应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术检测载脂蛋白 E基因多态性

[目的]应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术检测人类载脂蛋白 E(apoE)基因的多态性.[方法]用 PCR扩增出含 apoE两个单核苷酸多态性( SNPs)位点 (334 T/C和 472 C/T)的 DNA片段作为模板,经延伸反应,产物纯化后利用 MALDI-TOF MS进行检测.从而确定样本 apoE基因型.[结果]应用本技术对 50例广东地区无关个体进行 apoE 基因多态性检测,共检出 3种常见的 apoE基因型,其中以 apoEΣ 3/3型最多,占总数的 74.00%;等位基因频率分布以ε 3( 87.00%)最高.[结论]本实验建立的基于 MALDI-TOF MS与引物延伸技术检测 apoE基因多态性的方法 ,具有快速、准确和可靠的特点.     

小鼠巨噬细胞炎性蛋白-1β和Ret蛋白融合基因的克隆、表达与纯化

目的构建小鼠巨噬细胞炎性蛋白-1β（murine macrophage inflammatory protein 1β,mMIP-1β）与原癌基因REF的融合基因并构建融合基因mMIP-REF的原核表达载体,在大肠杆菌中进行表达。方法用RT-PCR方法分别扩增mMIP1β和REF的基因片段,利用分子克隆的方法将这两个片段用铰链GGIPG连接,并克隆到表达载体pET22b中。双酶切且测序正确后转化大肠杆菌BL21,构建表达pET22b mMIP1β-REF／His融合蛋白的菌株。经IPTG诱导表达后,ProBond Resin进行亲和层析纯化,然后纯化产物进行复性及超滤浓缩。结果成功克隆mMIP1β和REF基因片段;成功地构建了pET22b mMIP1β-RET／His融合蛋白原核表达载体,在大肠杆菌中获得表达,并对表达产物进行了纯化,和Western blot鉴定。结论成功制备高纯度mMIP1β-Ret／His融合蛋白,为进一步研究修饰的肿瘤抗原的生物学功能奠定了基础。     

人外周血sjTREC水平与年龄的相关性调查

目的探讨人外周血中sjTREC水平及其与年龄的相关性。方法收集225例不同年龄健康人外周血样品,抽提基因组DNA,利用实时定量PCR技术,定量测定不同年龄组外周血中sjTREC含量的分布情况。sjTREC含量与年龄的关系作相关分析;各年龄组性别差异作t检验。结果 225例外周血sjTREC含量随年龄增长逐渐减少;对0～14岁、15～54岁及55岁以上3组进行方差分析(LSD检验),差异显示有统计学意义(P0.001);性别差异不显著;供体年龄与外周血sjTREC水平呈显著负相关,r=-0.823(P0.001)。结论人外周血中sjTREC含量与年龄存在明显相关性,对于法医物证实践中血痕的年龄推测具有一定指导意义。     

应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术检测载脂蛋白E基因多态性

【目的】应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术检测人类载脂蛋白E(apoE)基因的多态性。【方法】用PCR扩增出含apoE两个单核苷酸多态性(SNPs)位点(334T／C和472C／T)的DNA片段作为模板，经延伸反应，产物纯化后利用MALDI-TOF MS进行检测。从而确定样本apoE基因型。【结果】应用本技术对50例广东地区无关个体进行apoE基因多态性检测，共检出3种常见的apoE基因型，其中以apoE∑3／3型最多，占总数的74．00％；等位基因频率分布以ε3(87．00％)最高。【结论】本实验建立的基于MALDI-TOF MS与引物延伸技术检测apoE基因多态性的方法，具有快速、准确和可靠的特点。     

中国广东汉族与新疆维吾尔族24个Y-STR基因座的多态性分析

目的应用GFS 24Y试剂盒,对中国广东汉族和新疆维吾尔族共584个无关男性样本进行24个Y-STR基因座分型,统计其基因座、单倍型的遗传多态性,并分析其群体差异。方法采用磁珠法提取样本DNA后用GFS24Y试剂盒扩增,3130XL遗传分析仪进行基因分型,根据分型结果进行统计分析。结果获得了中国广东汉族与新疆维吾尔族共584个样本24个Y-STR基因座的分型结果及各等位基因频率分布资料。在广东汉族群体中,各基因座的基因多样性(GD值)为0.560 6~0.963 9,由24个基因座组成的单倍型共有299个,单倍型多样性(HD值)为0.999 93;在新疆维吾尔族中,GD值为0.443 9~0.957 9,共观察到282个单倍型,HD值为0.999 85。两个民族未观察到共有单倍型。通过两个群体间的比较,共有22个Y-STR基因座等位基因频率分布在两个民族之间存在差异(P0.05),各基因座在两个民族的遗传分化系数(Fst值)为0.000 767 9(DYS481)~0.247 946(DYS520)。结论 24个Y-STR基因座在中国广东汉族与新疆维吾尔族人群中均有较高的多态性,并显示出明显的民族特征,在法医亲权鉴定和个体识别、群体遗传学等领域均有重要的应用价值。     

半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族2相关新基因Rcet3的克隆

目的 利用NCBI中的DDD(数字差异显示)数据库及RT-PCR技术克隆睾丸等组织中特异表达的新基因.方法 利用NCBI中的DDD数据库首先电子克隆了Rcet3基因,并从成年小鼠睾丸组织中利用RT-PCR克隆出Rcet3全长基因,然后测序及序列分析.结果 序列分析显示,Rcet3基因全长cDNA为610bp,含4个外显子,编码一个140个氨基酸残基的蛋白,该蛋白含一个半胱氨酸蛋白酶抑制剂结构域,但缺少半胱氨酸蛋白酶抑制剂关键的作用位点,而这些位点对半胱氨酸蛋白水解酶的抑制作用足重要的.Rcet3在成年老鼠睾丸、附睾和大脑等生殖域中特异表达,睾丸中的表达高于附睾和大脑,Rcet3与半胱氨酸蛋白酶抑制家族2的Cres亚家族具有相似的特征.结论 Rcet3可能是半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族2,Cres亚家族中的一个新成员.     

用 STR进行亲权鉴定时结果的判定及其理论根据

[目的] 探讨亲权鉴定中应该应用的 STR基因座的数量及出现矛盾基因座时下结论的标准.[方法] 根据基因频率和遗传规律,用计算机模拟 1万例亲权鉴定,统计父权指数.根据平均非父排除率和突变率,用二项分布公式计算真父和随机男人出现不同数目矛盾基因座的概率和似然比.[结果] 在 1万例模拟亲权鉴定中,当检测 9个和 13个 STR基因座时,分别有 2%和 0.06%的 PI小于 999.检测 17个 STR基因座,真父和随机男人出现 1个矛盾基因座的似然比为 2.3× 103.检测 24个 STR基因座,真父和随机男人出现 2个, 3个和 4个矛盾基因座的似然比分别为 1 087, 1.408和 0.002.[结论] 亲权鉴定中应该检测 13个以上的 STR基因座.出现 1个和 2个矛盾基因座时,应该分别增加检测到 17和 24个基因座 , 才能下肯定的结论.检测到 3个矛盾基因座时,应该用其它方法作进一步的分析.出现 4个矛盾基因座时,可排除父权关系.     

基质辅助激光解析-电离-飞行时间质谱法检测单核苷酸多态性的研究进展

单核苷酸多态性(SNP)是人类基因组中单个碱基的变异和备受关注的第三代多态性遗传标记，其最低基因频率不低于1％，在复杂疾病、遗传病研究及法医个体识别和亲权鉴定方面都有重要作用。在器官移植和骨髓移植方面，高产量的SNP分析使较大规模、设有较好对照的完整研究得以进行；而通过详细分析移植物预后显著变异性的复杂基因决定因素，则将更有可能获得个体化治疗和改革治疗概念的机     

实时荧光定量PCR检测正常人外周血sjTREC含量的研究

目的 采用实时荧光定量PCR方法 ,分析正常人各年龄段外周血中sjTREC的含量,为客观评价胸腺输出功能提供方法 学基础.方法 构建sjTREC质粒标准物,建立标准曲线,在ABI7500 PCR仪上实时扩增检测229例(男147例,女82例)各年龄组正常人外周血样本中sjTREC片段,计算每毫升血液中所含的sjTREC拷贝数(sjTREC eopies/ml),结果 取对数值.sjTREC含量与年龄的关系做相关分析;男、女性sjTREC含量差异做t检验.结果 229例外周血sjTREC含量随年龄增长逐渐减少;对0～14岁、15～54岁及≥55岁三组进行方差分析(LSD检验),显示差异有统计学意义(P<0.0001);15～54岁组内男、女性sjTREC水平差异有统计学意义.结论 建立了实时荧光定量PCR检测外周血sjTREC含量的方法 ,分析并提供了正常人各年龄组外周血中sjTREC含量,初步建立了正常人sjTREC水平的数据库,为客观评价胸腺输出功能提供了依据.     

PBL结合案例式教学在法医人类学课程中的应用

法医人类学是一门应用性很强的学科,它以医学为基础,应用体质人类学的理论及方法,解决司法审判工作中与骨骼（包括牙齿）有关的个体识别问题,为案件的侦破提供线索,为审判提供证据的应用学科。以案例教学法和问题为基础（PBL）的教学法是教育改革中经常采用的两种教学方法。本文将PBL和案例式教学相结合的教学模式在法医人类学教学实践中进行教学尝试。结果表明：PBL结合案例式教学能有效激发学生的学习兴趣和提高学生的自主学习能力,并提升学生处理实际案例和团队合作能力,值得在法医学其他学科的课程教学中实践推广。