HBx下调miR-544-3p并激活 Arf6/Akt-mTOR信号轴促进肝脏细胞迁移和侵袭

目的 探讨miR-544-3p对HBx诱导的肝细胞癌的影响及分子机制。方法 通过向KM小鼠肝门静脉注射HBx-EGFP-14-19细胞,构建成可长期稳定表达HBx的动物模型,于30d、90d、180d和360d处死小鼠;qRT-PCR检测miR-544-3p在各组别细胞及各时间点动物模型中的表达;在HBx-EGFP-14-19细胞中瞬时转染miR-544-3p mimics、inhibitors,应用划痕实验和Transwell细胞迁移侵袭实验检测miR-544-3p对HBx-EGFP-14-19细胞转染后的迁移和侵袭的影响;采用qRT-PCR,Western Blot探究miR-544-3p对Arf6/Akt-mTOR信号轴的调控机制。结果 成功构建可长期稳定表达HBx的动物模型;HBx-EGFP-14-19组和HBx各组与对照组相比,miR-544-3p表达水平显著降低;与对照组比较,转染miR-544-3p mimics的细胞迁移和侵袭能力降低(P<0.05) ,转染miR-544-3p inhibitors的细胞迁移和侵袭能力增强(P<0.05);qRT-PCR,Western Blot检测结果显示miR-544-3p低表达与Arf6表达水平上调,并与Akt-mTOR信号轴的激活成正相关。结论 HBx可能通过下调miR-544-3p并激活Arf6/Akt-mTOR信号轴促进小鼠肝癌细胞的侵袭和迁移能力。     

hESCs与A549细胞共培养后上清液在体外抗肺癌细胞的作用研究

目的：研究人胚胎干细胞H9与肺癌细胞A549共培养上清液对A549细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法：建立人胚胎干细胞H9与肺癌A549细胞直接接触式共培养体系,收集共培养上清液,将共培养上清液作用于肺癌A549细胞。以单独培养的A549细胞上清液为空白对照组,单独培养的人胚胎干细胞H9上清为对照组。显微镜下观察共培养上清液对肿瘤细胞生物行为学的影响;用CCK-8检测共培养上清液对肿瘤细胞增殖能力的影响;Hoechst染色法检测共培养上清液对肿瘤细胞的凋亡影响;细胞划痕实验检测共培养上清液对肿瘤细胞迁移及侵袭的影响。结果：显微镜下观察到实验组肿瘤细胞数量逐渐减少甚至凋亡;CCK-8检测到实验组肿瘤细胞的增殖受到显著抑制（P<0.05）;Hoechst染色发现实验组细胞核出现典型凋亡形态;细胞划痕实验结果显示实验组肿瘤细胞的划痕愈合率明显低于空白对照组和对照组（P<0.05）。结论：人胚胎干细胞H9与肺癌A549细胞共培养上清液,在体外可以抑制肺癌A549细胞增殖、迁移,促进肿瘤细胞凋亡,具有一定的抗癌效应。