抗前列腺特异抗原单链抗体/人羧肽酶A融合基因的构建及表达

目的 构建抗前列腺特异抗原（PSA）单链抗体（scFv)/人羧肽酶A(hCPA)融合基因,为前列腺癌的抗全导向酶-前体药物疗法奠定基础。方法 在已克隆抗PSAscFv和hCPA基因的基础上,用加端PCR分别在scFv基因的3′端和hCPA基因的5′端加上部分连接肽（linker)基因序列,回收后混合。应用重叠延伸拼接法,将抗PASscFv基因和hCPA基因通过linker序列串联为scFv/hCPA融合基因;并将构建的融合基因克隆到融合表达载体pGEX-4T-1中进行表达。结果 序列测定结果表明,构建的抗PSAscFv/hCPA融合基因中scFv和hCPA序列均正确,scFv和hCPA间有18bp的linker序列,推导的氨基酸序列为GSGGSG,与设计的序列相符,融合基因经IPTG诱导表达重组蛋白并以SDS-PAGE分析,在Mr为94000左右出现一条新生蛋白带,表达量约占菌体总蛋白的34%。结论 成功构建并原核表达了抗PSAscFv/hCPA融合基因。     

特异性血管生成抑制素的制备及其抑制血管生成作用

目的：从血浆中纯化制备有特异抑制血管生成活性的天然ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ蛋白,为研究和应用要下基础,方法：制备Ｌ－ｌｙｓｉｎｅ偶联的的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析柱,从血浆中纯化纤溶酶原用弹性蛋白酶在体外进行有限消化,再经Ｌ－ｌｙｓｉｎｅＳｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析纯化获得天然ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ片段,通过体外血管内皮细胞生长抑制分析和体内鸡胚尿囊膜血管生成抑制实验测定纯化蛋白活性。结果：以     

Construction and Significance of Directional Expression cDNA Library from Human NB4 Cells

Acutepromyeloidleukemia (APL)characterizedbythetranslocationt(15 ;17)isuniquelysensitivetothedifferentiation inducingeffectsofall trans retinoicacid (ATRA) .ATRAinducescompleteclinicalre missionsinmostofthepatientswithAPL .However ,chronicdailyoraladminis…     

提高柱式胶回收试剂盒DNA回收效率的最佳条件

目的　确定提高柱式胶回收试剂盒 DNA回收效率的最佳条件 .方法　回收的基本步骤遵循试剂盒附带的厂家说明 ,在此基础上 ,改变其中所用试剂的剂量 ,或者添加原试剂盒中没有的试剂 ,并在不同条件组合下分别进行 DNA回收 .电泳后 ,通过比较条带的亮度来比较不同条件下 DNA回收效率的大小 ,逐步确定最佳的胶回收条件 .结果　提高柱式胶回收试剂盒 DNA回收效率的最佳条件为 :切胶要尽量的小 ;每 l g胶用 6 0 0 μL的 S1;溶胶时间 :5 5℃ ,10 min;沉淀时加入 3/ 5总体积的异丙醇和 1/ 10总体积的乙酸钠 (3mol· L- 1 ,p H5 .2 ) ;沉淀时间 2 0 m in;沉淀温度为 2 5℃ (室温 ) ;用 T1液溶解效率高于用水溶 ;溶解时间为 2 0 m in (5 5℃ ) .这些最佳条件中 ,大部分都对原来的条件进行了改良 .结论　应用了改良后的胶回收条件后 ,胶回收的效率提高到原来的3～ 4倍     

人反义SOD2基因真核表达载体的构建与鉴定

人反义ＳＯＤ２基因真核表达载体的构建与鉴定李福洋１惠宏襄１莫简２王成济１（第四军医大学：１生物化学与分子生物学教研室，２化学教研室西安７１００３３）关键词自由基超氧化物岐酶反义核酸表达载体中图号Ｑ２６自由基与机体的许多生理，病理过程关系密切．近年来分...     

变形链球菌gbpA的葡聚糖结合区GBD肽段的纯化及葡聚糖结合功能实验

目的：纯化变形链球菌gbpA的葡聚糖结合区GBD肽段。方法：蛋白质技术：金属螯合亲和层析，葡萄糖结合实验。结果：通过蛋白质技术及金属螯合亲和层析，纯化出可融性融合蛋白GBD。此蛋白可与α－1，6键葡聚糖结合。结论：通过基因重组技术成功纯化出变形链球菌gbpA的葡聚糖结合区GBD肽段并证实此重组蛋白具有葡聚糖结合功能。     

变形链球菌葡聚糖结合蛋白A真核表达质粒pcDNA3.1/GBD在哺乳动物细胞中的表达

目的　观察变形链球菌葡聚糖结合蛋白A(GbpA)的葡聚糖结合区(GBD)真核表达质粒pcDNA3·1/GBD在哺乳动物细胞COS-7的表达情况。方法　通过基因重组技术构建真核表达质粒pcDNA3·1/GBD,通过脂质体转染法将其转染至COS-7细胞,通过免疫组化SABC法检测其在COS-7细胞的表达。结果　pcDAN3·1/GBD质粒转染的细胞质呈棕黄色染色,胞核无着色,pcDAN3·1空载体转染的细胞质及胞核无着色,空白对照组也无着色。结论　质粒 pcDAN3·1/GBD转染COS-7后能够在细胞内翻译、表达,表达的蛋白质位于细胞质中,可与抗GbpA抗体特异性结合,具有抗原性,可作为基因疫苗。     

变形链球菌葡聚糖结合蛋白B的纯化

目的：从变形链球菌S.mutans Ingbritt(serotype c)培养液上清中纯化葡聚糖结合蛋白B。方法：Sephadx G-200凝胶（α-1,6键葡聚糖）亲和层析和Q－SephroseFF离子交换层析。结果：纯化出约10μg具有葡聚糖结合特性的GbpB蛋白。结论：通过Sephadx G-200凝胶（α-1,6键葡聚糖）亲和层析和Q－Sephrose FF离子交换层析纯化出变链菌葡聚糖结合蛋白B。