人线粒体DNA荧光定量PCR检测方法的建立

建立SYBR Green I实时荧光PCR定量检测人线粒体DNA的方法。选取人线粒体DNA高度保守基因片段,将该基因片段与pCF-T载体连接后,转化入E.coli DH5α,提取重组质粒PCR及测序鉴定后,作为阳性模板建立SYBR-Green I荧光定量PCR标准曲线和熔解曲线。结果表明:构建的标准曲线线性关系良好(反应体系中含101~108拷贝时,扩增反应CT值与拷贝数的对数成线性关系),相关系数为0.997。批内和批间重复性测定的变异系数分别为1.23%~3.29%以及3.10%~5.21%。我们成功建立了实时荧光定量PCR检测人线粒体DNA的方法,该方法可作为进一步研究线粒体DNA的方法,在相关疾病诊断和监测中具有一定的应用前景。     

实验动物离体受精卵的发生、分化及保存的研究

研究目的 1973年前后,牛受精卵移植达到了实用化。但在基础研究领域还有许多没有完全搞清楚的问题,特别是基础研究与实用化相结合方面,尚有不少问题,有待改进。本试验首先通过激素处理来观察鼠超数排卵后受精卵的状态,在研究受精卵回收、体外培养及冻结保存问题后,再使用牛进行了超数排卵处理和回收卵的状态、回收方法的改进、受精卵的短期保存及体外培养等的研究,兹分述如下。采用鼠卵探索回收卵的实验使用的受精卵来自静冈县实验动物研究所饲养在北海道大学医学系附属实验动物设施的dd系小鼠。饲养条件:照明时间6—18时,温度保持在25℃,采用小鼠标准固形饲料(MR)。小鼠在25日龄前后进行     

IL-2 preS DNA疫苗免疫正常小鼠和HBV转基因鼠的免疫应答研究

目的 探讨IL—2 preS DNA疫苗作为预防和治疗性疫苗的可行性及作用机理。方法 应用基因重组技术，构建人白细胞介素2(hIL-2)和前表面抗原(preS)的真核表达载体，将此重组载体用基因枪分别注射正常的BALB／c小鼠和HBV转基因小鼠，通过ELISA方法检测BALB／c小鼠和HBV转基因鼠的抗-preS2、HBsAg及抗-HBs抗体水平；荧光定量PCR方法检测HBV转基因鼠血清中HBV DNA拷贝数，并用免疫病理HE染色观察小鼠肝组织炎症活动度，同时检测肝功能指标。结果 ①基因枪注射真核表达质粒免疫正常小鼠后，100％小鼠能在第4、6周检测到抗preS1抗体，持续时间长达10周。②用IL-2 preS真核表达质粒基因枪肌肉注射方式优于正常肌肉注射和皮下注射的方式，且所需质粒量(10μg／只)仅为后者(100μg／只)的1／10。③在第4周高峰期检测IgG亚类，是诱导以TH1(IgG2a)细胞免疫为主的反应。④基因枪注射真核表达质粒(1μg／只)免疫转基因小鼠后，80％的小鼠产生了抗体，HBV DNA量下降，其中20％的小鼠HBsAg转阴。⑤HE肝组织染色显示：肝组织有明显的炎细胞浸润、肝细胞肿大、颗粒样变性、转氨酶升高。结论 IL-2 preS DNA疫苗能刺激小鼠机体产生体液和细胞免疫，可部分打破小鼠机体的免疫耐受，为新型乙肝疫苗和抗HBV持续性感染的特异性免疫治疗剂的设计和构建提供理论与实践依据。     

HBeAg阴性乙肝患者HBV-DNA与ALT关系

我们收集HBeAg阴性乙肝患173例，对其HBV-DNA及ALT关系分析如下。     

酵母样真菌的培养鉴定及其耐药性分析

目的 对引起感染的酵母样真菌类型及其耐药特性进行研究,以指导临床合理用药.方法 从2005年1月～2007年12月我院临床送检的血液、中段尿、粪便、痰、胸腹水、伤口分泌物、穿刺液等标本中,采用常规方法培养和分离酵母样真菌,用法国生物梅里埃ATB-EXPRESS系统对酵母样真菌进行鉴定,用ATB-FUNGUS药敏试条进行药敏试验.结果 共分离到484株酵母样真菌,其中白色假丝酵母菌占42.4%,热带假丝酵母菌占27.9%,光滑假丝酵母菌占10.5%,清酒假丝酵母菌占7.0%,近平滑假丝酵母菌占2.3%,克柔假丝酵母菌占2.7%,中间假丝酵母菌占4.1%,其他酵母菌占3.1%.酵母样真菌对两性霉素B敏感,对5-氟胞嘧啶、氟康唑、伊曲康唑存在不同程度的耐药.结论 临床需要加强真菌送检培养,合理使用抗真菌药物,尽量避免单纯经验用药,以减少耐药菌株的出现.     

线粒体DNA异质性检测方法研究进展

线粒体是真核细胞内的重要细胞器,能量生成的场所,参与脂肪酸的合成及某些蛋白质的合成,也是核外惟一的遗传物质。线粒体在生物的生长、发育、代谢、衰老、疾病、死亡以及生物进化等方面都有非常重要的意义。由于线粒体DNA具有母系遗传、拷贝数多、阈值效应、较高的突变率和序列的多样性等特点,因此线粒体DNA异质性在生物学、医学、法医、生物技术等领域有重要的应用。近几年来,mtDNA异质性研究的新成就为揭示许多疾病的发生机制提供了新的线索。现就线粒体DNA异质性检测方法及研究等进行综述。     

The Experimental Study on Treating Transgenic HBV Mice with Recombined IL-2-PreS DNA Vaccine

There are estimated 350 million chronic HBV carriersworldwide, third in China [1]. Unfortunately, there is nogood curative therapy approach for these patients. The pro tein vaccine contains surface protein of HBV (encoded Sgene), which (produced in…     

衰老过程中线粒体DNA数量变化观察

线粒体作为真核细胞中一种重要而独特的细胞器，其性状改变与衰老过程密切相关。近年来关于线粒体在衰老过程中的作用已引起广泛关注，但有关衰老中线粒体数量变化的研究相对较少。因此本研究采用SYBR Green I荧光定量PCR对98例不同年龄组单个核细胞的线粒体DNA（mtDNA）数量进行检测，以探讨衰老过程mtDNA数量差异，寻求衰老检测指标。     

浅谈咳嗽的辨证施护

咳嗽是呼吸系统疾病的主要证候之一 ,临床上极为常见。我们在做好基础护理的同时 ,进行辨证施护 ,收到了良好的效果 ,现介绍如下。1　外感咳嗽1 .1　风寒型　感受风寒 ,肺失宣降 ,咳嗽声浊 ,痰白清稀 ,鼻塞流涕 ,恶寒发热 ,无汗头痛 ,舌苔薄白 ,脉浮紧。此证型咳嗽的护理以防寒保暖为主 ,勿复感风寒 ,加重病情。指导患者汤剂温热服用 ,服药后要加盖衣被 ,亦可在服药后进食热米粥以助药力 ,使汗出邪去。以苏叶 1 0ｇ泡水温服 ,既可补充体液损伤 ,又能止咳。饮食宜温热清淡 ,量不宜多。1 .2　风热型　风热之邪犯肺 ,肺失清肃 ,炼液为痰 ,故发…