黄连解毒汤对UC小鼠的抗炎作用、入血成分测定及其作用靶点的虚拟筛选

考察黄连解毒汤(HLJD)对小鼠溃疡性结肠炎(UC)的作用,测定入血成分以及虚拟筛选入血成分的作用靶点,分析作用机制。将60只Balb/c小鼠随机分成空白组、模型组、美沙拉秦组(0.3 g·kg^-1)以及HLJD高、中、低剂量组(24.66,12.33,6.17 g·kg^-1)。除空白组外,各组小鼠自由饮用2.5%葡聚糖硫酸钠溶液诱导UC,同时HLJD组和美沙拉秦组小鼠灌胃给予相应药物,连续7 d。每日观察小鼠,进行疾病活动指数(DAI)评分。实验末,HE染色观察小鼠结肠病理变化,ELISA测定结肠组织中IL-1β,IL-6和TNF-α含量,UPLC-Q-TOF-MS测定入血成分。通过PharmMapper反向对接筛选入血成分的作用靶点,通过TTD,OMIM,GeneCards数据库检索UC疾病靶点,选取成分靶点和疾病靶点的交集作为HLJD治疗UC的作用靶点。利用STRING数据库进行GO和KEGG富集分析。利用Discovery Studio将入血成分与排名靠前的作用靶点进行分子对接。结果显示,与空白组相比,模型组小鼠DAI显著上升(P<0.05),镜下可见炎症细胞数量和浸润程度明显增加。与模型组相比,HLJD组小鼠DAI显著降低(P<0.05),炎症细胞数量和浸润程度减轻。模型组IL-1β,IL-6和TNF-α水平显著升高(P<0.01),HLJD组炎症因子水平显著降低(P<0.05)。经UPLC-Q-TOF-MS鉴定10个入血成分。网络药理学分析结果显示,作用靶点主要富集在对有机物、化学物质、含氧化合物的反应等129条生物过程,以及IL-17,TNF,hepatitis B等16条信号通路。分子对接结果显示,黄柏内酯、巴马汀和小檗碱可通过氢键等形式与CASP3和MMP9靶点结合。综上所述,HLJD可减轻DSS诱导的UC小鼠结肠黏膜炎症浸润和黏膜损伤,其作用机制可能与黄柏内酯、巴马汀和小檗碱等入血成分作用于CASP3,MMP9等靶点,进而调控IL-17,TNF等信号通路有关,最终可降低结肠组织IL-1β,IL-6和TNF-α水平发挥抗炎作用。     

颗粒包衣工艺提高鱼腥草素钠的稳定性

目的:对鱼腥草素钠(SH)进行颗粒包衣,提高其稳定性。方法:采用羟丙甲基纤维素(HPMC)为包衣材料,用流化床项喷技术对SH颗粒进行包衣,以收率为指标,考察了包衣增重、增塑剂用量、包衣温度、黏合剂等因素对包衣收率的影响,筛选包衣处方及优化制备工艺参数,并通过稳定性考察包衣后鱼腥草素钠的稳定性。结果:优化后的包衣处方是包衣增重为15%,增塑剂用量为5%,包衣温度为60℃。包衣颗粒中SH含量是(86.6±0.4)%(g/g,n=9)。SH包衣颗粒在高温、高湿条件下放置10 d,稳定性很好。结论:SH原料颗粒经过HPMC包衣后能有效提高其稳定性。     

基于灰色关联分析的芒果叶提取物抗炎作用的谱效关系

目的:探讨芒果叶提取物的高效液相色谱(HPLC)图谱中主要色谱峰与抗炎药效的相关性,为表征芒果叶抗炎作用物质基础提供依据。方法:采用HPLC法建立芒果叶不同极性提取物的指纹图谱。取昆明小鼠随机分别为模型组、地塞米松阳性对照组、芒果叶提取物100 g·kg-1组,模型组给生理盐水,其余各组给予相应药物,灌胃给药,连续5 d,经二甲苯造模后,测定耳肿胀度。数据经统计分析后,采用灰色关联分析谱效关系。结果:芒果叶不同极性溶剂提取物的HPLC指纹图谱有明显差异,从HPLC指纹图谱中共提取14个能够表征药材特征的共有峰。不同极性提取物的抗炎作用存在显著差异。与模型组比较,地塞米松组具有显著抑制小鼠耳肿胀作用(P<0.05);与模型组比较,芒果叶(红象牙和台农一号)的三氯甲烷、乙酸乙酯提取物均无显著抗炎作用,其他溶剂提取物具有显著抗炎作用(P<0.05)。灰色关联分析明确了X1,X3和芒果苷对抗炎作用贡献程度最大。结论:芒果叶提取物抗炎作用的部分物质基础是芒果苷及X1,X3峰。灰色关联是研究中药谱效关系的有效手段。     

离体人肠道菌群对柚皮苷的代谢动力学分析

目的:研究人肠道菌群对柚皮苷的代谢程度与速度,为该成分的新药开发提供参考。方法:采集健康志愿者新鲜粪便制备肠道菌群混悬液,与柚皮苷在厌氧环境下孵育,运用HPLC监测柚皮苷浓度变化,HPLC-MS鉴定代谢产物结构。柚皮苷HPLC色谱条件为检测波长288 nm,流动相甲醇-0.1%磷酸溶液梯度洗脱。结果:柚皮苷与人肠道菌群共同孵育15 min后,柚皮苷色谱峰后面可见1个代谢产物;孵育至120 min时,柚皮苷代谢率100%。经HPLC-MS鉴定代谢产物为柚皮素。柚皮苷代谢过程符合非线性动力学过程。HPLC监测发现柚皮素可被进一步代谢,导致柚皮素峰面积降低。结论:柚皮苷可被人肠道菌群代谢,代谢速度快,代谢产物主要为柚皮素,可能存在柚皮苷的二级代谢产物。     

星点设计-效应面法优选金银花中绿原酸回流提取工艺

[目的]优选金银花中绿原酸回流提取工艺。[方法]以绿原酸提取量为指标,乙醇浓度、回流时间及溶剂量为考察因素,采用星点设计-效应面优化法优选提取工艺条件,并进行预测分析。[结果]最优提取工艺条件为乙醇浓度65%、提取时间120min、溶剂用量12倍,二项式拟和复相关系数较高(r=0.9921),提取率预测值与理论值偏差率为-3.79%。[结论]星点设计-效应面法优选金银花提取工艺方法简单、精密度高、预测性好。     

超临界萃取檀香、乳香、青木香混合物及GC-MS分析的初步研究

目的 :确立超临界萃取檀香、乳香、青木香混合物的最佳条件 ,并对其挥发油成分进行分析。方法 :采用正交试验设计方法 ,以超临界样品GC-MS图谱中主要峰的总相对百分含量为考察指标 ,对超临界萃取檀香、乳香、青木香混合物中总挥发油的条件进行优化 ,并采用气相色谱 -质谱联用技术对超临界样品进行分析鉴定。结果 :最佳萃取工艺为压力15mPa,萃取4h,萃取温度40℃ ;GC -MS分析共鉴定出3个化合物。结论 :萃取工艺可行 ,萃取物的成分鉴定有待进一步研究。     

基于网络药理学分析龙血竭缓解实验性溃疡性结肠炎小鼠结肠黏膜损伤的作用机制

目的考察龙血竭(CDB)对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎(UC)的作用,以及通过网络药理学预测CDB潜在的主要活性成分、作用靶点、信号通路。方法利用DSS诱导小鼠UC模型。Balb/c小鼠随机分为对照组,模型组,CDB组高、中、低剂量组及美沙拉嗪对照组,每组10只。除对照组外,各组小鼠自由饮用3.0%DSS溶液,连续7 d,CDB组、美沙拉嗪组在造模期间ig给予对应的药物,每天称量小鼠体质量,进行隐血实验,观察动物粪便性状,进行DAI评分,实验末处死小鼠,取结肠进行HE染色并评分。通过TCMSP、String、Cytoscape等在线数据库构建"化合物-化合物靶点-疾病靶点"网络,提取核心化合物靶点、化合物作用的疾病靶点,对相关靶点进行GO、KEGG富集分析,分析CDB治疗UC可能调控的生物过程及作用机制。结果与对照组比较,模型组小鼠炎症细胞浸润明显,大量杯细胞消失,病变程度波及肌层甚至全层;CDB组大鼠杯细胞重新长出,病变程度仅限于黏膜层,炎症减轻。通过网络药理学筛选出CDB的作用靶点112个,其中ABL1、F2、JAK2等14个核心化合物靶点可作用于ICAM1、IL-6、PTGS2、MTOR等11个疾病靶点。GO分析中包含415条富集通路,其中生物过程389条,分子功能9条,细胞组成17条。利用KEGG数据库对入选靶点进行相关通路富集,筛选出84条通路与UC有关。结论 CDB可以缓解DSS诱导的UC小鼠结肠黏膜损伤,可能通过剑叶龙血素C等黄酮类成分调控ABL1、F2、JAK2等靶点表达,然后间接调控IL-6、PTGS2等疾病蛋白表达,进而干预JAK2/STAT3、PI3K-Akt-m TOR通路,调节炎症因子的水平,抑制炎症反应,最终缓解UC小鼠结肠黏膜损伤。     

白茅根挥发油的气相色谱-质谱联用分析

目的研究白茅根挥发油中的化学成分。方法采用水蒸气蒸馏法提取白茅根中的挥发油,运用气相色谱-质谱法对其进行分析,结合计算机检索对其化学成分进行鉴定,并采用面积归一化法计算各组分的相对含量。结果从白茅根中共分离得到12个成分,经计算机谱库检索鉴定了10个化合物的化学结构,占挥发油总量的99.71%。其中相对含量较高的是亚油酸（44.99%）、棕榈酸（35.23%）、顺-7-十四烯醛（13.82%）。结论该方法简便快速、灵敏度高、重现性好,适用于白茅根挥发性成分的分析。     

芒果苷PVP固体分散体的制备和表征及在体外肠道菌群模型中的代谢

目的：制备芒果苷（MGF）聚乙烯吡咯烷酮（PVP）固体分散体（MGF-SD）,提高MGF的溶解度和溶出速度,并对比考察MGF、MGF-SD在体外肠道菌群模型中的代谢差异。方法：以PVP为载体材料,采用共沉淀法制备MGF固体分散体,通过差示扫描量热法（DSC）、X射线粉末衍射法（XRD）和红外光谱（IR）表征其物相特征。采用摇瓶法测定MGF、MGF-SD溶解度。采集健康志愿者新鲜粪便,制备肠道菌群混悬液,分别与MGF、MGF-SD在厌氧环境下孵育,HPLC法监测MGF含量变化。结果：当MGF与PVP的质量比分别为1∶2,1∶4,1∶9时,MGF溶解度分别提高了432,513,633倍。DSC、XRD和IR均显示,MGF-SD中MGF晶体结构发生破坏,以非晶状态存在。体外释放度测定结果表明,MGF-SD中MGF释放速度快于MGF原料。与MGF原料相比,MGF制备成固体分散体后,离体人肠道菌群对MGF的代谢速度降低。结论：MGF制备成PVP固体分散体后,MGF以非晶型分子状态高度分散在载体材料中,MGF溶出度与溶解度显著提高,同时可减慢肠道菌群对MGF的代谢,有利于提高MGF口服生物利用度。     

广西特色壮药金边蚂蟥抗痛风活性成分研究

目的：研究金边蚂蟥中具有抗痛风作用的活性成分。方法：采用次黄嘌呤复制小鼠高尿酸血症模型,二甲苯诱导小鼠耳郭肿胀模型,热板法、扭体法筛选金边蚂蟥的活性部位,筛选金边蚂蟥活性成分,观察金边蚂蟥抗抗痛风作用的物质基础。结果：金边蚂蟥水溶性部位是其抗痛风的活性部位,可降低次黄嘌呤诱导的高尿酸血症小鼠的血清尿酸水平,可抑制二甲苯诱导的小鼠耳郭肿胀,可减少醋酸诱导的小鼠扭体反应和增加小鼠热板痛阈;水溶性部位中水蛭素是主要活性成分。金边蚂蟥活性成分（水蛭素）0.8 g/kg和0.4 g/kg及金边 蚂蟥续滤粉2.0 g/kg 可显著降低血清尿酸水平,血清尿酸水平由模型组的232.73±50.93 umol/L 分别下降到140.70±25.97 umol/L、149.07±39.28 umol/L、176.45±44.33 umol/L（P ＜ 0.01）;金边蚂蟥活性成分（水蛭素）0.8 g/kg、0.4 g/kg和0.2 g/kg及金边蚂蟥续滤粉2.0 g/kg可明显抑制二甲苯引起小鼠耳郭肿胀,肿胀度由22.80±2.86 mg分别抑制到20.10±2.18 mg、19.80±2.57 mg、20.10±1.66 mg、20.85±1.60 mg（P ＜ 0.05）;金边蚂蟥活性成分（水蛭素）0.8 g/kg,可明显降低醋酸引起的小鼠扭体次数,次数由22.80±2.86次降到20.10±2.18次（P ＜ 0.05）。结论：金边蚂蟥抗痛风的活性部位是水溶性部分,其中水蛭素是其主要活性成分。