方法1 对象和材料 :18名健康志愿献血员 ,男 12名 ,女 6名 ,平均 2 8岁。异硫氰酸荧光素标记的抗白细胞分化抗原 (ＣＤ)4、ＣＤ8单抗 ,Ｐ…     

siRNA 靶向Her-2 逆转录病毒载体构建及其在SKOV3 中的表达

 目的 构建并鉴定Her-2特异性siRNA逆转录病毒载体，将其导入SKOV3卵巢癌细胞中，并初步筛选有效抑制Her-2表达的细胞株。方法 体外合成含针对Her-2特异基因序列的寡核苷酸并定向克隆入逆转录病毒载体RNAi—Ready pSIREN—RetroQ，构建的载体通过测序、酶切鉴定后，脂质体介导下转染到包装病毒细胞株PT67中，嘌呤霉素筛选并挑选细胞克隆，收获病毒上清，将病毒上清转染SKOV3中，经过嘌呤霉素筛选得到稳定抑制Her-2表达的SKOV3细胞株，并分别通过RT-PCR和免疫组化方法鉴定抑制Her-2表达的效果。结果 成功构建了重组逆转录病毒载体，转染包装病毒细胞株获得的病毒上清成功转染了SKOV3，并且抑制了Her-2的表达。结论 抑制Her-2表达的SKOV3细胞株的建立，为观察转染siRNA的逆转录病毒表达我体的肿瘤细胞恶性生物学行为变化奠定了实验基础。     

浅谈围绝经期妇女的心理特点及心理保健

本文就围绝经期妇女心理的影响因素、心理特点进行阐述,提出心理保健措施,以利于保障围绝经期妇女的心理健康,提高生活质量。     

诊断性刮宫术联合不同药物治疗围绝经期功能失调性子宫出血的临床观察

目的:观察诊断性刮宫(诊刮)术后分别联合应用米非司酮和炔诺酮治疗围绝经期功能失调性子宫出血(功血)的临床疗效。方法:收集诊刮术后分别口服米非司酮和炔诺酮的围绝经期功血病例各50例,观察用药期间及停药后阴道流血情况及子宫内膜厚度变化。结果:治疗期间两组患者阴道流血均得到较好控制,治愈率米非司酮组较高,差异有显著性(P<0.05);复发率米非司酮组较低,差异无显著性(P>0.05);闭经率米非司酮组较高,差异有显著性(P<0.05);两组治疗前后子宫内膜厚度均变薄,差异有显著性(P<0.05);米非司酮组抑制子宫内膜增生效果较好,两组差异有显著性(P<0.05)。结论:诊刮术后分别联合应用米非司酮和炔诺酮治疗围绝经期功血均有效,但以联合米非司酮治疗效果更好。     

血小板胶原受体糖蛋白Ⅵ体外表达

目的利用基因重组技术体外表达血小板糖蛋白Ⅵ(GPⅥ)胞外区片段。方法采用PCR方法扩增GPⅥ胞外区片段cDNA，构建表达载体pET-20b( )-GPⅥ，转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS，经IPTG诱导表达。表达产物经Ni—NTA Resir。纯化后复性；使用Western blot方法鉴定重组蛋白性质。结果 PCR扩增产物经测序证明与GPVI胞外区cDNA序列完全一致；酶切分析证明成功构建了表达载体pET-20b( )-GPⅥ；原核细胞经诱导表达后出现新的相对分子量为32kd的蛋白条带，诱导产物以包涵体形式存在；Western印迹分析表明重组蛋白可与抗Penta-His抗体和抗GPⅥ多抗特异性结合。结论正确构建了GPⅥ表达载体并成功表达重组蛋白，纯化、复性后的重组蛋白具有良好的抗原性。