TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测新型趋化因子巨噬细胞炎症蛋白-2γmRNA表达水平

目的　建立TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)法检测新型趋化因子巨噬细胞炎症蛋白 2γ(MIP 2γ)mRNA表达水平 ,并对方法进行评估。方法　TaqMan实时荧光定量RT PCR检测MIP 2γmRNA的表达。结果　线性检测范围达 6个数量级 ,最低检测下限为 6× 10 2 拷贝 ,最高检测上限为 6× 10 7拷贝 ,批间及批内变异 <12 2 %。正常Balb/c小鼠心脏、肝脏、肾脏组织均可检测到MIP 2γmRNA表达 ,以心脏表达水平最高。结论　采用TaqMan实时荧光定量RT PCR检测MIP 2γmRNA表达水平准确、特异、灵敏、快速、操作简便 ,具有临床推广价值。     

系统性红斑狼疮患者外周血淋巴细胞CD80和CD86的表达

系统性红斑狼疮(SLE)是自身免疫介导的、以免疫性炎症为突出表现的弥漫性结缔组织病。血清中出现以抗核抗体为代表的多种自身抗体和多系统受累是其主要临床特征。CD80(B7．1)和CD86(B7-2)是T细胞活化必需的协同刺激分子。我们研究了SLE患者外周血淋巴细胞(PBLC)CD80和CD86的表达，以期探讨CD80和CD86在SLE发病中的作用。     

乙酰肝素酶反义寡核苷酸对人乳腺癌细胞株侵袭力的抑制作用

目的　探讨乙酰肝素酶 (HPSE)反义寡脱氧核苷酸 (AS ODN )对人乳腺癌细胞株侵袭力的抑制活性。方法　设计合成分别互补于HPSEmRNA 5 '未翻译区和起始密码区的AS ODN1、AS ODN2及相应对照NS ODN1、NS ODN 2 ,在脂质体介导下以 2 5 0nmol/L终浓度转染人乳腺癌MDA43 5细胞 ,以RT PCR和Westernblot分别检测HPSEmRNA和蛋白表达 ,以基质凝胶侵袭实验检测细胞侵袭力。结果　AS ODN 2组的HPSEmRNA相对表达量、蛋白表达量和侵袭细胞数(0 .62± 0 .0 4、12 .70± 1.70、61.0 0± 9.0 0 )与脂质体对照组 (1.60± 0 .0 4、3 6.2 0± 2 .10、178.0 0±17.0 0 )和NS ODN2组 (1.48± 0 .0 3、3 5 .5 0± 2 .3 0、174.0 0± 2 0 .0 0 )相比较均显著降低 (P <0 .0 1) ;而AS ODN 1组与脂质体对照组和NS ODN1组相比较差异均无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　互补于起始密码区的HPSEAS ODN可通过下调HPSE表达显著抑制人乳腺癌细胞株MDA43 5的侵袭力。     

MIP及其受体在自身免疫性疾病发病机制中的作用

通过对MIP及其受体的分子结构、产生来源、生物学功能等分析，初步阐述MIP及其受体在自身免疫性疾病发病机制中的作用。     

系统性红斑狼疮病人外周血CD8+CD28-细胞群的检测及意义

目的观察系统性红斑狼疮(SLE)病人外周血CD8^ CD28^-细胞群比例与疾病活动程度和临床表现的关系。方法二色流式细胞术检测SLE病人(活动期25例,稳定期26例)及正常人(30名)外周血CD8^ CD28^-细胞群的比例,结合病人血清免疫球蛋白含量等进行分析。结果SLE活动期病人外周血CD8^ CD28^-细胞群的比例较正常人略有升高,而稳定期病人较正常人显著升高;同一活动期SLE病人经过治疗病情缓解后,外周血CD8^ CD28^-细胞较活动期升高,但差异无显著性;复发患者外周血CD8^ CD28^-细胞群的比例明显高于初发患者和正常人;血清免疫球蛋白(IgG、IgA和IgM)含量正常的患者外周血CD8^ CD28^-细胞群的比例明显高于正常人。结论SLE病人外周血CD8^ CD28^-T细胞群的比例的异常与疾病的病程和临床表现相关联．可能参与了疾病的致病机制。     

SLE患者外周血T细胞亚群ICOS与CD28共表达水平与疾病的关系

目的观察系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)病人外周血CD4^ 及CD8^ T细胞表面可诱导共刺激分子(inducible co-stimulator，ICOS)及CD28共表达水平，探讨ICOS和CD28共表达水平与SLE疾病的关系。方法采用三色流式细胞术检测SLE病人(n=51)及正常人(n=30)外周血CD4^ 及CD8^ T细胞表面ICOS与CD28共表达水平，并结合SLE病人疾病活动程度、临床表现等进行分析。结果与正常人相比，SLE活动期和稳定期病人外周血CD4^ T细胞中仅表达ICOS不表达CD28(即CD28^-ICOS^ )的细胞比例明显升高，但活动期病人和稳定期病人之间并无差异；活动期病人外周血CD8^ T细胞上同时表达CD28和ICOS的细胞(即CD28^ ICOS^ 细胞)和CD28^-ICOS^ 细胞比例都明显升高；同一SLE病人在疾病活动期CD4^ 和CD8^ T细胞中CD28^ ICOS^ 的细胞比例和CD8^ T细胞中CD28-ICOS^ 细胞比例明显高于该病人经过治疗病情稳定时；初发未治疗SLE病人仅CD4^ T细胞中CD28^ ICOS^ 细胞的比例比复发病人明显升高；血清抗dsDNA抗体( )病人和血清免疫球蛋白含量(IsG、IgA和IgM中任何一种)异常升高的病人外周血CD4^ T细胞中CD28^ ICOS^ 细胞和CD8^ T细胞中CD28-ICOS^ 细胞比例分别明显高于血清抗dsDNA抗体(-)和血清免疫球蛋白含量正常的病人。结论CD28和ICOS在SLE病人外周血CD4^ 和CD8^ T细胞上共表达水平与SLE疾病的活动程度、病程及临床表现等存在一定的关联。     

小鼠FasL全长cDNA的克隆与FasL腺病毒载体的构建

目的: 克隆小鼠FasL全长cDNA, 构建FasL腺病毒载体。方法: 从经ConA(5mg/L)刺激 48h的BALB/c小鼠脾脏单个核细胞中克隆FasL全长cDNA, 构建以CMV启动子转录调控的含小鼠FasL全长cDNA的穿梭质粒mFasL pAdTrack。经PacI酶切后, 与腺病毒骨架质粒pAdEasy 1在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组。挑选阳性重组子转染HEK- 293细胞, 构建CMV启动子转录调控的mFasL重组腺病毒载体。结果: 成功地克隆小鼠FasL全长cDNA, 经PCR、酶切及荧光检测等证实, 成功地构建了重组mFasL腺病毒载体。结论: 重组FasL腺病毒载体的构建为进一步研究FasL在肿瘤和自身免疫性疾病的作用奠定了基础。     

ICOS共刺激途径中MAPK家族信号分子对活动期SLE患者T细胞增殖及细胞因子分泌的作用

目的研究可诱导共刺激分子（ICOS）共刺激途径中丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）家族信号分子对活动期系统性红斑狼疮（SLE）患者T细胞增殖及细胞因子分泌的作用。方法体外分离纯化活动期SLE患者和正常人外周总T细胞、CD4^＋和CD8^＋T细胞，予以抗CD3／抗ICOS刺激，通过Western blot检测信号分子的活化水平，ELISA检测培养上清细胞因子表达，^3H—TdR法测定细胞的增殖水平。结果活动期SLE病人CD4^＋或CD8^＋T细胞经ICOS共刺激后，胞外信号调节激酶（ERK）的活化水平明显低于正常人，CD4^＋或总T细胞分泌IL-2明显低于正常人，PD98059抑制ERK活化可致细胞增殖水平下降与IL-2分泌减少，SB-203580抑制p38MAPK活化可致IL-10分泌减少，细胞因子IL-2能明显促进T细胞的增殖水平。结论活动期SLE患者ICOS共刺激T细胞增殖功能降低与其ERK信号活化障碍所致的IL-2分泌减少密切相关，MAPK家族信号分子在ICOS共刺激不同T细胞亚群增殖与细胞因子分泌中具有不同的作用。     

CD44在非小细胞肺癌组织中的表达及意义的Meta分析

目的研究肿瘤干细胞表面标志CD44在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及临床意义。方法计算机检索万方数据库,维普,中国知网,中国生物医学文献服务系统,PubMed等中英文数据库,时间限定为建库到2017年12月31日,由两名评价员独立按照纳入/排除标准筛选文献,提取资料并进行质量评价,采用RevMan 5.3软件进行Meta分析。结果共纳入7篇文献464例患者。Meta分析结果显示:CD44在非小细胞肺癌组织中与正常组织:OR=0.05,95%CI=[0.03,0.10],(P0.00001)差异具有统计学意义。在非小细胞肺癌有无淋巴结转移:OR=3.13,95%CI=[1.96,4.99],(P0.00001)差异具有统计学意义;在不同的临床分期:OR=0.50,95%CI=[0.31,0.80],(P=0.004)差异具有统计学意义;CD44在有无吸烟患者的NSCLC组织中及NSCLC不同分化情况中的表达其差异无统计学意义。结论 CD44在非小细胞肺癌的发生,发展中起重要作用,但是在非小细胞肺癌的诊断和预后方面的作用还需要继续进行试验探索。