氧化损伤产物8-OHdG、4-HNE、NTY在成年小鼠卵巢组织中的增龄变化

目的:探讨DNA、脂质和蛋白质氧化损伤产物在成年小鼠卵巢组织中的增龄变化.方法:选用12、24、48、75周龄自然衰老C57BL/6小鼠为模型.采用免疫组织化学方法和蛋白印迹技术检测各年龄组小鼠卵巢中8羟基脱氧鸟苷(8-hydroxy-2-deoxyguanosine,8-OHdG)、4羟基壬烯醛(4-hydroxynonenal,4-HNE)、硝基酪氨酸(nitrotyrosine,NTY)的表达变化情况.结果:8-OHdG、4-HNE、NTY在卵巢间质细胞随增龄表达增加(P＜0.05).12周龄组3种物质的表达均明显低于其他各组,差异有显著统计学意义(P＜ 0.01);24周龄含量低于48、75周龄组,差异有显著统计学意义(P＜ 0.05);48周龄组与75周龄组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).而各年龄组卵泡膜细胞、颗粒细胞及卵母细胞中未见明显变化.结论:氧化损伤在卵巢间质细胞中随增龄表现明显,间质细胞氧化损伤可能是导致卵巢衰老的原因之一.     

不同分离方法对人卵巢颗粒细胞体外培养的影响

目的 比较人卵巢颗粒细胞不同分离方法.方法 取体外受精-胚胎移植(ⅣF-ET)采卵时的卵泡液,用裂解法、密度梯度离心法、酶解法分离纯化并原代培养人卵巢颗粒细胞.比较不同的分离方法获得的卵巢颗粒细胞数量、形态及其对早期培养的影响.结果 裂解法得到的颗粒细胞数较密度梯度离心法、酶解法多(P＜0.005,P＜0.001);比较3种分离方法获得的卵巢颗粒细胞的活性和孕激素分泌量差异无统计学意义;接种24h后,酶解法得到的卵巢颗粒细胞存活量最多(P＜0.05),裂解法得到的存活细胞最少(P＜0.05);裂解法获得的卵巢颗粒细胞继续培养48、72及96h均较培养24h有明显细胞增殖(P＜0.05),且与其他组存活的细胞量差异无统计学意义.结论 裂解法得到的颗粒细胞数量多,细胞生长较好,操作简单,是较理想的分离人卵巢颗粒细胞的方法.     

Neuropilin-1 mRNA在新生小鼠及促性腺激素预处理不同时间点小鼠卵巢中的表达

目的:探讨Neuropilin-1(NRP-1)mRNA在新生小鼠及促性腺激素预处理不同时间点小鼠卵巢中的表达。方法:选用C57BL/6j小鼠新生及促性腺激素预处理不同时间点卵巢,通过实时定量聚合酶链反应检测NRP-1mRNA表达。结果:NRP-1mRNA在新生第3天小鼠卵巢中的表达是第5天的1.7倍(P<0.05),是第14天的1.5倍(P<0.05);相对于对照生理盐水注射组(对照组),在孕马血清处理后4、8、12、24h,NRP-1mRNA表达显著降低(P<0.05),至24h最低,而48h显著增高为对照组的1.5倍(P<0.05);给予人绒毛膜促性腺激素后与0h相比NRP-1mRNA表达于第4小时下降至最低(P<0.05),后于第12小时升至最高(P<0.05)。结论:NRP-1在始基卵泡募集和卵泡发育、成熟及排卵过程中发挥重要作用。     

小肠Crohn's病患者肠黏膜中DLG1和DLG5表达的临床观察

目的 探讨小肠型克罗恩病(CD)肠黏膜中DLG1和DLG5的表达以及与临床关联分析.方法 收集CD患者小肠手术切除标本45例,另收集15例小肠肿瘤以及右半结肠肿瘤手术标本中正常小肠组织作为对照组,采用免疫组织化学方法研究DLG1和DLG5在CD组患者和对照组小肠黏膜上皮组织中的表达,并进行临床观察分析.结果 与对照组比较,CD患者小肠黏膜上皮细胞DLG1主要表达在细胞质中,两组患者DLG1表达部位有明显差别(P<0.01),表达量无明显差别.与对照组比较,CD组患者小肠黏膜上皮细胞DLG5均表达在细胞质中,CD组患者DLG5的表达量明显降低(P<0.01).DLG1表达部位和DLG5表达量与CD患者临床特征无明显关联.结论 DLG5表达降低可能参与CD的发病过程.     

颗粒细胞凋亡在卵泡闭锁中的研究进展

青春与美丽是女性永恒的追求,然而因年龄渐长,卵巢衰老却不可避免.卵巢衰老导致心血管疾病、骨折、老年痴呆等发病率增加,严重影响女性的生存质量.卵泡数目的减少、周围微环境的改变及其对外界刺激的反应力降低是卵巢衰老的主要原因,而卵泡数目的减少与卵泡闭锁密切相关.女性一生中能够发育成熟并最终释放的卵泡仅400 ～ 500个.因此,有超过99.9%的卵泡发生闭锁并最终消失.颗粒细胞凋亡是启动卵泡闭锁的重要机制.卵泡闭锁受到多种因素调控,如下丘脑-垂体-性腺轴、卵巢微环境、各种调节因子等.本文就与颗粒细胞凋亡相关的因素在卵泡闭锁中的研究进展进行综述.     

AMH蛋白在性成熟小鼠卵泡发育不同阶段及自然衰老过程卵巢组织中的表达变化

目的:通过检测抗苗勒氏管激素(AMH)蛋白在成年小鼠卵泡发育不同阶段和自然衰老过程卵巢中的表达变化,为卵泡的生长发育调控及卵巢衰老发生发展的机制研究奠定理论基础。方法:选用12,24,36,48周龄自然衰老C57BL/6小鼠为模型。收集12周龄C57BL/6小鼠不同发育阶段的卵巢和24,36,48周龄自然衰老C57BL/6小鼠卵巢。采用免疫组织化学方法和蛋白印迹技术检测各组卵巢中AMH蛋白的表达。结果:免疫组织化学显示,AMH蛋白在始基卵泡、初级卵泡,次级卵泡、窦状卵泡的颗粒细胞中均有表达,但在黄体和闭锁卵泡的颗粒细胞中未见表达。始基卵泡颗粒细胞中AMH蛋白表达明显低于初级卵泡、次级卵泡和窦状卵泡(P<0.05);窦状卵泡颗粒细胞中AMH蛋白表达明显低于初级卵泡和次级卵泡(P<0.05);初级卵泡和次级卵泡的AMH蛋白表达未见明显差异(P>0.05)。不同鼠龄的小鼠同级别卵泡颗粒细胞AMH的染色程度未见明显差异;但是24周龄以后间质中开始出现AMH蛋白表达,并且AMH的表达随鼠龄增加而上升;48周龄小鼠卵巢间质中AMH蛋白表达明显高于24周龄和36周龄(P<0.05);24周龄与36周龄比较差异无统计学意义(P>0.05)。蛋白印迹技术结果显示,AMH蛋白在小鼠卵巢组织中的表达随鼠龄增加而降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:AMH蛋白主要表达于卵泡发育早期阶段的颗粒细胞,并且其在间质中随鼠龄增加表达增强,但是在整个卵巢组织中其表达量随鼠龄增加而降低。提示AMH可能在卵泡发育以及卵巢衰老中起重要的调控作用。     

2009-2012年盐城市盐都区托幼机构手足口病流行病学特征

目的了解盐城市盐都区托幼机构手足口病流行特征,为制定防控措施提供参考依据。方法收集2009--2012年盐都区托幼机构手足口病病例,比较各年度发病率、发病人群、地域特征及病原分析结果。结果2009--2012年盐都区托幼机构共报告手足口病804例,其中重症7例,无死亡病例,75起聚集性病例;疫情呈现逐年上升趋势,成为当前盐都区托幼机构存在的与传染性疾病相关的严重的公共卫生问题。盐都区托幼机构手足口病发病主要集中在中小班级,男女性别发病比为1．87：1（524／280）;各区域托幼机构发病数和发病率均逐年上升,东部城郊各年份发病率明显高于中部农村和西部水乡,其中2011—2012年更表现为东部城郊区域流行暴发。2009--2012年托幼机构累计报告实验室确诊病例56例,占报告总数的6．97％;其中肠道病毒EV71型（EV71）29例,柯萨奇病毒A组16型（CoxA16）24例,其他肠道病毒3例,总检出率分别为49．15％、40．68％和5．08％。2009年EV71为优势毒株,2010年转变为CoxA16毒株,2011—2012年EV71和CoxA16均为优势毒株。4年间仅2011年监测重症病例7例,其中6例为EV71,1例为CoxA16。结论盐都区托幼机构手足口病疫情不断蔓延,存在明显的年龄、性别、地区和季节特征和差异,多种病毒株共存。当前防治措施仍以依法加强病例监测报告、控制托幼机构病例聚集和暴发、儿童监护人的健康教育和发病后及早就医为主,严防重症病例的发生。     

转化生长因子βⅡ受体在小鼠卵泡早期发育中的表达

目的:通过检测转化生长因子βⅡ受体(TβRⅡ)在小鼠卵泡早期发育过程中的表达变化,为卵巢细胞间调控网络的研究提供理论基础.方法:取0、1、2、5、7天和11天雌性健康小鼠的卵巢组织.采用免疫组织化学法和实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测卵巢组织中TβRⅡ蛋白及mRNA表达水平.结果:TβRⅡ蛋白在各组小鼠卵巢的卵母细胞胞浆中均有表达,原始生殖细胞囊中表达最强,始基卵泡中表达下降,初级、次级卵泡中表达增强.初级卵泡的颗粒细胞开始表达TβRⅡ,并随着卵泡发育表达逐渐增强.卵巢组织中TβRⅡmRNA表达水平随卵巢的生长发育先降低后增高,0、1天和11天小鼠卵巢组织中的TβRⅡmRNA表达水平约是2、5天和7天小鼠卵巢组织的2倍,差异显著(P＜0.05).结论:TβRⅡ在卵泡发育初始阶段的表达具有时间和空间的特异性,提示TGF-β信号通路在早期卵泡发育过程中可能起着重要的调节作用.     

磷酸化p38MAPK在小鼠卵泡发育中的表达

目的:通过检测磷酸化p38 MAPK(p-p38MAPK)在小鼠卵泡发育过程中的表达,为研究丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路在卵泡生长、发育及成熟过程中的作用提供理论基础。方法:随机选取健康成年小鼠60只,按雌雄2∶1的比例合笼繁殖新生小鼠。取3、5、7、11及21天雌性健康小鼠(各30只)的卵巢组织,采用免疫组化SP法检测不同年龄段小鼠卵巢组织中p-p38MAPK蛋白的表达水平。结果:p-p38MAPK蛋白在各年龄段小鼠不同级别卵泡的卵母细胞胞浆中均有表达,在始基卵泡中表达最强,与各级卵泡相比,差异均有统计学意义(P<0.05);初级卵泡与次级卵泡比较,差异无统计学意义(P>0.05);初级卵泡、次级卵泡与窦状卵泡相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。该蛋白在各级卵泡颗粒细胞中也均表达,始基卵泡与各级卵泡相比,差异均有统计学意义(P<0.05);初级卵泡与次级卵泡相比差异有统计学意义(P<0.05),而与窦状卵泡相比差异无统计学意义(P>0.05);在次级卵泡中表达最强,与各级卵泡相比差异均有统计学意义(P<0.05)。不同年龄段小鼠卵巢中,21天小鼠卵母细胞p-p38MAPK蛋白表达强度分别与3天和7天小鼠进行比较,差异均有统计学意义(P<0.05);3、5、7及11天各组相比,差异均无统计学意义(P>0.05)。各年龄组颗粒细胞p-p38MAPK蛋白表达强度相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:p-p38MAPK蛋白在小鼠卵泡发育过程中具有时空特异性,p-p38MAPK通路可能在卵泡发育过程中起重要的调控作用。     

小鼠腔前卵泡不同分离方法的比较

目的 探讨小鼠腔前卵泡的最佳分离方法.方法 取性未成熟小鼠的卵巢,按照不同分离方法,单纯机械法与酶解法分离腔前卵泡,并用基础培养基进行培养,比较不同分离方法获得的卵泡数量、形态,及对其早期生长发育的影响.结果 2 mg/mL的胶原酶可获得大量基底膜完整的腔前卵泡及裸卵(P<0.01);体外培养2d后,酶解组卵泡生长直径大(P<0.05)、GVBD率、放出第一极体率和7d生存率无明显差异(P>0.05).结论 胶原酶酶解法较单纯机械法更易获得大量高质量腔前卵泡,且对其早期发育无明显影响.