型别特异性丙型肝炎病毒嵌合抗原在血清分型中的应用

目的克隆表达型别特异性丙型肝炎病毒HCV 1b、2a嵌合抗原,并用于HCV血清分型检测。方法分别对HCV 1b、2a的C区和NS4区进行表位预测,选取优势表位序列连接后,于PGEX-4T-2载体中克隆表达嵌合的HCV 1b、2a抗原,应用竞争抑制酶联法对44份HCV 1b和18份2a血清进行血清分型检测。结果 62例血清样品中50例能分型,其中1b型34例,2a型16例,其分型率为80.6%(50/62),与基因型的符合率为90.0%(45/50)。结论丙型肝炎病毒HCV 1b、2a嵌合抗原用于HCV的血清分型检测,具有较高的准确率和分型率,可用于HCV血清分型检测。     

基于化学发光肠道病毒71型IgM抗体检测试剂的研制及初步应用

目的在肠道病毒71型(EV71)重组外壳蛋白VP1的基础上建立以化学发光为基础的IgM抗体检测技术,并与普通TMB显色酶联免疫吸附法比较,评价其临床应用前景。方法采用抗IgM单克隆抗体及辣根酶标记的重组VP1抗原,在此基础上建立EV71-IgM捕获法化学发光检测技术,并对比化学发光检测技术与普通酶联检测技术在45份EV71抗体阳性和30份阴性血清中的反应情况。结果化学发光法、普通酶联免疫吸附法、市售EV71-IgM检测试剂分别能与38份、19份、26份EV71抗体阳性血清发生阳性反应,灵敏度分别为84.4%、42.2%和57.8%;化学发光法灵敏度显著高于其他两种,差异有统计学意义(P<0.05);3种检测方法与阴性血清均无阳性反应。结论在EV71-VP1重组抗原的基础上建立的EV71-IgM捕获法化学发光检测技术具有很高的灵敏度,并有很好的临床应用前景。     

艰难梭菌谷氨酸脱氢酶的表达及抗原性分析

目的：构建艰难梭菌（CD）谷氨酸脱氢酶（GDH）的原核表达载体,表达重组蛋白并鉴定其抗原活性。方法以 CD 的 ATCC43255菌株基因组 DNA 为模板,通过 PCR 法扩增 GDH 全长基因片段,构建原核表达载体并转化到大肠杆菌中,IPTG 诱导表达 GDH 蛋白,并用 Ni 柱进行纯化。利用 CD 抗原检测试剂盒对 GDH 抗原区段的抗原性进行鉴定。结果构建的原核表达载体 pET-28a／GDH 可在大肠杆菌中成功表达,获得的 GDH 抗原能与相应抗体产生特异性反应。结论原核表达的 CD 的 GDH 抗原具有很好的抗原活性,为进一步制备相应抗体并建立CD 的 GDH 抗原的免疫检测方法奠定了基础。     

人乳腺珠蛋白单克隆抗体制备及生物特性鉴定

目的构建重组hMAM蛋白,通过杂交瘤技术获得特异性的抗hMAM的单克隆抗体,并鉴定其生物特性。方法克隆表达hMAM 8-93AA、20-52AA、43-70AA、56-82AA、67-93AA区段的抗原,以纯化的pBV220/hMAM(8-93AA)为免疫原,杂交瘤技术筛选出能稳定分泌抗hMAM单克隆抗体的细胞株。采用Western blotting和免疫组织化学染色方法鉴定其表位和特异性。结果获得6个高纯度的重组抗原,通过pBV220/hMAM(8-93AA)免疫小鼠后,获得2株稳定分泌抗hMAM抗体的杂交瘤细胞株。Western blotting结果显示MAb1、MAb2分别是识别hMAM20-52AA、hMAM52-67AA片段的特异性单克隆抗体。免疫组织化学染色结果显示该抗体仅在乳腺组织中呈阳性反应,在其他肿瘤组织中不反应。结论通过杂交瘤技术成功制备了两株稳定分泌且高特异性的抗hMAM不同位点的单克隆抗体细胞株,为进一步研制高灵敏的乳腺癌早期检测试剂奠定了基础。     

人羧基肽酶H不同区段抗原的克隆表达及其初步应用

目的 构建人羧基肽酶H不同区段抗原的原核表达载体,诱导表达获得重组蛋白,初步验证人羧基肽酶H不同抗原区段在羧基肽酶H自身抗体检测中的应用价值。方法 应用RT-PCR方法调取目的基因,构建相应的原核表达质粒,转化大肠埃希氏菌诱导表达重组蛋白,用重组蛋白作为包被抗原建立人羧基肽酶H自身抗体的间接ELISA方法,评价羧基肽酶H抗原在检测新诊断2型糖尿病患者抗羧基肽酶H自身抗体中的应用价值。结果 获得了羧基肽酶H三种不同区段抗原,其中42～476氨基酸区段为较理想的抗原。以该全长抗原作为包被抗原检测95例新诊断2型糖尿病患者,羧基肽酶H自身抗体阳性率为8.42%。结论 原核克隆表达的人羧基肽酶H 42～476氨基酸区段抗原具有良好的抗原性,可作为成人隐匿性自身免疫性糖尿病鉴别诊断的候选抗原。     

4种自身抗体联合检测对1型糖尿病诊断的意义

目的探讨联合检测谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)、蛋白质酪氨酸磷酸酶抗体(IA-2A)、锌转运体8抗体(Zn T8A)和胰岛特异的葡萄糖-6-磷酸酶催化亚基相关蛋白抗体(IGRPA)对1型糖尿病患者诊断的意义。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)对45例1型糖尿病患者、50例2型糖尿病患者及50例正常对照者血清进行GADA、IA-2A、Zn T8A及IGRPA自身抗体的检测。结果 IA-2A、GADA、Zn T8A和IGRPA在1型糖尿病患者中检出率分别为28.89%、53.33%、71.11%和77.78%。4种自身抗体的阳性率在1型糖尿病患者中高于2型糖尿病组及正常对照组,差异有统计学意义(P0.05)。自身抗体联合检测敏感度均高于单项组,GADA/IA-2A/Zn T8A/IGRPA 4项联合检测敏感度及曲线下面积(AUC)均为最高,分别为95.56%和0.988。结论 GADA、IA-2A、Zn T8A和IGRPA抗体的联合检测可以显著提高1型糖尿病的检出率,对1型糖尿病的诊断具有重要意义。     

丙型肝炎病毒核心蛋白对转录因子ETF和TxRE活性的调控作用

目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白对转录因子ETF和TxRE活性的调控作用。方法对于瞬时转染p IRES-Core/Neo载体的L02细胞采用双荧光素酶报告基因系统检测核心蛋白对转录因子ETF和TxRE活性影响,并提取2株细胞的核蛋白和RNA,分别以Western blot试验和实时荧光定量PCR检测2种转录因子的表达量。结果双荧光素酶报告基因检测在L02-Core和L02-Neo细胞中转录因子ETF和TxRE的活性比值分别为2.981和3.063。Western blot试验灰度值分析2株细胞的核蛋白提取物中这2种蛋白表达量的比值分别为1.510和2.717。实时荧光定量PCR检测这2株细胞中ETF和TxRE的核酸水平比值分别为4.123和3.703。结论在表达HCV核心蛋白的L02细胞中,转录因子ETF和TxRE转录表达水平及转录活性均较高,HCV核心蛋白可能具有增强转录因子ETF和TxRE转录活性的作用。     

结核分枝杆菌融合抗原38F和64F诊断活动性肺结核的价值

目的 探讨结核分枝杆菌融合抗原38F和64F对活动性肺结核患者血清中IgG、IgM和IgA抗体检测的诊断价值。 方法 利用结核分枝杆菌抗原优势肽段融合抗原38F和64F,通过ELISA法对223例活动性肺结核患者进行结核分枝杆菌特异性IgG、IgM和IgA抗体水平检测。223例活动性肺结核患者分为三组,第一组为涂片和培养共同阳性组（86例）,第二组为涂片阴性且培养阳性组（51例）,第三组为涂片和培养共同阴性组（86例）。 结果223例活动性肺结核病患者,第一组IgG、IgM和IgA的联合检出率为79.07%（68/86）;第二组IgG、IgM和IgA的联合检出率为62.75%（32/51）;第三组IgG、IgM和IgA的联合检出率为69.77%（60/86）。全部样本血清学方法的检出率为71.75%（160/223）。结论 结核分枝杆菌融合抗原38F和64F对于活动性肺结核具有较高的辅助诊断价值,并且IgG、IgM和IgA抗体联合检测可以提高检出率。     

抗原修复在陈旧石蜡切片乳腺珠蛋白免疫组化检测中的应用

目的：探索一种简便有效的抗原修复方法,用于陈旧切片的人乳腺珠蛋白（human mammaglobin,hMAM）免疫组化检测。方法将乳腺癌患者陈旧乳腺组织石蜡切片脱蜡至水,按常规免疫组化步骤进行检测。其中,实验组直接将切片浸入pH 3．5的柠檬酸盐缓冲液中室温修复10～15 min;同时以微波和高压加热修复法处理相应患者石蜡切片作为对照,最后以SP检测系统检测抗原修复及与抗体反应的效果。结果实验组与高压组和微波组比较,修复效果较好,且无组织脱片与折损现象。结论建立了一种利用陈旧组织切片检测乳腺珠蛋白的简便、有效的抗原修复方法,并能很好地防止脱片现象发生。