丹参SmRopGEF1基因的克隆、亚细胞定位与表达分析

目的 克隆丹参SmRopGEF1基因,研究其编码蛋白的亚细胞定位及其对逆境胁迫的应激反应和激素诱导下的表达水平。方法 根据前期丹参转录组测序结果设计SmRopGEF1基因特异引物,利用聚合酶链式反应（PCR）扩增SmRopGEF1基因序列;使用生物信息学方法分析SmRopGEF1蛋白序列特征及进化关系;构建pET28a-SmRopGEF1原核表达载体并转化至大肠埃希氏菌中诱导表达,构建35S启动的SmRopGEF1的绿色荧光蛋白原生质体瞬时表达载体,利用激光共聚焦显微镜观察SmRopGEF1的亚细胞定位;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测逆境胁迫（低温、盐及干旱）和激素诱导（生长素、脱落酸、茉莉酸甲酯）下的基因表达量。结果 丹参SmRopGEF1基因开放阅读框（ORF）全长为1701 bp,编码566个氨基酸,蛋白相对分子质量是62 362.99。生物信息学分析显示SmRopGEF1蛋白含有1个PRONE保守结构域,系统进化树分析表明SmRopGEF1蛋白与芡欧鼠尾草和一串红RopGEF1蛋白为高同源蛋白。成功构建pET28a-SmRopGEF1原核表达载体并在大肠埃希氏菌Rosetta（DE3）菌株中表达、纯化出SmRopGEF1重组蛋白。亚细胞定位的结果显示SmRopGEF1存在于植物细胞的细胞核中。qRT-PCR实验结果表明盐胁迫和冷胁迫能够显著提高SmRopGEF1的表达量;干旱胁迫后丹参愈伤中SmRopGEF1表达量下降。茉莉酸甲酯诱导后SmRopGEF1表达量升高。结论 克隆了丹参SmRopGEF1基因,其在抗逆胁迫中起到重要作用并且可能参与茉莉酸甲酯信号转导。研究结果丰富了丹参防御反应机制的研究,为选育丹参抗逆优良品种、提高丹参的产量与品质提供了参考。     

刺五加特异性DNA条形码筛选、种质资源鉴定及遗传多样性分析北大核心CSCD

刺五加Eleutherococcus senticosus是东北地区道地药材之一。该研究对来源于不同道地产区的3份刺五加的叶绿体基因组进行比较分析并筛选特异性DNA条形码,并基于筛选出的特异性DNA条形码对道地产区的刺五加进行种质资源鉴定和遗传多样性分析。3个不同道地产区的刺五加叶绿体基因组全长为156779~156781 bp,叶绿体基因组呈典型的四分体结构,含有的基因数量均为132个,其中蛋白质编码基因87个,tRNA 37个,rRNA 8个,其叶绿体基因组比较保守。叶绿体基因组序列分析结果表明atpI、ndhA、ycf1、atpB-rbcL、ndhF-rpl32、petA-psbJ、psbM-psbD、rps16-psbK可作为潜在的刺五加特异性DNA条形码。该研究选择序列长度为700~800 bp且易于扩增的atpI和atpB-rbcL片段对道地产区的13个产地184份刺五加样品进行扩增,序列分析结果表明atpI和atpB-rbcL分别能鉴定9、8个基因型,2段序列联合分析形成23个基因型,命名为H1~H23,分布最广和占比最多的单倍型为H10,H2次之;单倍型多样性和核苷酸多样性分别为0.94和1.82×10^(-3),遗传多样性较为丰富;中介邻接网络分析结果显示23种基因型可分为4类,其中,单倍型H2是最古老单倍型,并以H2为中心呈星状辐射,说明其在道地产区发生种群扩张。该研究可为刺五加道地药材遗传品质研究和刺五加的叶绿体基因工程研究奠定基础,进一步加深对刺五加居群的遗传机制研究,为刺五加遗传进化研究提供新思路。     

预防医学专业学生关于问卷调查技术的相关态度及其影响因素

目的 从问卷调查技术认知、实践的角度,探讨预防医学专业学生调查问卷技术相关态度的影响因素,从而为有针对性地进行预防医学专业有关问卷调查技术教学改革提供参考.方法 对河北省2所高校公共卫生学院的预防医学专业五年级全体本科生进行调查,共计141人.自行设计调查问卷.影响因素分析采用Logistic多元回归模型.结果 调查对象认为问卷调查技术在获取人群疾病和健康信息方面的作用“很大”或“较大”者占75.17％,认为问卷调查研究结果“真实”或“较真实”者占65.25％,有58.87％认为调查问卷的科学性“很高”或“较高”,有62.41％认为开展问卷调查“很难”或“较难”.预防医学专业学生对问卷调查技术作用的态度与其调查问卷测量属性知晓情况、问卷调查基本原则的知晓情况有关,对问卷调查研究结果真实性的态度与问卷调查基本原则的知晓情况、参加问卷调查设计次数有关,参加问卷调查设计次数与学生对调查问卷工具科学性态度有关,学校、性别、调查问卷测量属性知晓情况与问卷调查研究难度态度有关.结论 预防医学医学生对问卷调查技术的认知、实践水平对其问卷调查技术相关态度有影响.建议高校加强问卷调查技术跨学科综合理论与实践教学,提升学生对问卷调查技术的正向态度.     

筋脉通胶囊通过增强背根神经节Nrf2和HO-1的表达改善糖尿病大鼠的周围神经痛简

 目的观察中药筋脉通胶囊对链尿佐菌素（STZ）诱导的糖尿病（DM）大鼠背根神经节（DRG）的核因子E2相关因子2（Nrf2）和血红素加氧酶-1（HO-1）的表达以及血浆一氧化碳（CO）含量的影响。 方法腹腔内注射STZ诱导建立DM大鼠模型,随机分为模型组、筋脉通小、中和大剂量组及硫辛酸组,并设对照组。成模后每天1次灌胃给药,持续12周。电子Von Frey仪检测机械痛阈值,免疫组化法及Rt-PCR检测DRG的Nrf2和HO-1蛋白及mRNA表达,并检测血浆一氧化碳血红蛋白（COHb）含量。 结果与对照组相比,糖尿病大鼠的机械痛阈值、血浆COHb含量以及DRG的Nrf2和HO-1蛋白及mRNA表达水平均明显下降（P＜0.01）;各治疗组的上述指标均显著回升（P＜0.01或P＜0.05）。在提高DRG的HO-1蛋白表达上,筋脉通中剂量组疗效显著优于硫辛酸组（P＜0.05）。 结论筋脉通胶囊可通过增强DRG的Nrf2、HO-1和CO表达来改善糖尿病大鼠的周围神经痛。     

温阳活血化痰方辅助治疗脓毒症心功能障碍的临床观察

目的 观察温阳活血化痰方辅助治疗脓毒症心功能障碍的临床效果。方法 将62例患者按照随机数字表法分为观察组与对照组,对照组采用西医常规治疗,观察组在对照组治疗基础上予以温阳活血化痰方治疗。观察两组临床疗效、心肌损伤标志物、炎症指标、心功能指标、急性生理和慢性健康状况评分（APACHEⅡ）、全身感染相关器官功能衰竭评分（SOFA）以及血乳酸（Lac）水平。结果 观察组临床总有效率为83.87%,明显高于对照组的58.06%(P <0.05)。治疗后两组c TnI、NT-ProBNP、CK-MB水平较前显著降低（P <0.05）,观察组降低程度更显著（P <0.05）。治疗后两组白细胞介素-6(IL-6)、降钙素原（PCT）、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平较前显著降低（P <0.05）,观察组降低程度更显著（P <0.05）。治疗后两组LVEF、E/A、SV水平较前显著上升（P <0.05）,观察组上升程度更显著（P <0.05）。治疗后两组SOFA、APACHEⅡ评分、Lac水平较前显著降低（P <0.05）,观察组降低程度更显著（P &...     

针药结合治疗进行性肌营养不良症(DMD)的临床研究

进行性肌营养不良症(DMD)是一组原发于肌肉的遗传性变性疾病。主要临床特征为受累骨骼肌肉的进行性无力和萎缩。通常儿童期发病,绝大多数为男性。临床上以假性肥大型最为常见,是儿童中常见的、发展速度快、预后不良的肌营养不良症。目前现代医学尚无疗效肯定的药物和方法。笔者采用针刺配合中西药综合疗法,治疗假性肥大型进行性肌营养不良症25例,取得了满意效果,现总结如下。1临床资料1.1一般资料:50例病例均来源于中国中医科学院望京医院病房及专家门诊,均为男性,年龄最大14岁,最小5岁,平均9.5岁。用随机法分为治疗组(电热针配合中西药物…     

吡咯烷二硫氨基甲酸酯对大鼠胃缺血/再灌注损伤的影响

目的 研究核因子κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸酯(PDTC)对大鼠胃缺血/再灌注(gastricischemia/reperfusion.GI/R)损伤的影响.方法 采用夹闭大鼠腹腔动脉30 min,去除动脉夹再灌注1 h的GI/R损伤模型,于静脉注射PDTC后,肉眼计数胃黏膜损伤指数,并运用免疫组化及TdT介导dUTP缺口末端标记(TUNEL)实验技术,观察PDTC对大鼠GI/R后胃黏膜细胞坏死、增殖和凋亡的影响.结果 夹闭大鼠腹腔动脉30 min再灌注1 h后可造成胃黏膜明显损伤,静脉注射PDTC 200 mr/ks可明显减轻GI/R损伤,并使胃黏膜细胞增殖增加、凋亡减少.结论 静脉注射PDTC对GI/R损伤具有保护作用,这种保护作用是通过促进胃黏膜细胞增殖、抑制胃黏膜细胞凋亡而实现的.     

滋水清肝饮临床应用进展

目的通过对现有滋水清肝饮的文献进行收集整理,为临床治疗提供依据。方法检索万方数据库,查阅了近15年的中医药文献。结果各科疾病中以肾虚为主,肝经郁热,皆可用滋水清肝饮化裁治疗。结论滋水清肝饮滋在各科治疗中均有疗效,但在妇科中疗效显著,妇科主要应用于更年期综合征。     

Effects of Jinmaitong Capsule (筋脉通胶囊) on Ciliary Neurotrophic Factor in Sciatic Nerves of Diabetes Mellitus Rats

Objective:To study the effects of the Chinese medicine Jinmaitong Capsule(筋脉通胶囊,JMT) on the pathomorphology of sciatic nerves,ciliary neurotrophic factor(CNTF),and the mRNA expressions of CNTF in rats with streptozotocin-induced diabetes mellitus(STZ-DM).Methods:The animal model was established by one time intraperitoneal injection of streptozotocin.The rats were simply divided by random into 5 groups including model group,low-dose JMT group(JL),medium-dose JMT group(JM),high-dose JMT group(JH) and neurotropin group.For each of the above 5 groups,a group of 10 normal Wistar rats matched in body weight,age and gender were set as normal group.Intragastric administrations were started after the animal model established.The JL group were administered with five times the JMT dose recommended for a human adult;the JM group were administered with ten times the JMT dose recommended for a human adult;the JH group were administered with twenty times the JMT dose recommended for a human adult.The neurotropin group was administered with ten times the neurotropin dose recommended for a human adult.All rats were given intragastric administration for 16 weeks and then killed.In the 4th,8th,12th,16th week,body weight and blood glucose level were detected before and after the intervention.The morphologic changes of the sciatic nerves were observed by optical microscope and transmission electron microscope.The CNTFmRNA expressions were detected by real-time fluorescent quantitative polymerase chain protein,and the CNTF protein expressions were detected by immunohistochemical method.Results:The blood glucose levels of the STZ-DM rats were much higher than normal group(P<0.01),and there was no apparent difference between any treatment groups and the model group(P>0.05).Before and after the intervention in the 4th, 8th,12th,16th week,there were no significant differences in the body weight among all the groups(P>0.05). The sciatic nerves of STZ-DM rats might have pathomorphological changes in axons,myelin sheaths,and interstitium.The levels of CNTF and CNTF-mRNA expressions in the STZ-DM rats were both significantly decreased(P<0.01).The sciatic nerves of STZ-DM rats might have pathomorphological changes in axons, myelin sheaths,and interstitium.Conclusion:JMT could improve the pathomorphology of sciatic nerves by increasing CNTF’s and CNTF-mRNA expressions in sciatic nerve tissues,and promote the repair and regeneration of damaged nerve fibers.