冠状动脉微栓塞后大鼠心肌组织炎症细胞因子表达和心功能的动态变化及关系

目的:探讨大鼠冠状动脉微栓寒(CME)后心肌组织中炎症细胞因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β及IL-10的表达和心功能动态变化及其关系.方法:经左心室心尖部注射42μm的微球,建立大鼠CME模型.将大鼠随机分为CME组和假手术组,以注射生理盐水为假手术组(每组n=50).按CME后3 h、6 h、12 h、24 h、4周共5个时间点(各时间点n=10)分为不同时间观察.采用逆转录--聚合酶链反应和免疫组织化学方法检测各组大鼠微栓塞后不同时间点心肌组织内TNF-α、IL-1β、IL-10的动态表达规律及其与心功能变化的关系.结果:CME组与假手术组比较,在CME后3 h、6 h、12 h、24 h心肌组织中TNF-α、IL-1β和IL-10信使核糖核酸、蛋白表达均升高,差异均有统计学意义(P均<0.05).心脏超声显示与假手术组比较,CME组在微栓塞后3 h、6 h、12 h、24 h和4周的左心室射血分数均下降,差异均有统计学意义(P均<0.05).CME组中3 h、6 h、12 h、24 hTNF-α信使核糖核酸(mRNA)和IL-1β mRNA表达量分别与左心室射血分数呈显著负相关(P均<0.05).CME组内各时间点微梗死面积和炎症细胞浸润比较差异无统计学意义(P均>0.05).结论:CME后TNF-α、IL-1β和IL-10在心肌组织中表达均显著增高,并在微栓塞后12 h达到高峰,24 h后明显下降.同时心功能也随着炎症细胞因子的变化而改变,提示CME后心肌组织TNF-α、IL-1β等炎症细胞因子表达的显著增加在心肌损伤中发挥重要作用.     

鞣花酸对皮肤基底细胞癌A431和HSC-2细胞增殖、凋亡、侵袭能力的影响

目的探讨鞣花酸对皮肤基底细胞癌A431和HSC-2细胞增殖、凋亡、侵袭能力的影响。方法选择表皮癌细胞系A431和皮肤鳞状细胞癌细胞HSC-2,应用10μg/ml的鞣花酸干预24 h,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,膜连蛋白V(Annexin V)-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室实验检测细胞侵袭。结果10μg/ml鞣花酸可显著抑制A431和HSC-2细胞增殖,干预24 h后,A431细胞抑制率为(28.48±0.46)%,HSC-2细胞抑制率为(21.47±1.02)%。鞣花酸干预后A431活细胞比例为(63.21±4.35)%,明显低于干预前的(90.37±2.35)%(P<0.01);鞣花酸干预后HSC-2活细胞比例为(79.21±2.32)%,低于干预前的(85.37±1.55)%(P<0.05)。鞣花酸干预后A431侵袭细胞个数为(23.26±7.23)/HP,明显低于干预前的(58.24±4.23)/HP(P<0.01);鞣花酸干预后HSC-2侵袭细胞个数为(22.56±2.23)/HP,明显低于干预前的(48.44±3.13)/HP(P<0.01)。结论鞣花酸不仅能够抑制A431和HSC-2细胞增殖,诱导其凋亡,还能够抑制其侵袭,有望成为治疗皮肤基底细胞癌的新药物。     

美托洛尔对大鼠冠状动脉微栓塞后心肌细胞凋亡及caspase-12活化的影响及意义

目的： 探讨美托洛尔对大鼠冠状动脉微栓塞后心肌细胞凋亡及caspase-12活化的影响及意义。方法： 30只大鼠随机分为假手术组、微栓塞组、美托洛尔组（每组n＝10）,经左室注入42 μm微栓塞球,建立大鼠冠状动脉微栓塞模型,假手术组注射生理盐水代替微栓塞球,美托洛尔组为微栓塞术前30 min静脉注射美托洛尔。各组术后6 h分别心脏超声检测左室射血分数（LVEF）,TUNEL检测心肌细胞凋亡,Western blotting 检测凋亡蛋白caspase-12的活化。结果：① 与假手术组比较,微栓塞组LVEF显著下降（P＜0.05）;与微栓塞组比较,美托洛尔组LVEF没有显著差异。② 与假手术组比较,微栓塞组心肌细胞凋亡率、活化的caspase-12含量显著增加（均P＜0.05）;与微栓塞组比较,美托洛尔组心肌细胞凋亡率、活化的caspase-12含量显著减少（均P＜0.05）。结论： 美托洛尔抑制大鼠冠状动脉微栓塞后心肌细胞凋亡及caspase-12活化。     

TUNEL检测心肌细胞凋亡的影响因素探讨

目的：探讨避免TUNEL法检测心肌细胞凋亡出现的假阳性和消除非特异性反应的方法以及选择合适的蛋白酶K浓度。方法：4%多聚甲醛固定心肌组织,制作石蜡切片。①将试剂盒说明常规步骤加以改良,将0.3%H2O2放在反应液标记DNA片段之后,先后用小牛血清或羊血清两次封闭非特异性反应;②按蛋白酶K不同剂量分为10、20μg/mL蛋白酶K和不加蛋白酶K组（均n=5）,再按照改良的TUNEL法检测心肌细胞凋亡。结果：①改良TUNEL法,避免了假阳性,背景清晰;②未加蛋白酶K组较10或20μg/mL蛋白酶K组心肌细胞凋亡率显著减少（均P〈0.05）,两组蛋白酶K组心肌细胞凋亡率差异未见有统计学意义（P〉0.05）。结论：①改良后的TUNEL方法适用于心肌细胞凋亡的检测;②TUNEL法检测心肌细胞凋亡选择10、20μg/mL蛋白酶K是适当的。     

大鼠冠状动脉微栓塞模型的建立

目的建立大鼠冠状动脉微栓塞（Coronary Microembolization，CME）模型。方法S-D雄性大鼠随机分为假手术组（S0组），微栓塞组（CME组）；CME组再按微球数目不同分为1000、2000、3000、4000个微球亚组（分别计为CME1、CME2、CME3、CME4组，各组存活大鼠均n=10）；大鼠麻醉后开胸，夹闭升主动脉10s，从左心室注射微栓塞球到达冠状动脉记为CME组，以注射生理盐水为假手术组；分别于术后6h心脏超声检测左室射血分数（LVEF）、HBFP检测心肌微梗死面积和TUNEL检测心肌细胞凋亡卒。结果①与s。组比较，CME，组LVEF下降，但没有统计学意义；与S0组比较，CME2、CME3、CME4组LVEF均显著下降（均P〈0．05）；CME组均出现心肌微梗死灶与心肌细胞凋亡。②不同微栓塞亚组之间比较，LVEF与微栓塞球数目成负相关（γ=0．78，P〈0．05）、心肌微梗死面积和心肌细胞凋亡率均与微栓塞数目成正相关（γ分别为0．85、0．80，均P〈0．05）。③3000个微球是较理想的建立大鼠CME模型所需的微球数日。结论开胸大鼠，从左室注入微栓塞球3000个，可成功建立大鼠CME模型。     

大鼠冠状动脉微栓塞致心肌细胞凋亡与天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶活化的动态变化及关系

目的 探讨大鼠冠状动脉微栓塞致心肌细胞凋亡与天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-12活化的动态变化规律及其关系.方法 选取成年雄性SD大鼠,建立冠状动脉微栓塞模型,随机分为微栓塞组、假手术组.每组存活大鼠再随机分为3 h、6 h、12 h、24 h、4周组,各时间点各组大鼠均为10只.另10只大鼠作正常对照组.缺口末端标记法检测心肌细胞凋亡,免疫印迹法检测Caspase-3及Caspase-12酶原及其活化产物,荧光酶标法检测Caspase-12活性.结果 (1)与正常对照组、假手术组相应时间点比较,微栓塞组各时间点心肌细胞凋亡率显著升高(均P<0.05),心肌细胞凋亡主要分布在微梗死区及其边缘区.微栓塞组心肌细胞凋亡率在3 h、6 h、12 h、24 h、4周分别为(1.76±0.68)%、(3.17±1.26)%、(1.34±0.12)%、(1.07±0.65)%、(0.30±0.13)%,冠状动脉微栓塞后6 h心肌细胞凋亡达高峰(均P<0.05).(2)与正常对照组、假手术组相应时间点比较,微栓塞组各时间点Caspase-3、Caspase-12的相对活化水平升高(均P<0.05),其随时间变化规律与心肌细胞凋亡的时间变化规律一致.结论 大鼠冠状动脉微栓塞致心肌细胞凋亡增加,在微栓塞后6 h达高峰,具有动态变化规律.Caspase-12可能参与了冠状动脉微栓塞致心肌细胞凋亡.     

β-肾上腺素能受体信号通路介导的炎症因子在心肌损伤中的作用

炎症反应是各类心脏疾病发生、发展的重要环节,主要表现为各种炎症因子的释放和炎症细胞的浸润,在心肌梗死、心衰、心肌重构中发挥重要作用.β-肾上腺素能受体(β受体)是调节心脏功能的主要受体,β受体兴奋后导致许多炎症因子的变化,两者之间的信号通路非常复杂,本文将探讨β受体与主要炎症因子之间的信号转导机制.     

美托洛尔对大鼠冠状动脉微栓塞心肌中炎性细胞因子表达及心功能的影响

目的探讨美托洛尔对大鼠冠状动脉微栓塞心肌组织中炎性细胞因子表达及心功能的影响。方法雄性SD大鼠162只,经左心室注射42μm微栓塞球,建立大鼠冠状动脉微栓塞模型,将存活的100只大鼠随机分为微栓塞组(CME组,50只)、关托洛尔组(CME-M组,50只),另以左心室注射等量生理盐水为假手术组(S组,50只),各组按注射后3、6、12、24 h、4周共5个时间点,每个时间点各10只,观察炎性细胞因子在心肌组织中表达水平及对心功能的影响。结果与S组比较,CME组在微栓塞后3、6、12、24 h时间点TNF-α、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素10(IL-10)的mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05),LVEF显著下降(P<0.05),4周两组比较,无统计学差异。与CMF组比较,CME-M组3、6、12、24 h时间点TNF-α、IL-1β的mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05),IL-10的mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05),4周两组比较,无统计学差异。与CME组比较,CME-M组12、24 h和4周LVEF显著升高(P<0.05)。结论美托洛尔可以明显改善冠状动脉微栓塞后心功能损伤,其作用机制可能与心肌炎性细胞因子表达有关。