急性髓细胞白血病患者外周血淋巴细胞亚群的特征及临床意义

目的通过检测急性髓细胞白血病患者外周血各淋巴细胞亚群的分布,探讨该类患者免疫功能状况。方法通过流式细胞术检测健康对照组(n=20)、急性髓细胞白血病初发患者(n=31)及完全缓解期患者(n=31)外周血中CD4+T细胞、CD8+T细胞、TCRγδ+T细胞、CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)、CD16+CD56+NK细胞比例;通过细胞杀伤实验分析NK细胞和γδT细胞的杀伤活性以及与Treg的关系。结果与对照组相比,初发白血病患者和完全缓解患者外周血中CD4+T细胞、CD8+T细胞比例无明显差异,但CD4+CD25+Treg比例明显增高,TCRγδ+T细胞和CD16+CD56+NK细胞比例明显下降。初发病患者NK细胞和γδT细胞具有杀伤活性,但Treg能明显抑制其杀伤活性。结论急性髓细胞白血病患者外周血γδT和NK细胞虽具有杀伤功能,但比例明显下降,Treg对其杀伤功能具有抑制作用。     

人ULBP1重组蛋白的克隆表达和多克隆抗体制备

目的:表达人UL16结合蛋白l(ULBP1)胞外段重组蛋白,并制备兔抗人ULBP1多克隆抗体.方法:利用RT-PCR技术获得人ULBP1分子胞外段的基因编码序列,并将其亚克隆至原核表达载体pQE30,构建重组表达质粒pQE30-ULBP1.测序鉴定正确后转化入大肠杆菌感受态细胞M15,经IPTG 30℃诱导4h后,对表达产物进行鉴定.用镍柱对人ULBP1重组蛋白进行纯化,并将纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔,采用流式细胞术(FCM)、Western blot法对制备的多克隆抗体进行生物学鉴定.结果:成功构建了原核表达载体pQE30-ULBP1(aa81～244),并获得了高纯度的人pQE30-ULBP1 (aa81～244)重组蛋白.制备的多克隆抗体能够识别肺癌细胞株A549表面表达的天然构象ULBP1分子.结论:成功表达了人ULBP1(aa81～244)重组蛋白并成功制备了兔抗人ULBP1的多克隆抗体.     

小窝蛋白-1敲减对人甲状腺上皮细胞趋化因子mRNA表达的影响

目的: 探讨小窝蛋白-1（Caveolin-1）RNA干扰慢病毒对人甲状腺上皮细胞Nthy-ori 3-1趋化因子mRNA表达的影响。方法: 采用分子克隆技术,根据Caveolin-1的短发夹RNA序列,构建pLKO.1-Caveolin-1重组质粒,将其或空载质粒与慢病毒包膜质粒pMD2.G和包装质粒psPAX2共转染人胚肾上皮293T细胞。48 h后收集病毒液并感染Nthy-ori 3-1细胞,用嘌呤霉素筛选出阳性细胞,于倒置显微镜下观察Nthy-ori 3-1细胞的生长情况;荧光实时定量PCR和蛋白质印迹检测Caveolin-1的敲减效果;荧光实时定量PCR检测CXC趋化因子配体10（CXCL10）、CC趋化因子配体20（CCL20）mRNA表达水平。结果： 慢病毒感染后的Nthy-ori 3-1细胞生长状态良好,Caveolin-1的表达显著降低。抑制Nthy-ori 3-1细胞中Caveolin-1表达后,其CXCL10、CCL20的mRNA表达水平显著上调。 结论： 成功构建Caveolin-1 RNA干扰慢病毒,Caveolin-1可能通过影响某些趋化因子的表达,参与桥本甲状腺炎的发生。     

小窝蛋白-1对人甲状腺上皮细胞增殖、凋亡及胞内活性氧水平的影响

目的: 探讨小窝蛋白-1（Caveolin-1）对人甲状腺上皮细胞系Nthy-ori 3-1增殖、凋亡和胞内活性氧产生的影响。方法: 将正常人甲状腺上皮细胞（Nthy-ori 3-1）分为实验组和阴性对照组,分别转染 Caveolin-1敲减病毒上清液以及阴性对照病毒上清液,以未转染的Nthy-ori 3-1细胞为空白对照组,应用嘌呤霉素筛选出阳性细胞,qRT-PCR和蛋白质印迹检测3组细胞Caveolin-1的mRNA和蛋白表达;MTT 法检测Caveolin-1敲减后细胞增殖能力变化;流式细胞术检测Caveolin 1敲减后细胞的凋亡率;荧光探针DCFH-DA法检测Caveolin-1敲减后细胞内活性氧水平。结果： Caveolin 1抑制性慢病毒感染后,Nthy-ori 3-1细胞Caveolin 1 mRNA和蛋白水平均显著降低（P均<0.01）。抑制Caveolin-1表达后,Nthy-ori 3-1细胞增殖能力较阴性对照组明显降低,凋亡率明显增加,细胞内活性氧水平明显升高（P 均<0.01）。结论： Caveolin-1表达降低通过增加胞内活性氧水平和细胞凋亡,抑制细胞增殖,介导甲状腺上皮细胞损伤。     

长链非编码RNA HOTAIR在食管鳞癌中的表达及意义

目的: 研究食管鳞癌患者长链非编码RNA HOTAIR (long non-coding RNA HOTAIR, lncRNA HOTAIR)的表达、临床意义及其与转化生长因子β1(TGF-β1)间的关系。方法: 实时荧光定量PCR技术检测57例食管鳞癌患者癌组织与癌旁组织中HOTAIR及TGF-β1 mRNA的表达水平,分析HOTAIR mRNA表达与患者临床病理特征的关系。结果： 食管鳞癌组织中HOTAIR mRNA表达较癌旁组织明显升高（Z=-2.507,P=0.012）,TGF-β1 mRNA表达明显降低（Z=-2.038,P=0.042）。癌组织中HOTAIR mRNA表达与肿瘤分化程度及临床分期有关,与TGF-β1 mRNA表达呈负相关（r=-0.406,P=0.002）。结论： lncRNA HOTAIR与食管鳞癌的发生发展及其恶性程度显著相关,可能通过TGF-β1通路起作用。     

脂多糖对甲状腺上皮细胞增殖、吞噬及胞内活性氧产生的影响

目的: 研究脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）对甲状腺上皮细胞（thyroid follicular cells,TFCs）的增殖、凋亡、吞噬和胞内活性氧产生的影响,探讨脂多糖对TFCs的病理损伤作用。方法: 用0、10、20、100、150 ng·mL-1的脂多糖作用TFCs系Nthy-ori 3-1细胞48 h及100 ng·mL-1的脂多糖作用Nthy-ori 3-1细胞24 h和48 h,MTT法检测各组细胞的增殖;流式细胞术检测100 ng·mL-1脂多糖作用Nthy-ori 3-1细胞48 h时的凋亡率。荧光微球摄入法检测0、10、20、100 ng·mL-1脂多糖作用12 h后Nthy-ori 3-1细胞的吞噬功能;荧光探针DCFH-DA法检测0、10、20、100 ng·mL-1脂多糖作用4 h后Nthy-ori 3-1细胞胞内活性氧水平。结果： 与未处理组比较,100 ng·mL-1脂多糖明显促进Nthy-ori 3-1细胞的增殖和提高胞内活性氧的水平（P<0.01）,20 ng·mL-1和100 ng·mL-1脂多糖促进Nthy-ori 3-1细胞的吞噬功能（P<0.01和P<0.05）,而100 ng·mL-1脂多糖对Nthy-ori 3-1细胞凋亡的影响无统计学意义（P>0.05）。 结论： 脂多糖通过促进TFCs增殖、上调吞噬功能和提高胞内活性氧水平,发挥对TFCs的病理损伤作用,提示脂多糖对桥本甲状腺炎的发生可能有重要作用。     

血清CEA、CA242和PET/CT显像联合检测对胰腺癌的诊断价值

目的 探究血清癌胚抗原(CEA)、糖链抗原242(CA242)及计算机断层扫描(PET/CT)联合检测对胰腺癌的诊断价值。方法 回顾性选取2016年6月至2020年10月拟诊断为胰腺癌的患者106例为研究对象。所有患者均术前进行血清CEA、CA242检测及PET/CT显像检查,分析血清CEA、CA242与PET/CT显像联合检测对胰腺癌患者的临床诊断价值。结果 106例拟诊断为胰腺癌的患者行手术病理显示胰腺癌患者88例,胰腺良性疾病者18例。胰腺癌组血清CEA、CA242水平分别为(18.58±5.69)ng/mL、(41.55±14.42)U/mL,均高于胰腺良性组的(10.92±2.24)ng/mL、(18.68±6.25)U/mL (P<0.05)。PET/CT影像显示胰腺癌患者病灶可见18F-FDG代谢增加,且病变局部放射性浓集明显增高,胰腺良性疾病中显示病变局部放射性浓集不增高或轻微增高。PET/CT影像检查诊断胰腺癌的敏感度、特异度、准确度分别为88.6%、77.8%、86.79%,血清CEA诊断胰腺癌的敏感度、特异度、准确度为84.1%、66.7%、81.13%,血...     

人ULBP3在不同肿瘤细胞和肿瘤组织的检测及分析

目的研究UL16结合蛋白3(ULBP3)在不同类型肿瘤细胞和不同实体肿瘤中的表达。方法流式细胞术检测膜型ULBP3在SW620结直肠癌细胞、SGC7901胃癌细胞、A549肺癌细胞和结肠腺癌、胃腺癌、肺腺癌组织中的表达情况,免疫组织化学染色检测肿瘤组织中ULBP3的表达;时间分辨荧光免疫分析法检测肿瘤细胞株培养上清和肿瘤患者血清可溶性ULBP3(sULBP3)的水平。反转录PCR方法检测ULBP3 mRNA在肿瘤中的表达。结果 ULBP3在SW620细胞、SGC7901细胞中表达,在A549细胞中不表达;ULBP3在结直肠腺癌、胃腺癌、肺腺癌组织中广泛分布;sULBP3存在于SW620细胞、SGC7901细胞培养上清液和结直肠腺癌、胃腺癌、肺腺癌患者血清中。结论 ULBP3可在不同实体中肿瘤细胞表达,血清sULBP3是潜在的肿瘤标志物。     

人UL16结合蛋白3的原核表达及其多克隆抗体制备

目的:表达和纯化人UL16结合蛋白3(ULBP3)胞外段融合蛋白,制备兔抗人ULBP3多克隆抗体。方法:利用PCR技术获得人ULBP3分子胞外段的基因编码序列,并将其亚克隆至原核表达载体pQE30,构建出重组表达质粒pQE30-ULBP3(aa30-171)。测序鉴定正确后转化入大肠杆菌感受态细胞M15,经IPTG 30℃诱导4 h后,SDS-PAGE显示融合蛋白(表达产物)以包涵体形式存在。用镍柱对融合蛋白进行纯化,将纯化的蛋白免疫新西兰白兔,采用流式细胞术(FCM)、Western blot法和免疫组化染色对所得多克隆抗体的生物学特性进行鉴定。结果:成功表达及纯化了人ULBP3(aa30-171)重组蛋白。结果显示该多克隆抗体能够识别大肠癌细胞株COLO205表面表达的天然构象ULBP3分子,而且能与结直肠癌组织细胞的ULBP3分子结合。结论:成功构建了原核表达载体pQE30-ULBP3(aa30-171),并获得高纯度的人pQE30-ULBP3(aa30-171)重组蛋白;成功制备了兔抗人ULBP3分子的多克隆抗体。