HBsAg中蛋白与IL-18联合核酸免疫HBsAg转基因小鼠的实验研究

对乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)转基因小鼠鼠系所进行的ＨＢＶ核酸疫苗免疫转基因小鼠的实验研究〔1,2〕 提示核酸疫苗有治疗潜力。本研究的目的是研究在白细胞介素 18(ＩＬ 18)的辅助作用下 ,ＨＢＶ表面抗原中蛋白核酸疫苗免疫ＨＢｓＡｇ转基因小鼠的效果。材料与方法质粒构建 :引物设计 :上游引物 :5′ ＧＴＡＣＴＧＣＡＧＧＣＣＡＴＧＣＡＧＴＧＧＡＡＴＴＣＣ 3′ ;下游引物 :5′ ＧＴＡＧＡＴＣＴＧＡＧＡＧＴＡＡＣＣＣＣＡＴＣＴＣＴＴＴＧ 3′。ＰＣＲ法扩增ＨＢｓＡｇ中蛋白基因序列 ,将ＰＣＲ产物亚克隆至ｐＧＥＭＴｅａｓｙ载体 (Ｐｒ…     

逆转录病毒载体介导乙型肝炎病毒反义基因的转录表达

为了探索在真核细胞内转录表达乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）反义核酸的方法，用基因重组技术将ＨＢＶ前Ｃ／Ｃ基因（ＰｒｅＣ／Ｃ）和前Ｓ／Ｓ基因（ＰｒｅＳ／Ｓ）片段反向插入逆转录病毒载体质粒，再将重组体分别转染ＰＡ３１７包装细胞，进而获得能够介导ＨＢＶ反义基因向小鼠ＮＩＨ３Ｔ３细胞转移表达的重组逆转录病毒。经分子杂交试验表明，含有ＨＢＶ反义基因的重组逆转录病毒序列已经整合到转染的ＰＡ３１７细胞染色体上；转导的ＮＩＨ３Ｔ３细胞内有ＨＢＶ反义ＲＮＡ转录表达。结论：逆转录病毒载体包装细胞系统能够介导ＨＢＶ反义基因在真核细胞中转录表达，因而有可能利用反义技术和基因转移方法进行抗－ＨＢＶ基因治疗     

趋化因子受体CCR5反义RNA在真核细胞中的表达

目的 构建趋化因子受体CCR5反义RNA真核表达载体并获取重组假病毒颗粒以用于抗HIV-1研究，方法 用RT-PCR法从健康人外周血单个核细胞（PBMCs)中获得趋化因子受体CCR5翻译起始区的基因片段，并以正、反两个方面定向插入到真核表达载体pLXSN上，重组载体用脂质体转染剂（lipofectAMINE)转染PA317包装细胞，抗-G418克隆的细胞上清经逆转录后用荧光定量PCR（FQ-PCR）测定假病毒滴度，进一步感染NIH/3T3细胞。结果 CCR5正、反义RNA的真核表达载体。经PA317细胞包装形成的假病毒颗粒已成功地感染NIH/3T3细胞，目的基因在该细胞中得到整合与表达。结论 从PBMCs中获得的趋化因子受体CCR5基因片段通过逆转录病毒载体可转移至真核细胞中并得到表达，为进一步研究CCR5反义RNA的抗HIV-1作用奠定了基础。     

丙型病毒性肝炎的非输血途径传播

已证实输血和血制品为引起丙型病毒性肝炎(丙肝)的主要传播途径,但约有1/3的丙肝患者并无输血及血制品史,国内外学者均在探索ＨＣＶ感染的其他途径。我们在ＣＭＢ项目基金资助下,于1996～1997年对丙肝病毒非输血传播途径进行了研究,对接受血液透析的肾功能不全患者、梅毒?..     

CCR5反义RNA重组表达载体的构建及鉴定

目的构建趋化因子受体CCR5反义RNA真核表达载体以用于抗HIV-1的研究.方法用RT-PCR从健康人外周血单个核细胞(PBMCs)中获得趋化因子受体CCR5翻译起始区的基因片段,用基因重组技术将此目的基因以正、反两个方向定向插入到逆转录病毒载体pLXSN.用PCR、内切酶分析及序列测定鉴定.重组载体用脂质体转染剂(lipofectAMINE)转染PA317包装细胞,建立稳定表达重组假病毒颗粒的包装细胞系.结果从正常人PBMCs中获得的目的基因成功地构建了CCR5反义RNA重组表达载体,重组载体已在PA317细胞中得到整合.结论构建的CCR5正、反义RNA表达载体可有效地感染PA317细胞并在基因组中整合,为进一步研究CCR5反义RNA的抗HIV-1的作用奠定了基础.     

慢性乙型肝炎患者体内乙型肝炎病毒准种特点的初步研究

一、资料与方法1.血清来源和ＤＮＡ分离 :血清来源 :其一为乙型肝炎肝硬化患者 ,其二为病毒性肝炎患者 ,均为女性 ,临床检测ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、抗 ＨＢｃ阳性。其他肝炎病毒标志检测阴性。静脉采血 5ｍｌ,提取血清中的ＤＮＡ。2 .ＰＣＲ扩增目的片段 :以Ｇａｎ等[1] 发表的序列为依据 ,参照其他ａｄｒ亚型[2 4 ] 的基因序列设计引物。ＰＣＲ扩增产物 ,按ＴＡ克隆方法亚克隆目的片段。3 .重组质粒提取和限制片段长度多态性 (ＲＦＬＰ) :将所有阳性菌落重新划线增殖后 ,提取质粒 ,ＥｃｏＲＩ酶切质粒 ,以观察酶切片段长度多态性。4.Ｄ…     

乙型肝炎病毒准种研究的临床意义

0引言乙型肝炎病毒(HBV)感染,不仅引起急性?慢性病毒性肝炎,而且与肝纤维化?肝细胞癌(HCC)的发生和发展密切相关[1].不同的HBV感染患者体内的HBV基因序列是不同的,也得到了人们的广泛的重视,这就是HBV不同的基因型(genotype)和血清型(serotyp e)[2].但是,针对HBV感染特定的患者来说,虽然个体病毒基因突变的研究得到了重视,但体内不同的HBV拷贝之间基因序列的关系究竟如何,多少年来相对受到忽视.研究表明,HBV感染个体的体内HBV不同病毒基因序列在统计学上高度一致,基因序列的同源性高达95%以上,但每株病毒的基因序列都不相同,这种…     

促肝细胞生长素治疗重型肝炎及慢性重度肝炎的临床研究

促肝细胞生长素是一种多肽物质,是临床治疗重型肝炎的有效新药,动物试验证实对实验性小鼠的肝损伤有保护肝细胞功能的作用[1].亦可用于治疗慢性病毒性肝炎[2,3],为进一步观察促肝细胞生长素的有效性及安全性,1999年11月至2000年12月全国42家医院进行了多中心的临床验证,现总结如下.     

磺酸左氧氟沙星对细胞内HBV S区及C区HBV RNA的影响

目的 研究磺酸左氧氟沙星对2.2.15细胞内HBV S区及C区的HBV RNA的影响.方法 用荧光PCR定量法分别检测细胞内HBV DNA、HBV S区及C区的HBV RNA含量;并用固相放射免疫法测细胞上清HBsAg、HBeAg的P/N值.结果 2.2.15细胞内HBVS区及C区的HBVRNA含量分别为0.4pg/ml和0.27pg/ml,细胞上清HB-sAg及HBeAg分别为42.1和36.0.磺酸左氧氟沙星作用8天后,HBV RNA含量分别下降为0.2pg/ml和0.13pg/ml(P<0.05),对两者的抑制率分别为50%和48.1%;HBsAg及HBeAg分别下降为6.0和16.2(P<0.05),其抑制率分别为85.7%及55.6%(P<0.05),用药前2.2.15细胞内HBV DNA为2.97pg/ml,用药后降至0.44pg/ml(P<0.05),抑制率为85.2%.结论 磺酸左氧氟沙星抗HBV的作用可能是通过影响HBV 3.5kb及2.1kb RNA的稳定性及翻译表达来实现.     

D-青霉胺治疗慢性活动性肝炎的疗效和毒性反应7例疗效总结

为了进一步观察D-青霉胺(以下简称D-Pen)治疗慢性活动性肝炎(以下简称慢活肝)的疗效和毒性反应,我们以D-Pen治疗慢活肝共7例(门诊5例病房2例),现报道如下: D-Pen剂量:第一周0.375克/日,第二周0.5克/日,第三周0.75克/日,第四周以后改为1.0克/日,服前先做青霉素皮试,并辅以维生素B_(co)、C及B_6等。木组有2例并用强的松龙,每隔日30毫克。 一、观察结果:本组7例慢活肝均属无效,