尼非韦罗阴道温敏原位凝胶的流变学研究

目的:应用动态流变实验测定温度敏感型原位凝胶的流变性质,以预测其在体胶凝(相变)行为。方法:通过处方筛选,确定以泊洛沙姆407和188作为基质,制备尼非韦罗阴道温敏原位凝胶(NFVR-TISG)。通过差示扫描热量法(DSC)测定NFVR-TISG胶凝温度。采用动态流变学实验测定NFVR-TISG在不同温度下相变过程中的流变参数,及NFVR-TISG经模拟阴道夜稀释(5∶1)后的流变参数。结果:NFVR-TISG在室温条件下为黏弹性较低的牛顿流体,温度升至29℃时形成凝胶状态;相变行为表现为黏弹性呈指数增长,相角降低;流变学结果显示的胶凝温度与DSC结果(30.4℃)基本一致;模拟阴道液稀释后NFVR-TISG约在35℃发生相转变。结论:体外流变学特点显示NFVR-TISG符合临床阴道局部用药物要求。用于体外评价的动态流变学实验可反映温敏凝胶的黏弹性流体力学特点。     

流式细胞术在外用避孕药精子功能评估中的应用

流式细胞术(flow cytometry,FCM)是一种单细胞快速定量分析技术,为精子功能研究提供了一种高通量、多参数的检测手段。FCM在外用避孕药对精子功能评估中的应用,主要包括精子质膜完整性、DNA完整性、顶体反应、线粒体功能、氧化应激和精子凋亡等方面。表明FCM是精子功能研究的有效工具,有助于阐明新型外用避孕药的药效和作用机制。     

uPA-/-小鼠肝纤维化模型中的a-SMA、MMP13表达分析与模型评价

目的 采用uPA基因缺失(uPA-/-)小鼠构建肝纤维化动物模型,经a-平滑肌肌动蛋白(a-SMA)与金属基质蛋白酶-13(MMP13)的表达分析,评价其可行性.方法 选取成年雄性BL/6J野生型和uPA-/-基因缺失型小鼠,分为4组:对照组(Con-WT,Con-uPA-/-)和模型组(Mod-WT,Mod-uPA-/-),每组20只.模型组小鼠腹腔注射10％ CCl4,对照组小鼠腹腔注射橄榄油,每周2次,连续6周,诱导小鼠肝纤维化.用Real-time PCR方法检测小鼠肝脏组织中a-SMA和MMP13的mRNA表达,Western blot及免疫组化分析a-SMA和MMP13的蛋白表达.结果 Real-time PCR结果显示,uPA-/-小鼠的肝脏中a-SMA、MMP 13的mRNA表达量显著高于WT小鼠；Western blot结果显示,a-SMA蛋白和MMP13蛋白在对照组小鼠肝脏中几乎不表达,在Mod-WT中有少量表达,在Mod-uPA-/-中表达明显增多；免疫组化结果显示,Mod-uPA-/-的a-SMA和MMP13表达高于Mod-WT.结论 a-SMA的mRNA和蛋白表达在uPA-/-小鼠中均明显升高,uPA基因的缺失促进了肝星型细胞向肌成纤维细胞的转化,从而加速了细胞外基质蛋白在肝脏中的沉积；MMP13蛋白表达在肝纤维化模型小鼠中均有明显升高.uPA基因缺失(uPA-/-)小鼠是建立肝纤维化模型的易感品系.     

脱氧胆酰酪氨酸热敏凝胶剂对小型猪阴道黏膜免疫炎症反应的研究

目的探讨脱氧胆酰酪氨酸热敏凝胶剂(deoxycholyltyosine thermoreversible gel,DCT gel)对小型猪阴道黏膜的炎性细胞数量及活化状态的影响。方法将9只雌性小型猪随机分为基质对照组、壬苯醇醚胶冻剂(Nonxgnol-9gel,N-9 jelly)组和DCT gel组,肌注苯甲酸雌二醇12 d后开始阴道给药,每天1次连续给药7 d,在末次给药后24与72 h,收集阴道灌流(Cervicovaginal lavage,CVL)液,流式细胞仪计数炎性细胞和中性粒细胞数目,并对CD45+细胞进行表型分析,比较不同给药组之间的差别。结果 DCT gel组CVL液中炎性细胞、中性粒细胞数目以及CD45+细胞数目明显低于N-9 jelly组(P0.001),与基质对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论脱氧胆酰酪氨酸热敏凝胶剂(DCT gel)不会引起小型猪阴道黏膜的明显刺激,未诱导局部炎性细胞的活化,作为外用杀精剂具有一定的临床应用前景。     

余甘子提取物的急性毒性、遗传毒性和亚急性毒性研究

目的探讨余甘子的急性毒性、遗传毒性和亚急性毒性。方法采用最大耐受剂量法进行小鼠急性经口毒性试验,通过Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和小鼠精子畸形试验检测余甘子的遗传毒性,大鼠灌胃给药30d观察其亚急性毒性。结果余甘子药液对雌雄小鼠的LD50均大于20 000 mg/kg。三项遗传毒性试验结果均为阴性(P0.05),亚急性毒性试验期内各试验组动物生长发育良好,各项指标均在正常值范围内,病理组织学检查未见明显异常。结论余甘子属于无毒级,在所测剂量及检测指标范围内未发现遗传毒性和亚急性毒性。     

基于3R原则探讨动物实验中人道终点的判定与应用

实验动物人道终点作为3R原则中优化原则的主要体现和应用,已被国际社会所认可并形成了完善的法律法规体系,伴随着我国在实验动物福利伦理方面所取得的巨大进步,实验动物人道终点的实践也得到了较大的应用和发展。通过对动物人道终点的判定原则和方法进行探讨,在最大程度保障动物福利的前提下,有效保证了动物实验数据的真实性、准确性和完整性,为从事动物实验的研究人员提供了一定的参考。     

邻苯二甲酸二丁酯对亲代和子代斑马鱼生殖毒性的比较研究

目的 探讨邻苯二甲酸二丁酯(DBP)对亲代(F0)、子代(F1)斑马鱼的生殖毒性.方法 将48对成年斑马鱼随机分为4组:空白对照组、溶剂对照组、625 mg/L DBP低剂量组和1 250 mg/LDBP高剂量组.连续染毒DBP 30 d后,将各组F0代斑马鱼交配,记录产卵数、受精率以及72 h孵化率.将F0和F1代斑马鱼在清水中饲养180d,进行F1代斑马鱼交配试验,且将F1代DBP高剂量组与对照组斑马鱼进行置换交配,记录产卵数、受精率及孵化率.进行F0代和F1代斑马鱼性腺组织病理学检查,并测定卵黄蛋白原(VTG) mRNA的表达水平.结果 与对照组和DBP低剂量组相比,DBP高剂量组F0代和F1代斑马鱼的生殖能力显著下降;置换交配实验显示DBP对雄性斑马鱼的生殖能力影响更为显著.组织病理学检查显示F0代雄鱼精巢中精子数量减少,间质细胞稍有增多,精母细胞增多.而F1代雄鱼精巢发育受到明显抑制,出现生精小管畸形,精子数量明显减少,以及间质细胞增生.RT-PCR结果显示DBP各剂量组F0代和F1代雄性斑马鱼VTG基因无明显表达,提示DBP对斑马鱼无雌激素样效应.结论 DBP高剂量组染毒可影响F0代和F1代斑马鱼的正常发育,使产卵量减少,受精率显著下降.F0代和F1代雄性斑马鱼生精小管畸形、精巢中精子数量减少与间质细胞增生同时存在.