p21对肝癌细胞中survivin转录的影响及调控机制的探讨

目的 研究细胞周期依赖性激酶抑制蛋白p21对人肝癌细胞survivin转录抑制的调控作用,并探讨其相应机制.方法 使用多柔比星处理人肝癌细胞株HepG2,采用脂质体法将质粒pEGFP-C2-p21导入HepG2细胞,用G418筛选转染后的HepG2-p21和HepG2-pEGFP细胞;采用实时定量聚合酶链反应(RQ-PCR)检测p21、p53和survivin的mRNA表达;采用流式细胞仪分析转染后细胞周期的变化;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染后E2F-1和p300的mRNA表达.结果 经多柔比星处理后,HepG2细胞中p21和p53 mRNA的表达先增高,然后逐渐降低;survivin mRNA的表达则相反.转染后,HepG2-p21细胞中p21 mRNA的表达明显增高,分别为HepG2和HepG2-pEGFP细胞的2100.1倍和980.9倍;survivin mRNA的表达却明显降低,分别为HepG2和HepG2-pEGFP细胞的0.5%和0.6%;p53 mRNA的表达差异无统计学意义.流式细胞仪检测显示,HepG2-p21细胞的细胞周期明显阻滞在G0/G1期.HepG2-p21细胞中E2F-1和p300 mRNA的表达水平分别为0.75±0.04和0.18 ±0.06,与HepG2和HepG2-pEGFP细胞比较,含量均明显减低(P＜0.05).结论 p21可能通过抑制survivin的转录调控因子E2F-1和p300 mRNA的表达,从而抑制细胞中survivin的表达,并导致细胞出现G0/G1期阻滞.     

Identification and Characterization of Peptide Mimics of Blood Group A Antigen

In order to investigate peptide mimics of carbohydrate blood group A antigen, a phage display 12-mer peptide library was screened with a monoclonal antibody against blood group A antigen, NaM87-1F6. The antibody-binding properties of the selected phage peptides were evaluated by phage ELISA and phage capture assay. The peptides were co-expressed as glutathione S-transferase （GST） fusion proteins. RBC agglutination inhibition assay was performed to assess the natural blood group A antigen-mimicking ability of the fusion proteins. The results showed that seven phage clones selected bound to NaM87-1F6 specifically, among which, 6 clones bore the same peptide sequence, EYWYCGMNRTGC and another harbored a different one QIWYERTLPFTF. The two peptides were successfully expressed at the N terminal of GST protein. Both of the fusion proteins inhibited the RBC agglutination mediated by anti-A serum in a concentration-dependent manner. These results suggested that the fusion proteins based on the selected peptides could mimic the blood group A antigen and might be used as anti-A antibody-adsorbing materials when immunoabsorption was applied in ABO incompatible transplantation.     

中国人群白细胞介素-13基因多态性与哮喘易感性关系的Meta分析

目的评价白细胞介素-13基因多态性与中国人群哮喘易感性的关系。方法检索中文及外文数据库,全面收集2010年8月之前发表的研究中国人群IL-13基因多态性与哮喘相关性的病例对照研究,对采纳的数据进行Meta分析。结果9篇文献被纳入分析,其中涉及C1923T多态性的文献5篇、G2044A多态性的文献5篇。Meta分析计算合并比值比（95％可信区间）：TT／CC基因型为4．15（2．83～6．09,P=0．000）;CT／CC基因型为1．97（1．53～2．53,P=0．000）：AA／GG基因型为1．92（1．00～3．72．P=0．051）;GA／GG基因型为1．44（1．14～1．82,P=O．000）。TT／CC、AA／GG、GA／GG研究数据不存在发表偏倚（P值分别为0．175、0．968、0．633）;CT／CC研究数据存在发表偏倚（P=0．010）。结论当前的研究支持IL-13＋1923位点基因型1T和＋2044位点基因型GA是哮喘发病的危险因素．＋1923位点基因型CT和＋2044位点基因型AA与哮喘发病尚无明确关系。     

A抗原表位模拟多肽融合表达载体的构建及鉴定

目的:构建血型A抗原模拟多肽融合表达载体,初步鉴定融合表达蛋白结合抗A抗体的能力.方法:PCR扩增血型A抗原模拟多肽(P17)和谷胱苷肽S-转移酶(GST)编码基因,并连接成P17-GST.双酶切后克隆入原核表达质粒pET 28 b,酶切、测序鉴定.以BL21(DE3)为表达菌,在IPTG诱导下表达P17-GST融合蛋白,Ni-NTA柱纯化蛋白.红细胞凝集抑制实验分析融合蛋白模拟血型A抗原的能力.结果:成功构建P17基因和GST基因融合的原核表达质粒pET28b-P17-GST,目的基因可以高效表达,纯化的融合蛋白以浓度依赖的方式抑制A型红细胞的凝集作用.结论:血型A抗原的模拟多肽序列与GST的融合表达蛋白可特异性结合抗A抗体,具有替代血型A多糖抗原潜能,为发展新型的抗A抗体滤除材料提供了依据.     

血型A抗原的模拟多肽的表达及功能研究

目的融合表达血型A抗原的模拟多肽，初步鉴定融合蛋白结合抗A抗体的能力。方法PCR克隆扩增血型A抗原模拟多肽（P5）和谷胱苷肽S-转移酶（GST）编码基因，并连接成P5-GST。双酶切后克隆入原核表达质粒pET28b，经E．coil DH5a扩增后纯化并酶切、测序鉴定。以BL21（DE3）为表达菌，在IPTG诱导下表达P5-GST融合蛋白．Ni-NTA柱纯化蛋白。红细胞凝集抑制实验分析融合蛋白模拟血型A抗原的能力。ABO-EIJSA初步分析P5．GST融合蛋白检测血型抗体的效能。结果成功构建P5基因和GST基因融合的原核表达质粒pET28b-P5-GST，目的基因可以高效表达，纯化的融合蛋白具有良好的模拟血型A抗原的能力。基于P5-GST融合蛋白的ABO—ELISA具有一定的检测血浆抗A抗体的能力。结论血型A抗原的模拟多肽序列与GST的融合表达蛋白具有特异性结合抗A抗体的特性，本融合蛋白具有替代血型A多糖抗原潜能，为发展新型的抗A抗体检测方法提供依据。     

噬菌体展示技术在病毒研究中的应用

噬菌体展示技术是近些年发展起来的一项新技术。在蛋白质，小分子活性物质以及抗原抗体间相互作用的研究中应用广泛。本文就噬菌体展示技术在病毒研究中的应用现状作一综述。     

噬菌体展示技术在病毒研究中的应用

噬菌体展示技术是近些年发展起来的一项新技术.在蛋白质,小分子活性物质以及抗原抗体间相互作用的研究中应用广泛.本文就噬菌体展示技术在病毒研究中的应用现状作一综述.     

用噬菌体展示随机12肽库筛选HCV B细胞抗原表位

目的用患者血清中抗丙型肝炎病毒(HCV)抗体从噬菌体展示随机12肽库筛选HCV抗原表位。方法用硫酸铵粗提HCV患者血清中Ig后用DEAE—Sephadex A50层析纯化并作为筛选的配基;对噬菌体展示随机12肽库采用配基亲和富集、阴性血清吸收的方法进行生物淘洗;ELISA鉴定筛选克隆的结合特性;测定阳性克隆所携带DNA序列并进行计算机辅助分析。结果三轮生物淘洗后特异性克隆得到了富集。用第3轮淘洗出的26个克隆进行结合实验,其中有3个克隆与HCV患者血清结合力较高而与正常人血清结合能力较弱;序列分析发现2个序列与HCV蛋白第1082～1093和1954～1965位(1082YHGAGTRTIASP 1093和1954TQLLRRLHQWIS 1965)氨基酸有较高的同源性;计算机辅助分析提示这两个位点具有形成表位的性质。结论获得了两个HCV抗原表位,在HCV感染的检测中具有潜在的应用价值。     

血型A抗原模拟多肽与抗A抗体的分子对接

目的：从分子结构水平研究血型A抗原及其模拟多肽（肽P1 QIWYERTLPFTF,肽P2EYWYCGMNRTGC）与血型A抗体的相互作用。方法：利用Chimera软件构建血型A抗原模拟多肽（P1,P2）的三维结构;将天然血型A抗原及其模拟多肽通过Autodock软件与血型A抗体Fv段（PDB：1jv5）对接。结果：天然血型A抗原和多肽P1、P2都能与1jv5分子中一个由疏水性氨基酸组成的凹槽对接,且对接部位重叠。天然A抗原和P1可以与1jv5形成2个氢键,且天然抗原和模拟多肽都能够与1jv5中的多个氨基酸相合作用。结论：通过生物信息学计算软件成功模拟了血型A抗原及其模拟多肽与抗体1jv5的相互作用情况。此2个模拟多肽是从功能上对天然A抗原进行模拟的。