4种常见清热燥湿类中药对肠道菌群及粪便胆汁酸和短链脂肪酸代谢的影响

  目的  探究在长期临床等效剂量下4种清热燥湿类中药对正常小鼠肠道菌群、胆汁酸及短链脂肪酸的影响。  方法  30只Balb/c雄性小鼠被随机分为对照组、苦参组、黄连组、黄柏组和黄芩组, 每组各6只。除对照组外, 苦参组、黄柏组、黄连组和黄芩组给药剂量分别为2.34、3.12、1.3 g·kg-1和2.6 g·kg-1, 连续灌胃2周, 采用液相色谱-串联质谱法检测粪便中短链脂肪酸和胆汁酸含量, 利用16S rRNA高通量基因测序技术分析肠道内容物中菌群结构变化。  结果  清热燥湿类中药对正常小鼠粪便中6种短链脂肪酸无明显影响。在常见的23种胆汁酸中, 与正常组相比, 黄芩组、苦参组、黄连组和黄柏组分别有4、3、2、1种胆汁酸显著变化。从肠道菌群丰度变化上看, 与对照组相比, 除苦参组外, 黄连组、黄芩组和黄柏组小鼠厚壁菌门均呈现下降趋势, 拟杆菌门均呈现上升趋势, 其中黄连组变化更显著。  结论  苦参、黄柏、黄连和黄芩对正常小鼠长期药效剂量下短链脂肪酸影响较小, 但可以通过改变肠道菌群结构影响胆汁酸含量的变化。      

基于UHPLC-Q-TOF/MS的地榆化学成分分析及大鼠体内代谢研究

目的  采用超高效液相色谱和-四级杆串联飞行时间质谱(UHPLC-Q-TOF/MS)法分析地榆水提物在大鼠血清、尿液及粪便中的原型成分及代谢产物, 探讨地榆中活性成分在大鼠体内的代谢途径。方法  采用Thermo AcclaimTM RSLC 120 C₁₈色谱柱(3.0 mm×100 mm, 2.2 μm), 以0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱, 流速0.4 mL·min-1, 进样量3 μL, 柱温40 ℃。运用电喷雾离子源(ESI), 扫描范围m/z 50~1 500, 正、负离子模式采集数据。通过比较灌胃地榆水提物后大鼠血清、尿液和粪便样品和空白组样品的差异, 对原型成分及其代谢产物进行鉴定。结果  灌胃给予地榆水提物后, 从大鼠血清、尿液及粪便中鉴定出69个外源性成分, 包括24个原型成分和45个代谢产物。其中24个原型成分包括16个酚类成分、7个三萜类成分及1个单萜烯醇苷。地榆水提物在大鼠体内的代谢途径主要包括还原、甲基化、脱水、氧化、硫酸化及葡萄糖醛酸结合等。结论  所鉴定出的原型成分和代谢产物可为进一步解析地榆体内代谢过程, 阐明其药效物质基础提供实验依据。      

达立通颗粒主要活性成分在正常及功能性消化不良模型大鼠胃肠道组织中差异分布研究

目的 研究达立通颗粒主要活性成分在正常和功能性消化不良(FD)模型大鼠胃肠道组织中的分布差异。方法 采用夹尾刺激结合不规律饮食双因素干预方法建立FD模型。12只大鼠(对照、模型各6只)用于FD模型验证,进行胃、小肠排空实验,HE染色后进行胃肠组织病理学观察;36只大鼠(对照、模型各18只)用于胃肠道组织差异分布研究,禁食不禁水18 h,按22.4 g·kg^-1剂量(8倍临床等效剂量) ig给予达立通颗粒1次,于给药后1、3、6 h收集各组大鼠的胃、十二指肠、空肠、回肠和结肠。应用超高效液相色谱-串联四级杆/线性离子阱质谱(UPLC-QTRAP-MS/MS)法检测各组织牡荆素-4''-O-葡糖苷、原阿片碱、黄连碱、小檗碱、甜橙黄酮、川陈皮素、桔皮素、去甲基川陈皮素、木香烃内酯、去氢木香内酯、原儿茶酸、伞形花内酯、木犀草苷、橙皮苷、木犀草素、柚皮素、橙皮素、白杨素含量,采用ACQUITY HPLC^TMHSS T₃(50 mm×2.1 mm,1.8 μm)色谱柱,柱温为40℃,0.1 %甲酸水-乙腈为流动相,梯度洗脱,体积流量为0.3 mL·min^-1,进样量为2 μL。结果 与对照组比较,模型组大鼠体质量显著降低(P<0.001),胃、小肠排空率显著降低(P<0.001),十二指肠肠黏膜的紧密连接被破坏,但未出现胃肠组织的器质性病变,符合FD的病理特征。建立的UPLC-QTRAP-MS/MS方法中,各化合物线性关系良好,R² ≥ 0.990 0。对建立的检测方法进行专属性、精密度与准确度、提取回收率、稳定性和基质效应等方面的考察,均符合要求。各成分在对照和模型组大鼠胃肠道组织中浓度差异明显,且在各组织中达到最高浓度的时间点差异较大,模型组出现达峰时间延后的现象;与对照组比较,模型组大鼠胃组织中化合物的暴露水平降低,可能与FD引起胃肠道蠕动减慢有关。橙皮苷、橙皮素、柚皮素、原儿茶酸、去氢木香内酯、川陈皮素、去甲基川陈皮素、小檗碱和桔皮素在胃、十二指肠、空肠、回肠和结肠中暴露水平较高,且在对照组和模型组中各时间点下的浓度差异较显著。结论 经方法学验证,所建立的UPLC-QTRAP-MS/MS法灵敏、专属性强、准确性高,适用于大鼠胃肠道组织中达立通颗粒主要活性成分的胃肠组织分布研究。达立通颗粒主要活性成分在正常和FD模型大鼠胃肠组织分布具有显著性差异。