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目的克隆人B细胞特异激活蛋白基因Pax5,并实现Pax5的原核表达、纯化及多克隆抗体制备。方法从人淋巴瘤细胞株Raji提取总RNA,用RT-PCR扩增Pax5基因片段,克隆至pMD19-T载体,双酶切及基因测序鉴定后,再定向插入原核表达载体pET28a中,并转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达目的蛋白,进行SDS-PAGE分析,纯化后进行Western blot分析,用原核表达蛋白制备兔抗Pax5抗血清。利用免疫荧光染色法观察Raji细胞中的Pax5表达情况。结果克隆得到的目的基因片段大小与预期相符,测序结果与GenBank中报道的序列完全一致,成功构建了重组表达质粒pET28a-Pax5,并获得目的蛋白。Western blot检测原核表达Pax5蛋白相对分子质量约为42 000,经镍离子金属螯合柱纯化后,纯度达95%以上。兔抗Pax5抗血清ELISA效价可达1∶256 000。免疫荧光染色结果显示Raji细胞中Pax5高表达。结论本研究在原核系统中成功表达了Pax5重组蛋白,并制备多克隆抗体,为开发B淋巴细胞白血病诊断试剂盒提供了实验数据。 相似文献
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多色免疫组化/荧光结合多光谱成像技术是一种创新型的多靶标病理组织染色、成像及分析技术。通过在一张组织切片上原位检测多种生物标志物的表达水平及空间信息,并配合定量分析软件,可对细胞的表型、丰度、形态及细胞间相互关系作出分析,并给出具有统计学意义的细胞组学数据。近年来,随着多色免疫组化/荧光技术的快速发展及多光谱成像技术的日臻成熟,该技术被成功地应用于肿瘤免疫研究领域,主要包括:肿瘤免疫微环境研究、免疫治疗药物研发、预后和转移风险评估等。基于以上现状,本综述对多色免疫组化/荧光结合多光谱成像技术的原理、工作流程、优缺点进行了阐述,并重点讨论了近年来该技术在抗肿瘤免疫治疗药物开发及肿瘤微环境研究领域的应用。 相似文献
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李文哲 《中国实用内科杂志》1985,(3)
恶性症状群(Malin Syndrom),通常见于精神科病房,是抗精神病药物的一种严重并发症。现将我院内科收治的2例报告如下:病历摘要例1:男患,26岁,住院号10669。以语言不清,行走困难3天为主诉,于1984年2月3日首次入院。3天前,患者因“上感”在当地卫生所输液治疗。液体输至20分钟时,患者发冷、寒战,即从滴管内先后加入盐酸异丙嗪50mg 与盐酸氯丙嗪50mg,片刻后出现烦躁、 相似文献
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