TNF—α的生物活性检测法与酶联免疫吸附法比较

比较了生物活性检测法与酶联免疫吸附法对大鼠腹腔巨噬细胞分泌的肿瘤坏死因子－α（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ－α，ＴＮＦ－α）的检测。在静息Ｍ＋φ培养上清液中，用两种方法的未测到ＴＮＦ－α；而脂多糖（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ＬＰＳ，１００μｇ／Ｌ）刺激组，用两种方法均测到大量ＴＮＦ－α；如ＬＰＳ与秋水仙碱（ｃｏｌｃｈｉｃｉｎ，Ｃｏｌ）联用，ＴＮＦ－α的产生受到抑制，ＢＡ法检测     

噬菌体展示TM-TNF-α模拟肽体内杀瘤效应的研究

目的　研究噬菌体展示TM -TNF- α模拟肽的体内杀瘤效应及机制。方法　大量制备所需的噬菌体展示肽,比较不同展示肽对小鼠的肝癌细胞H2 2的体外杀瘤效应,挑取杀瘤效应最好的展示肽并选择其合适的滴度进行体内实验。小鼠接种H2 2细胞3d后,于肿瘤接种部位皮下注射噬菌体展示肽,观察肿瘤的生长情况。结果　噬菌体展示TM- TNF -α模拟肽在体内能明显抑制肿瘤的生长(P <0 .0 1)。且抑瘤率与展示肽之间呈剂量依赖关系。HE染色发现展示肽治疗组肿瘤组织中有大量淋巴细胞浸润,而sTNF- α治疗组除淋巴细胞浸润还可见中性粒细胞、浆细胞浸润。结论　直接注射噬菌体展示TM -TNF -α模拟肽可在体内有效杀瘤,其杀瘤机制可能不同于分泌型TNF -α。     

PKA对跨膜型和分泌TNF—α胞毒效应的影响

目的：研究ＰＫＡ对跨膜型ＴＮＦα（ｍＴＮＦ－α）杀瘤效应的影响。方法：用ＴＮＦ生物活性检测方法在体外观察ＰＫＡ激活剂和抑制剂对一型ＴＮＦ－α杀伤不同肿瘤细胞的影响。结果：ＰＫＡ激活剂Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ（１０μｍｏｌ／Ｌ）和抑制剂Ｈ８（１５μｍｏｌ／Ｌ）可分别增强和抑制ｓＴＮＦ－α对其第三靶细胞的胞毒活性,对其余４株耐受细胞却无逆转使用,而且对ｍＴＮＦ－α的胞毒效应无任何影响。此外,ＰＫＡ活性增强,     

u-PAR反义核酸载体的构建与高侵袭人前列腺癌细胞PC-3M亚系的转染

目的:为了特异封闭PC-3M高侵袭亚系尿激酶型纤溶酶原激活物受体(u-PAR)的表达,观察其对侵袭能力的抑制效应。方法: 应用RT-PCR获得u-PAR的cDNA片段,反向插入pcDNA3质粒载体中,构建u-PAR反义核酸载体并导入高侵袭亚系中;借助RT-PCR和免疫组化检测转染细胞u-PAR的表达。 结果:u-PAR反义核酸载体转染株的u-PAR mRNA和蛋白质水平明显低于对照组,抑制率分别为53%和73%,同时其体外侵袭能力亦明显降低,抑制率为79%。 结论: u-PAR反义核酸在PC-3M高侵袭亚系中发挥了特异封闭作用,为进一步观察u-PAR反义核酸抑制高侵袭前列腺癌细胞亚系的侵袭效应提供了细胞模型。     

用基因指纹及DNA图谱诊断

用基因指纹及DNA图谱技术可根据遗传标记来区分个体,这些方法检测结果具有高度个体特异性,已在医学的不同领域得到利用。人类二倍体的遗传物质(基因组)由7×10~9核苷酸残基或碱基组成的信息单位构成,其中可翻译成蛋白等功能的分子编码序列不到10％。在非基因DNA广大区域中     

雷米封静滴致精神障碍1例分析

患者女性,19岁,汉族,45公斤,病案号147893,2004年8月10日以“发热、盗汗、胸闷、乏力一周”主诉来我院,胸片诊断:肺结核合并右侧结核性胸膜炎住院。查体:T36.8℃,P84次/分,R21次/分,BP110/60mmHg,神志清,肺部听诊,右下呼吸音低,罗音(-),心(-),腹平软,无压痛、反跳痛,肝、脾肋下未触及。辅助检查:血Rt正常,ESR40mm/h,痰涂片查抗酸杆菌3次均阴性。血生化正常,ECG窦性心律。胸腔置管引流出淡黄     

人可溶性TNF受体Ⅱ克隆、原核表达与活性鉴定

目的构建人可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅱ（sTNFRⅡ）原核基因表达载体，并在大肠埃希菌中高效表达之。方法采用RTPCR技术．从人外周血的单核细胞中扩增出肿瘤坏死因子受体Ⅱ（TNFRⅡ）基因的胞外区，将其克隆入pET28a（＋）高效表达载体进行诱导表达．并对表达产物进行纯化及鉴定。结果在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导下．转入外源基因的大肠埃希菌BL21（DE3）可高效表达sTNFRⅡ蛋白．SDS-PAGE显示在32kD处有一特异表达条带．其表达量占菌体蛋白总量的30％左右。纯化的sTNFRⅡ经Western blot鉴定具有生物学活性；生物活性实验（MTT法）显示它可有效地封闭分泌性肿瘤坏死因子α（sTNF-α）对L929细胞的胞毒效应；直接免疫荧光显示它町以特肄性抑制GFP-sTNF-α与靶细胞肿瘤坏死因子受体的结合。结论通过基因工程技术获得了人sTNFRⅡ的重组蛋白。     

肿瘤坏死因子及其受体超家族的临床靶点

肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF)抑制剂是最成功的生物制剂药物。它的临床疗效在减轻一些自身免疫性疾病相关的炎症中已经得到充分证明。由此,同TNF超家族结构相关的细胞因子治疗潜力备受关注。这些肿瘤坏死因子相关的细胞因子或它们的同源受体正处于临床前或临床开发作为调节炎性疾病、癌症以及其它适应症可能的靶点。在这篇综述中,我们重点阐述当前用于免疫相关性疾病临床试验的生物制剂,分析它们的疗效、存在的问题以及扩大这个超家族分子调节活性的治疗潜力。     

比较跨膜型与分泌型TNF-α在体内的杀瘤效应

目的:比较分泌型和跨膜型TNF-α在体内抗瘤作用的异同.方法:在肿瘤局部直接注射3种TNF-α(野生型TNF-α重组体、跨膜型及分泌型TNF-α突变体)基因,观察其抗瘤效应 结果:3种TNF-α均能有效表达。并具明显抑瘤效应,跨膜型TNF-α突变体对早期肿瘤的仰制效应明显高于其它2种TNF-α(P<0.01),而野生型TNF-α对中肿瘤的抗瘤效应则最佳.此外,注射3种TNF-α裸DNA均未观察到明显副作用,结论:分泌型和跨膜型TNF-α抑瘤机制可能下同,裸DNA直接用于细胞因子基因治疗较安全,简易和有效     

Throat Infection, Neck and Chest Pain and Cardiac Response： A Persistent Infection-Related Clinical Syndrome

Dizziness, chest discomfort, chest depression and dyspnea are a group of symptoms that are common complaints in clinical practice. Patients with these symptoms are usually informed that while neurosis consequent to coronary heart disease is excluded nonetheless they remain unhealthy with no rational explanation or treatment. 165 cases of these symptoms and 85 control subjects were reviewed and underwent further medical history inquiry, routine EKG test and cardiac ultrasound examination. Thirty-five patients received coronary artery angiography to exclude coronary heart disease. Serum myocardial autoantibodies against beta1-adrenoceptor, alpha-myosin heavy chain, M2-muscarinic receptor and adenine-nucleotide translocator were tested, and inflammatory cytokines and high sensitivity C-reaction protein were measured and lymphocyte subclass was assayed by flow cytometry. All patients had a complex of four symptoms or tetralogy： （1） persistent throat or upper respiratory tract infection, （2） neck pain, （3） chest pain and （4） chest depression or dyspnea, some of them with anxiety. Anti-myocardial autoantibodies （AMCAs） were present in all patients vs. 8% in controls. TNF-α, IL-1 and IL-6 were significantly higher in patients than in controls （P〈0.01）. CD3^＋ and CD4-CD8^＋ lymphocytes were significantly higher and CD56＋ lymphocytes lower in patients than those in controls （P〈0.01）. The ratio of serum pathogen antibodies positive against Coxsackie virus-B, cytomegalovirus, Mycoplasma pneumoniae and Chlamydia pneumoniae were all markedly higher in patients. These data led to identification of a persistent respiratory infection-related clinical syndrome, including persistent throat infection, neck spinal lesion, rib cartilage inflammation, symptoms of cardiac depression and dyspnea with or without anxiety.