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目的 探索如何抑制嗜酸细胞的趋化作用,选择β-趋化因子巨噬细胞炎性蛋白4(MIP4)的突变性(Met-MIP4)作为趋化因子受体3的拮抗剂,将Met-MIP4基因在原核细胞中进行表达。方法 设计MIP4基因的PCR引物并进行氨基酸突变,将MIP4N末端的丙氨酸突变为蛋氨酸,以正常人肺酸突变,将MIP4N末端的丙氨酸突变为蛋氨酸。以正常人肺cDNA文库为模板,PCR方法获取Met-MIP4基因,克隆入载体pUC19,测序验证序列已得到突变,将正确的基因插入到GST融合表达载体pGEX-4T中,以IPTG诱导表达。结果 PCR产物为220bp左右的片段,连接入pUC19质粒后测序验证获得正确突变,构建的pGEX-4T融合表达载体在大肠杆菌中表达,经SDS-PAGE凝胶电泳显示有大小约34kU的新生融合蛋白表达。结论 成功突变并克隆了β-趋化因子MIP4基因,SDS-PAGE表明,与GST融合的Met-MIP4突变体已得到表达,为进一步研究其生物学活性奠定了基础。 相似文献
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支气管动脉栓塞治疗危重大咯血21例 总被引:1,自引:0,他引:1
0 引言 咯血是肺部疾病的常见临床症状 ,其大咯血病死率高达 5 0 %~ 1 0 0 % .死亡原因主要是由于咯血窒息所致 .大咯血的治疗方法很多 ,但迄今仍有少数患者虽经使用各种治疗手段 ,仍无法控制大咯血 .我科 2 1例患者采用支气管动脉造影 (BAG)并栓塞 (BAE)获得成功 .1 材料和方法1 .1 材料 大咯血 2 1例 ,男 2 0例 ,女 1例 ,年龄 1 5~ 5 8岁 .诊断 :支气管扩张 1 6例 ,肺结核 2例 ,先天性肺囊肿、右肺发育不全、右肺中叶不张各 1例 .1 .2 方法 术前在治疗室要备有氧气及吸引器 ,静滴垂体后叶素保持液体通道 ,给予适当镇静剂 . B… 相似文献
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支气管哮喘( bronchial asthma)是一种异质性疾病,以气道慢性炎症为特征,定义为反复发作的咳嗽、喘息、胸闷等呼吸系统疾病症状发作史且随着时间而变化,伴有可逆性气流受限的疾病,是呼吸系统常见疾病之一[1-2].目前我国约有4570万哮喘患者,全世界约有3亿人患有哮喘[3-4].近年来其患病率及发病率逐年上升... 相似文献
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银杏苦内酯B对哮喘豚鼠气道反应性和嗜酸性粒细胞的影响 总被引:4,自引:2,他引:4
作利用豚鼠哮喘模型观察豚鼠吸入卵蛋白(OA)或血小板激活因子(PAF)后引起的气道反应,血浆和支气管肺泡灌洗液(BALF)中溶血-PAF(Lyso-PAF)含量和肺组织中嗜酸性粒细胞(E0)改变,及PAF拮抗剂银杏苦内酯B(GB)的影响。结果提示致敏豚鼠OA激发和正常豚鼠PAF激发后,与对照组相比,豚鼠血浆和BALF中Lyso-PAF含量增高(P〈0.01),肺组织中E0数增多(P〈0.01), 相似文献
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目的探索如何抑制嗜酸性粒细胞的趋化作用,选择β-趋化因子巨噬细胞炎性蛋白4(MIP4)的突变体(Met-MIP4)作为趋化因子受体3的拮抗剂,将Met-MIP4基因在原核细胞中进行非融合表达. 方法设计MIP4基因的PCR引物并进行氨基酸突变,将MIP4 N末端的丙氨酸突变为蛋氨酸.以正常人肺cDNA文库为模板,PCR方法获取Met-MIP4基因.克隆入载体pUC19,测序验证序列已得到突变.将正确的基因插入到非融合表达载体pBV220中进行表达.结果 PCR产物为220 bp左右的片段,连接入pUC19质粒后测序验证获得正确突变.构建的pBV220非融合表达载体在大肠杆菌DH5-α中表达,经Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳显示有大小约8×103的非融合蛋白表达.结论成功突变并克隆了β-趋化因子MIP4基因.Tricine-SDS-PAGE表明,非融合的Met-MIP4突变体已得到表达,为进一步研究其对哮喘的生物治疗奠定了基础. 相似文献
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在健康的个体中,人类鼻病毒(Human rhinovirus,HRV)感染是普通感冒主要的原因,然而,在支气管哮喘(哮喘)患者中,HRV感染可以对疾病的发生和发展产生重大影响。哮喘是一种常见的慢性气道炎症性疾病,具有明显的异质性和复杂的病理生理特征。在幼年时期,HRV诱发的喘息性疾病是哮喘后续发展的一个重要危险因素,越来越多的证据表明,反复HRV感染在哮喘气道重塑多个方面的发生发展中起着重要的作用。近年来,哮喘病死率有所下降,但发病率仍不断上升,且至今尚无有效治愈的方法,不易控制的重症哮喘是致命性过敏反应的危险因素,哮喘急性发作给全球的卫生保健系统带来了巨大的经济负担,成为哮喘患者住院和死亡的主要原因。众多研究发现,HRV感染是哮喘急性发作常见的诱因之一。因此,更好地了解HRV在哮喘中的作用显得尤为重要。过去十余年的研究对HRV感染所致哮喘患者气道重塑的发生发展有了新的认识,现就目前关于HRV感染在哮喘发生及气道重塑中的作用机制加以综述,并提出相关治疗策略,以限制HRV感染对哮喘的影响。 相似文献
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VIP化疗方案治疗小细胞肺癌的疗效观察 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 评价VIP化疗方案 (异环磷酰胺 +顺铂 +鬼臼乙叉甙 )对小细胞肺癌 (SCLC)的治疗价值。方法 按入院顺序随机将 12 0例局限型SCLC初治患者分成VIP治疗组和EP治疗组 (顺铂 +鬼臼乙叉甙 ) ,分别治疗 3周期后评价各组的完全缓解 (CR)、部分缓解 (PR)、稳定 (SD)、进展 (PD)和总有效率 (RR) ,并比较各组的毒副反应发生率。此外 ,还对 2 5例EP方案治疗失败的SCLC患者 ,采用VIP方案解救治疗 ,观察其CR、PR、SD、PD和RR。结果 在 118例可评价的患者中 ,两方案对初治局限型SCLC患者的RR分别为89.6%和 78.3 % (P >0 .0 5 ) ,其毒性反应相当 ,但VIP方案的CR率为 43 .1% ,明显高于EP方案 ( 2 5 .0 % ) (P<0 .0 5 ) ;VIP方案对EP方案治疗无效或复发病例CR率为 13 .0 % ,PR率为 3 9.1% ,PD为 47.8% ,RR为5 2 .2 %。结论 VIP方案作为局限型SCLC患者的一线方案疗效优于标准EP方案 ,而且还可用于EP方案治疗失败病例的解救治疗。 相似文献
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地塞米松对气道重建影响的研究 总被引:12,自引:1,他引:11
目的探讨吸入地塞米松对气道重建和对离体平滑肌增殖作用的影响。方法雄性豚鼠40只,随机分为4组哮喘组、治疗组、地塞米松组、对照组,每组10只。每组动物连续3个月雾化吸入不同药物后留取病理组织,采用计算机图像分析气道壁厚度。通过对犬气管离体平滑肌细胞培养,测定组胺(His)组、血栓素A2组和地塞米松组[3H]-胸腺嘧啶核苷([3H]-TdR)的闪烁计数值。结果哮喘组豚鼠气管平滑肌厚度为(90±14)μm,与对照组(54±7)μm比较,差异有显著性(P<0.01);治疗组气管平滑肌厚度为(61±11)μm,与哮喘组比较,差异有显著性(P<0.01)。His组[3H]-TdR值为(2950±205)次/分,与对照组[(613±52)次/分]比较,差异有显著性(P<0.01);地塞米松组[3H]-TdR值为(1067±96)次/分,与His组比较差异有显著性(P<0.01)。结论地塞米松能抑制气道平滑肌细胞增殖,早期吸入地塞米松能够有效防治气道重建,对气道无损害作用。 相似文献
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概况上海实验动物的使用起步于三十年代.那时规模很小,解放以后才得到逐步发展.大体的过程是:五十年代从苏联引进一批纯系小鼠,本市实验动物有了新的提高.六十年代中期有筹建全市实验动物中心的设想,但刚开始筹建,值十年动乱而夭折,已经选好的土地和部分建筑调给药厂使用.原来已有一定基础的科研单位和应用生产部门也因“文革”影响,人员下放,动物宰杀,房舍荒芜,实验动物工作受到严重挫折.直到粉碎了“四人帮”的七十年代后期,随着科学技术的发展和受国 相似文献
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MIP4的突变体构建及其对嗜酸粒细胞趋化的抑制 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:为研究MIP4(巨噬细胞炎性蛋白4)的突变体在拮抗嗜酸粒细胞的趋化作用中的活性。构建MIP4突变体(Met-MIP4)并进行原核表达和纯化,体外观察其拮抗嗜酸粒细胞的趋化作用。方法:将Met-MIP4基因片段插入到pR-SET-A融合表达载体中。诱导表达后,表达工程菌经超声裂菌后鉴定可溶性,细菌裂解上清经镍螯合亲和层析纯化,采用葡聚糖沉淀法分离和纯化嗜酸粒细胞,利用24孔Transwell双层板鉴定融合表达蛋白的趋化和抗趋化活性。结果:构建入融合表达载体pRSETA的基因在大肠杆菌中得到表达。裂菌后鉴定显示融合蛋白可溶部分占80%,经镍螯合亲和层析纯化后纯度达87%,分离的嗜酸粒细胞纯度达到90%,拮抗嗜酸粒细胞趋化活性实验表明,纯化的Met-MIP4蛋白具有明显拮抗嗜酸粒细胞的趋化作用。结论:Met-MIP4突变体基因在pRSETA融合表达载体中获得可溶性表达和纯化,生物学活性实验表明融合的pRSET-Met-MIP4蛋白具有拮抗嗜酸粒细胞的趋化作用的活性。为进一步开发其临床应用奠定了基础。 相似文献