双色FISH检测21号染色体及DSCR Cosmid克隆制备

应用Ｂｉｏｔｉｎ－１６－ｄＵＴＰ和Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ－１１－ｄＵＴＰ分别标记人２１／１３号染色体着丝粒区ＤＮＡ探针和Ｄｏｗｎ综合征核心区ＣｏｓｍｉｄＤＮＡ的探针，与人类正常二倍体染色体进行原位杂交，并用相应的免疫荧光系统检测杂交信号，在两条１３号和两条２１号染色体着丝粒区显示绿色信号；在两第２１号染色体长臂信号。     

喉癌染色体6q25区域的杂合性丢失和微卫星不稳定性分析

目的：在6q25区域内筛查喉癌相关的基因，探计胰岛素样生长因子受体Ⅱ(IGF2R)基因及脆性住点FRA6E在喉癌发生中的作用。方法：在6q25区域选择3个微卫星多态标记，其中D6S980位于IGF2R的5′端且与FRA6E紧密连锁。应用聚合酶链式反应-聚丙烯酰胺尿素凝胶电泳-DNA银染方法对70例喉癌进行杂合性丢失(LOH)和微卫星不稳定性(MI)分析。结果：在这3个座位上，喉癌LOH频率以D6s980处最高，达41．4％，MI频率为26．8％。总的异常频率为68．2％。LOH和MI与喉癌临床分期无关。结论：提示IGF2R可能是喉癌相关的抑癌基因。脆性位点FRA6E所在的染色体区段可能存在与喉癌相关的肿瘤抑制基因。     

p53突变和STKl5过表达与肿瘤中心体不稳定的相关性

中心体异常与肿瘤发生的相关性已越来越受到人们的重视。本文综述了中心体异常与肿瘤发生的关系，论述了与中心体异常和肿瘤发生相关的基因p53和STKl5以及二者相关性，对研究中心体在肿瘤的发生机制、诊断、治疗中的应用前景作以展望，并提出了一些尚需探讨的问题。     

喉癌组织中MKRN1和HSP90基因表达的研究

【摘要】目的 正常细胞中MKRN1和HSP90基因的平衡决定了端粒酶活性和端粒长度,使细胞保持正常的状态。二者的表达异常可能与肿瘤的发生发展有关。为探讨MKRN1和HSP90基因的表达与喉癌发生发展之间的关系，我们研究了喉癌组织中MKRN1和HSP90基因mRNA的表达情况。方法 提取35例喉癌组织的总mRNA，用半定量RT-PCR的方法检测MKRN1和HSP90基因mRNA的表达情况。结果 35例喉鳞癌中有18例MKRN1基因mRNA表达下调，占51.4%（18/35）；16例HSP90基因mRNA表达上调，占45.7%（16/35）。 MKRN1基因在肿瘤组织中的表达水平为0.74±0.63,在癌旁正常对照组织中为1.21±0.76，（P＜0.01）。HSP90基因在肿瘤组织中表达水平为1.82±1.25,而在癌旁正常对照组织中为1.23±1.04,（P＜0.05）,统计学上具有显著差异。MKRN1与HSP90基因的表达存在负相关(r=-0.458, P＜0.05)。HSP90基因表达情况与肿瘤的病理分期和患者年龄相关 (P＜0.05) ，MKRN1的表达与肿瘤的临床特征均无相关性(P＞0.05)。结论 喉癌组织中MKRN1和HSP90基因mRNA的表达异常存在相关性，二者表达平衡的破坏可能在喉癌的发生发展中起着重要的作用。     

MUS81基因在喉癌中的突变和表达

目的 探讨MUS81基因突变和表达与喉癌发生发展的相关性.方法 应用聚合酶链反应-单链构象多态性分析技术结合DNA测序检测分析了42例喉癌患者MUS81基因第9、10外显子的突变;应用半定量逆转录-PCR和Western印迹方法分析MUS81基因在喉癌组织中的表达情况.结果 42例喉癌、癌旁组织标本中,癌旁正常组织均无突变,喉癌组织标本中19例发生突变,占45.2%(19/42),11例喉癌组织第9外显子发现有突变,占26.2%(11/42),8 例喉癌组织第10外显子有突变,占19%(8/42),分析表明具有统计学意义(P<0.01).逆转录-PCR结果表明,42例喉癌中有17例MUS81基因mRNA低表达,占40.48%(17/42).Western印迹方法分析结果表明,42例喉癌中有17例MUS81蛋白质低表达,占40.48%(17/42),经统计学分析肿瘤组与对照组差异有统计学意义(P<0.01).分析表明MUS81基因突变与mRNA和蛋白质低表达有显著相关性(P<0.01).统计结果显示喉癌MUS81基因突变与TNM分期、年龄和淋巴结转移无相关性(P>0.05).MUS81基因低表达与TNM分期、年龄和淋巴结转移无相关性(P>0.05).结论 发现MUS81基因在喉癌组织中有突变发生及表达异常,提示MU81基因突变和表达异常可能是喉癌发生及发展的重要因素之一.     

荧光原位杂交技术在Down综合征基因诊断中的应用

本文对10例正常人和46例Down综合征患者外周血,12例正常绒毛(孕6～11周)及8例羊水细胞(孕16～20周)分别进行常规细胞培养G显带核型分析,应用地高辛标记的21号染色体特异性 DSCR Cosmid DNA探针对外周血、未经培养的绒毛及羊水细胞进行原位杂交,探讨该技术对Down综合征进行临床及产前诊断的应用价值。结果,外周血和绒毛细胞的杂交率达89％以上,羊水细胞杂交率较低(平均21％),FISH分析与常规G显带结果一致。提示应用荧光原杂交技术可在24 小时内对Down综合征做出快速而准确的临床及产前基因诊断。     

氟吗啉诱发V79和CHL细胞基因突变和染色体畸变的研究

目的 探讨氟吗啉的致突变性。方法 首先测定氟吗啉对V79和CHL的细胞毒性，然后在非代谢活化和代谢活化条件下，进行氟吗啉诱发V79细胞HGPRT基因突变试验和CHL细胞染色体畸变试验。结果 以氟吗啉500、100、20和4μg/mL浓度处理V79细胞，处理组诱变率与阴性对照组突变率比较，差异无显著性(P≥0．05)；以500、250、125和62．5μg／mL浓度处理CHL细胞24、48h后，在非代谢活化条件下，处理组染色体畸变均小于5％，但在代谢活化条件下，处理组染色体畸变率均大于5％，而且呈剂量．反应关系，通过G-显带发现断裂集中发生于4q上，是断裂热点。结论 可以认为应用氟吗啉100～200mg／L防治植物病害不会对人类健康造成危害，但是职业人群应注意防护。     

乳腺癌转移抑制基因1 mRNA在声门上型喉癌中的表达及临床意义

目的:探讨乳腺癌转移抑制基因1(BRMSl)mRNA在声门上型喉鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义.方法:以β-actin基因为参照,应用RT-PCR方法,检测66例声门上型喉癌组织(肿瘤组)及其相邻的癌旁正常喉黏膜组织(对照组)中BRMSl mRNA表达.结果:肿瘤组中BRMSl mRNA与β-actin平均密度(ADV)比值为0.69±0.56,明显低于对照组(P＜0.05).且肿瘤组织中BRMSl mRNA在病理高分化组中表达明显高于中、低分化组(P＜0.05);在临床Ⅱ期标本表达明显高于Ⅲ～Ⅳ期标本;颈部淋巴结N.组明显高于N 组(P＜0.05);BRMSl mRNA表达与患者性别、年龄无关(均P＞0.05).结论:BRMSl mRNA在声门上型喉癌组织中低表达,且其低表达可能与声门上型喉癌的临床分期、病理分化以及颈部淋巴结转移有关.     

荧光原位杂交技术在Down综合征基因诊断中的应用

本文对１０例正常人和４６例Ｄｏｗｎ综合征患者外周血，１２例正常绒毛（孕６～１１周）及８例羊水细胞（孕１６～２０周）分别进行常规细胞培养Ｇ显带核形分析，应用地高辛标记的２１号染色体特异性ＤＳＣＲ Ｃｏｓｍｉｄ ＤＮＡ探针对外周血、未经培养的绒毛及羊水细胞进行原位杂交，探讨该技术对Ｄｏｗｎ综合征进行临床及产前诊断的应用价值。结果 外周血和绒毛细胞的杂交率达８９％以上，羊水细胞杂交率较低（平均２１％），     

肝硬化腹水临床治疗及研究

目的对采用中西医结合治疗肝硬化腹水的临床疗效进行分析,同时对相关治疗经验进行总结.方法将48例经过B超检查确诊的肝硬化腹水患者,随机分为两组,每组各24例,对照组采用西医治疗,治疗组采用中西医结合,对两种的疗效进行比较和分析.结果通过B超对肝功能进行检测,治疗组的疗效要显著高于对照组.结论采用中西医结合治疗肝硬化腹水,具有显著的疗效,值得在临床上大力借鉴和推广.