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抗前列腺特异抗原单链抗体/人羧肽酶A融合基因的构建及表达 总被引:4,自引:3,他引:1
目的 构建抗前列腺特异抗原(PSA)单链抗体(scFv)/人羧肽酶A(hCPA)融合基因,为前列腺癌的抗全导向酶-前体药物疗法奠定基础。方法 在已克隆抗PSAscFv和hCPA基因的基础上,用加端PCR分别在scFv基因的3′端和hCPA基因的5′端加上部分连接肽(linker)基因序列,回收后混合。应用重叠延伸拼接法,将抗PASscFv基因和hCPA基因通过linker序列串联为scFv/hCPA融合基因;并将构建的融合基因克隆到融合表达载体pGEX-4T-1中进行表达。结果 序列测定结果表明,构建的抗PSAscFv/hCPA融合基因中scFv和hCPA序列均正确,scFv和hCPA间有18bp的linker序列,推导的氨基酸序列为GSGGSG,与设计的序列相符,融合基因经IPTG诱导表达重组蛋白并以SDS-PAGE分析,在Mr为94000左右出现一条新生蛋白带,表达量约占菌体总蛋白的34%。结论 成功构建并原核表达了抗PSAscFv/hCPA融合基因。 相似文献
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Acutepromyeloidleukemia (APL)characterizedbythetranslocationt(15 ;17)isuniquelysensitivetothedifferentiation inducingeffectsofall trans retinoicacid (ATRA) .ATRAinducescompleteclinicalre missionsinmostofthepatientswithAPL .However ,chronicdailyoraladminis… 相似文献
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提高柱式胶回收试剂盒DNA回收效率的最佳条件 总被引:3,自引:0,他引:3
目的 确定提高柱式胶回收试剂盒 DNA回收效率的最佳条件 .方法 回收的基本步骤遵循试剂盒附带的厂家说明 ,在此基础上 ,改变其中所用试剂的剂量 ,或者添加原试剂盒中没有的试剂 ,并在不同条件组合下分别进行 DNA回收 .电泳后 ,通过比较条带的亮度来比较不同条件下 DNA回收效率的大小 ,逐步确定最佳的胶回收条件 .结果 提高柱式胶回收试剂盒 DNA回收效率的最佳条件为 :切胶要尽量的小 ;每 l g胶用 6 0 0 μL的 S1;溶胶时间 :5 5℃ ,10 min;沉淀时加入 3/ 5总体积的异丙醇和 1/ 10总体积的乙酸钠 (3mol· L- 1 ,p H5 .2 ) ;沉淀时间 2 0 m in;沉淀温度为 2 5℃ (室温 ) ;用 T1液溶解效率高于用水溶 ;溶解时间为 2 0 m in (5 5℃ ) .这些最佳条件中 ,大部分都对原来的条件进行了改良 .结论 应用了改良后的胶回收条件后 ,胶回收的效率提高到原来的3~ 4倍 相似文献
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人反义SOD2基因真核表达载体的构建与鉴定 总被引:1,自引:1,他引:0
人反义SOD2基因真核表达载体的构建与鉴定李福洋1惠宏襄1莫简2王成济1(第四军医大学:1生物化学与分子生物学教研室,2化学教研室西安710033)关键词自由基超氧化物岐酶反义核酸表达载体中图号Q26自由基与机体的许多生理,病理过程关系密切.近年来分... 相似文献
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变形链球菌gbpA的葡聚糖结合区GBD肽段的纯化及葡聚糖结合功能实验 总被引:5,自引:2,他引:3
目的:纯化变形链球菌gbpA的葡聚糖结合区GBD肽段。方法:蛋白质技术:金属螯合亲和层析,葡萄糖结合实验。结果:通过蛋白质技术及金属螯合亲和层析,纯化出可融性融合蛋白GBD。此蛋白可与α-1,6键葡聚糖结合。结论:通过基因重组技术成功纯化出变形链球菌gbpA的葡聚糖结合区GBD肽段并证实此重组蛋白具有葡聚糖结合功能。 相似文献
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目的 观察变形链球菌葡聚糖结合蛋白A(GbpA)的葡聚糖结合区(GBD)真核表达质粒pcDNA3·1/GBD在哺乳动物细胞COS-7的表达情况。方法 通过基因重组技术构建真核表达质粒pcDNA3·1/GBD,通过脂质体转染法将其转染至COS-7细胞,通过免疫组化SABC法检测其在COS-7细胞的表达。结果 pcDAN3·1/GBD质粒转染的细胞质呈棕黄色染色,胞核无着色,pcDAN3·1空载体转染的细胞质及胞核无着色,空白对照组也无着色。结论 质粒 pcDAN3·1/GBD转染COS-7后能够在细胞内翻译、表达,表达的蛋白质位于细胞质中,可与抗GbpA抗体特异性结合,具有抗原性,可作为基因疫苗。 相似文献
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变形链球菌葡聚糖结合蛋白B的纯化 总被引:2,自引:1,他引:2
目的:从变形链球菌S.mutans Ingbritt(serotype c)培养液上清中纯化葡聚糖结合蛋白B。方法:Sephadx G-200凝胶(α-1,6键葡聚糖)亲和层析和Q-SephroseFF离子交换层析。结果:纯化出约10μg具有葡聚糖结合特性的GbpB蛋白。结论:通过Sephadx G-200凝胶(α-1,6键葡聚糖)亲和层析和Q-Sephrose FF离子交换层析纯化出变链菌葡聚糖结合蛋白B。 相似文献