血小板源性生长因子对体外培养子宫肌瘤细胞增殖的影响

目的: 研究血小板源性生长因子 (Platete-DerivedGrowthFactor, PDGF) 对体外培养的子宫肌瘤细胞和子宫平滑肌细胞增殖性核抗原 (PCNA) 和细胞内前胶原α1多肽的表达的影响。方法: 用基因重组人PDGF-AB (10ng/ml) 作用体外培养的子宫肌瘤细胞, 以邻近正常子宫肌层细胞作对照, 用RT-PCR法从mRNA水平检测在有无PDGF-AB作用下, PCNA、前胶原α1多肽 (Ⅰ、Ⅲ) 表达的差异; 用免疫组化SABC法从蛋白水平显示PDGF对PCNA表达的影响。结果: 两种细胞受PDGF-AB刺激后, PCNA、collagenα1 (Ⅰ) 表达均有增加, 但两者在肌瘤细胞中表达的增加显著高于子宫平滑肌细胞 (P<0. 01); 而collagenα1 (Ⅲ) 在子宫肌瘤细胞和子宫平滑肌细胞中的变化无显著性差异。结论: PDGF在体外可同时促进子宫肌瘤细胞增殖和细胞外基质分泌的增加, 从而使肌瘤组织不断增长。     

子宫内膜癌中增殖细胞核抗原表达和S-100阳性朗格汉斯细胞浸润及其临床意义的评估

目的 探讨子宫内膜癌增殖细胞核抗原(PCNA)的表达和肿瘤微环境中S-100蛋白阳性的朗格汉斯细胞(LC)的浸润情况及其临床意义.方法 采用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶(S-P)法对10例正常增殖期子宫内膜组织和72例子宫内膜癌组织PCNA的表达及S-100蛋白阳性LC浸润情况进行了检测,分析其与子宫内膜癌临床病理特征的关系.结果 PCNA在子宫内膜癌组织中的表达阳性率和阳性指数评分均高于正常子宫内膜,差异有极显著性意义(P<0.01); S-100蛋白阳性的LC在正常子宫内膜组织中未见浸润,在子宫内膜癌组织中浸润阳性率为81.9%,差异有极显著性意义(P<0.01); PCNA阳性指数评分在高分化、低手术分期和肌层浸润深度≤1/2的子宫内膜癌组织中低于中低分化、高手术分期和子宫肌层浸润深度>1/2的子宫内膜癌组织,差异有极显著性意义(P<0.01);S-100蛋白阳性的LC在高分化、低手术分期和肌层浸润深度≤1/2的子宫内膜癌组织中浸润多于中低分化、高手术分期和子宫肌层浸润深度>1/2的子宫内膜癌组织,差异有极显著性意义(P<0.01);PCNA阳性指数评分与S-100蛋白阳性LC的浸润呈负相关(r=-0.471,P<0.01).结论 癌组织微环境中LC浸润反映机体抗肿瘤的免疫反应,PCNA的阳性表达和缺乏LC浸润可能与子宫内膜癌不良预后有关.     

基于云技术和人工智能的自动化细胞学诊断平台在703103名女性宫颈癌筛查中的应用研究

目的 探讨一种基于云技术和人工智能（artificial intelligence, AI）的自动化细胞学诊断平台应用于人群宫颈癌筛查的有效性和准确率。方法 通过构建一种基于云技术和AI的自动化细胞学诊断平台;并于2018年1—12月,将该平台应用于来自湖北省83个县（市）、年龄20～72岁的703 103名女性的宫颈癌筛查;对云技术+AI自动化诊断平台筛查出的“上皮细胞异常”的阳性样本及随机抽样10%阴性样本,由有经验的细胞病理学医生复核。此外,经AI自动化平台筛查出的高度鳞状上皮内病变、低度鳞状上皮内病变合并高危型人乳头状病毒感染者均建议行阴道镜检查+宫颈活检确诊;分析该自动化细胞学诊断平台用于宫颈癌筛查的准确性和有效性。结果 AI自动化细胞学诊断平台在人群宫颈癌筛查中的成功率为96.76%(680 344/703 103)。AI自动化诊断平台与人工阅片相比,在未见上皮内瘤变及恶性细胞、非典型鳞状细胞-意义不明、高度提示存在高级别的宫颈病变、低度鳞状上皮内病变、高度鳞状上皮内病变的诊断一致率分别为99.10%(63 943/64 521)、87.49%(21 326/24 376)...     

The role of SDF-1/CXCR4 axis in ovarian cancer metastasis

This study was aimed to explore the role of stromal-derived factor 1 （SDF-1）/CXC chemokine receptor 4 （CXCR4） axis in mediating the metastasis of ovarian cancer cells through activation of extracellular signal-regulated kinase-1/2 （ERK-1/2） signaling pathway. A highly metastatic ovarian cancer cell line, SKOV3, was used in the study. Intracellular calcium mobilization was detected by using laser scanning confocal fluorescence microscopy. Western blotting was used to detect the phosphorylation of ERK1/2 in SDF-1α-treated SKOV3 cells. Adhesion capability and matrix metalloproteinase （MMP） activity of ovarian cancer cells after exposure to SDF-1 a were measured by adhesion assay and gelatin zymography. The results showed that SDF-1α induced rapid intracellular calcium mobilization in SKOV3 cells, as well as the phosphorylation of ERK-1/2. The adhesion of ovarian cancer cells to fibronectin and collagen Ⅳ was increased after SDF-1α treatment. An inhibitor of ERK-1/2 signaling, PD98059, could antagonize such effects of SDF-1α. SDF-1α could also increase the secretion of active MMP-2 and MMP-9. It was concluded that the SDF-1/CXCR4 axis played a critical role in the metastasis of human ovarian cancer by increasing the adhesion capability of cancer cells and the activity of MMP-2 and MMP-9 via ERK1/2 signaling pathway.     

卵巢癌耐药细胞株的P38MAPK活性与凋亡关系的研究

目的 研究卵巢癌细胞耐药过程中P38MAPK活性与凋亡的关系,探讨P38MAPK信号转导途径在卵巢癌细胞耐药中的作用.方法 流式细胞技术分析P38MAPK特异性抑制剂SB203580对A2780/Taxol细胞凋亡的影响;利用免疫细胞化学法观察SB203580处理后细胞内P38MAPK表达水平.四甲基偶氮唑蓝检测细胞对紫杉醇的半数抑制浓度(IC50),Western blot检测细胞内P-gp蛋白表达.结果 与未干预组和对照组比较,SB203580(10μmol/L)干预24h后A2780/Taxol细胞凋亡率为23.7%(P＜0.01);A2780/Taxol细胞的P38MAPK表达颗粒密度减低,数量减少;紫杉醇对A2780/Taxol细胞的IC50显著降低(P＜0.01);P-gp蛋白表达水平明显降低.结论 P38 MAPK信号转导途径与卵巢癌耐药密切相关,可能参与卵巢癌耐药的形成.其可能机制为P38MAPK通路起到保护A2780/Taxol细胞逃避凋亡的作用.因此,阻断该通路可增强卵巢癌耐药细胞发生凋亡.     

潜伏活性的人可溶性TNFⅠ型受体融合蛋白真核表达载体的构建及表达

目的：采用基因工程技术，将转化生长因子B前体相关蛋白（LAP）通过基质金属蛋白酶（MMP）水解部位与人可溶性TNFI型受体（hsTNFRI）连接，构建pcDNA3，1／LAP-MMP-hs TNFRI融合蛋白真核表达载体，获得LAP-MMP-hsTNFRI融合蛋白。方法：将编码MMP水解部位氨基酸的正反义DNA序列退火形成互补双链后定向克隆插入真核表达载体pcDNA3．1（＋），得到pcDNA3．1／MMP重组体；将TGF-β1的LAP段和hsTNFRI与MMP水解部位连接，获得pcDNA3．1／LAP-MMP-hsTNFRI真核表达载体。测序鉴定后，脂质体介导重组质粒转染COS-7细胞，通过RT-PCR检测融合基因的表达。结果：酶切及测序结果证实pcDNA3．1／LAP-MMP-hsTNFRI重组载体构建成功，转染后RT-PCR结果表明重组质粒在COS-7细胞中得到有效表达。结论：成功构建了融合蛋白真核表达载体pcDNA3，1／LAP-MMP-hsTNFRI，并获得融合基因的瞬时表达，为进一步研究融合蛋白在子宫内膜异位症中的靶向治疗奠定了实验基础。     

潜伏活性的人可溶性TNFⅠ型受体融合蛋白真核表达载体的构建及表达

目的:采用基因工程技术,将转化生长因子β前体相关蛋白(LAP)通过基质金属蛋白酶(MMP)水解部位与人可溶性TNFⅠ型受体(hsTNFRⅠ)连接,构建pcDNA3.1/LAP-MMP-hsTNFRⅠ融合蛋白真核表达载体,获得LAP-MMP-hsTNFRⅠ融合蛋白。方法:将编码MMP水解部位氨基酸的正反义DNA序列退火形成互补双链后定向克隆插入真核表达载体pcDNA3.1( ),得到pcDNA3.1/MMP重组体;将TGF-β1的LAP段和hsTNFRⅠ与MMP水解部位连接,获得pcDNA3.1/LAP-MMP-hsTNFRⅠ真核表达载体。测序鉴定后,脂质体介导重组质粒转染COS-7细胞,通过RT-PCR检测融合基因的表达。结果:酶切及测序结果证实pcDNA3.1/LAP-MMP-hsTNFRⅠ重组载体构建成功,转染后RT-PCR结果表明重组质粒在COS-7细胞中得到有效表达。结论:成功构建了融合蛋白真核表达载体pcDNA3.1/LAP-MMP-hsTNFRⅠ,并获得融合基因的瞬时表达,为进一步研究融合蛋白在子宫内膜异位症中的靶向治疗奠定了实验基础。     

卵巢癌的筛查和早期诊断

卵巢癌是目前妇科肿瘤中病死率最高的恶性肿瘤,若能做到早期诊断,则将大大提高其5年生存率。而在世界范围内仍然缺乏有效的筛查手段,妇科检查、经阴道超声检查和血清学CA125的联合检查可以起到一定的判别作用。蛋白质组学技术以及新的肿瘤标志物,可能为未来卵巢癌的筛查提供更为敏感的方法。     

CXCR4及其配体SDF-1α在卵巢癌SKOV3细胞黏附和侵袭中的作用

目的:探讨趋化因子受体4(chemokine receptor 4,CXCR4)与其配体基质细胞衍生因子-1α(stromal derived factor-1α,SDF-1α)通过激活丝裂原活化蛋白激酶 (mitogen-activated protein kinase,MAPK) 信号通路在卵巢癌黏附和侵袭中的作用及其机制.方法:采用激光共聚焦显微镜观察SDF-1α处理前、后卵巢癌SKOV3细胞中钙离子的波动;Western 印迹法检测SDF-1α对SKOV3 细胞中细胞外调节信号激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)-1和-2磷酸化的影响;通过黏附实验、明胶酶谱法检测SDF-1α/CXCR4对卵巢癌细胞黏附能力以及基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2和MMP-9活性的调控.结果:SDF-1α诱导卵巢癌细胞内钙的迅速动员及ERK1和ERK2的快速磷酸化;增加卵巢癌细胞黏附于纤维连接蛋白(fibronectin, FN)和Ⅳ型胶原的能力;加入ERK1/2信号通路的抑制剂PD98059后,可降低SDF-1α促进卵巢癌细胞黏附于细胞外基质(extracellular matrix , ECM)的能力;同时SDF-1α可促进卵巢癌细胞分泌活性MMP-2和MMP-9. 结论:SDF-1α/CXCR4通过激活MAPK信号通路调控卵巢癌细胞的黏附能力,促进活性MMP-2和MMP-9的分泌,进而参与卵巢癌的侵袭和转移.     

Aurora B基因沉默对卵巢癌细胞A2780紫杉醇化疗敏感性的影响

目的 研究RNA干扰(RNA interference,RNAi)抑制Aurora B基因表达对卵巢癌细胞A2780细胞紫杉醇化疗敏感性的影响.方法 采用RNAi方法,将不同浓度AURKB siRNA转入A2780细胞(实验组),同时设阴性对照组和空白对照组,并以不同浓度紫杉醇作用各组细胞.采用MTT检测细胞存活率;AnnexinⅤ-FITC/PI检测细胞凋亡率;Western blot检测细胞内Caspase-3蛋白水平;Hoechst染色观察细胞凋亡.结果 A2780细胞转染不同浓度siRNA后,随着siRNA浓度增加,细胞存活率逐渐下降,至50 pmol/L时,实验组与空白对照组和阴性对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05);不同浓度紫杉醇处理各组细胞,随着紫杉醇浓度增加,细胞存活率明显下降,当紫杉醇浓度至10 μmol/L时,实验组与空白对照和阴性对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);50 pmol/L siRNA 转染A2780细胞48 h,再以10 μmol/L 浓度紫杉醇处理细胞,实验组细胞凋亡率明显增加,与空白对照组和阴性对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.01);50 pmol/L浓度siRNA转染A2780 细胞48 h,再以10 μmol/L 浓度紫杉醇处理细胞,实验组细胞内Caspase-3蛋白表达明显上调,细胞凋亡明显增加.结论 Aurora B的抑制可增强A2780细胞对紫杉醇的化疗敏感性,并使细胞凋亡增加.