益肝降脂方预处理对酒精性脂肪肝SD大鼠诱导型一氧化氮合酶表达影响

目的:观察分析益肝降脂方(YGJZF)预处理对酒精性脂肪肝(AFLD)SD大鼠内源性保护物质诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA和蛋白表达的影响,探讨YGJZF预处理模拟或加强缺血预适应效应对肝脏保护作用的机制。方法:将116只SD大鼠随机分为模型组22只,中药干预组94只,模型组连续12周予高脂+酒精灌胃进行酒精性脂肪肝造模,中药组在模型组基础上用中药干预。分别于实验不同时段宰杀取样,检测大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(T-CHO)含量;实时荧光定量(PCR)和免疫印迹法(Western blot)分别检测大鼠肝脏iNOS mRNA和蛋白的表达;同时HE染色观察大鼠肝脏组织病理学变化。结果:模型组大鼠ALT、AST、TG、TC水平明显升高,与YGJZF用药3周组、YGJZF用药6周组、YGJZF用药9周组比较,差异有显著性意义(P<0.05);RT-PCR和Western blot显示模型组肝组织iNOS mRNA和蛋白呈现高表达,随着用药时间的延长,iNOSmRNA和蛋白表达逐渐下降;肝组织HE染色酒精模型组肝脏损伤严重,随着YGJZF用药时间的延长,肝脏损伤逐渐减轻。结论:YGJZF对酒精性脂肪肝保护作用机制可能是触发了肝脏的内源性保护传导路径的关键物质诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达,模拟并加强了肝脏的缺血预适应效应。     

益肝降脂方预处理对酒精性脂肪肝SD大鼠肝脏PKCα表达的影响

目的:观察中药益肝降脂方预处理对酒精性脂肪肝SD大鼠肝脏蛋白激酶Cα(PKCα)基因与蛋白表达的影响,探讨益肝降脂方对酒精性脂肪肝内源性保护机制的诱发与强化的效应。方法:将116只SD大鼠随机分为模型组与中药干预组,所有大鼠均连续12周予高脂+酒精灌胃进行酒精性脂肪肝造模,中药组分别于实验第3周、第6周、第9周起实施干预。于实验6、9、12周末不同时段宰杀取样,观察大鼠的一般情况及肝脏组织病理学变化以评价造模,蛋白免疫印迹法(Western blot)观测PKCα蛋白表达量,RT-PCR法检测PKCαm RNA的表达活性。结果:HE染色显示模型组大鼠肝小叶结构改变,肝细胞索紊乱,肝细胞呈不同程度的脂肪变性、点状坏死及炎性细胞浸润;中药各干预组大鼠肝组织脂肪变均较模型组明显改善。中药各时段干预组大鼠肝组织PKCα蛋白含量与模型组比较均明显升高,PKCαm RNA的相对表达量明显高于模型组,且PKCαm RNA相对表达量随用药时间的先后呈进行性降低。结论:中药益肝降脂方早期干预能促进PKCα基因和蛋白的表达,有显著的药物预适应作用;益肝降脂方的预适应作用与用药早晚成正相关;中药益肝降脂方防治酒精性脂肪肝的机制可能与早期促发内源性保护实现预适应相关。     

益肝降脂方对酒精性脂肪肝大鼠肝组织MMP-9活性的影响水

目的：探讨益肝降脂方（YGJZR）对酒精性脂肪肝大鼠肝组织病理及MMP-9活性的影响,以期了解分析益肝降脂方防治酒精性脂肪肝的可能机制。方法：雄性SD大鼠80只,分为空白对照组（20）只,模型组（30只）,中药组（30只）,采用免疫组化SABC法测定三组模型肝脏组织中MMP-9的表达。并制备各组大鼠肝脏病理切片。结果：中药组大鼠肝组织内MMP-9的阳性表达率高于模型组大鼠肝脏组织,差异有统计学意义（P〈0．01）,且与HE染色切片提示的肝组织病理损伤呈负相关。结论：中药益肝降脂方可使大鼠肝脏组织内MMP-9的表达增加,纤维化程度相对较低．其防治酒精性脂肪肝的机制与促进肝组织MMP-9表达．抑制肝纤维化有关．     

酒精诱导大鼠脂肪肝8-异前列腺素F2α活性变化及益肝降脂方的干预时效

目的观察8-异前列腺素F2α(8-iso-PGF2α)在大鼠酒精性脂肪肝病(AFLD)造模过程中的活性变化及与益肝降脂方干预的时效关系。方法将97只SD大鼠随机分为模型组22只和中药干预组75只,予高脂联合梯度酒精灌胃建立AFLD模型;中药干预组随机分为第3周组、第6周组、第9周组,分别于造模第3周、第6周、第9周起给予益肝降脂方浸膏1ml(含生药1.33g/ml)灌胃,模型组给予等剂量生理盐水,至造模12周。各组在不同时间点检测血清8-iso-PGF2α活性,丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)含量,肝组织丙二醛(MDA)、黄嘌呤氧化酶(XOD)活性;观察肝组织病理变化。结果随着造模时间延长,大鼠血清8-iso-PGF2α活性与ALT、AST、TG、TC水平明显升高(P<0.05或P<0.01);第3周组(3~6周)和(3~12周)与第9周组(9~12周)比较,8-iso-PGF2α、ALT、AST、TC、MDA、XOD水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。光镜下模型组脂肪变性随着造模时间延长呈现逐渐加重趋势,至12周末呈中、重度脂肪变性伴水样变性3~4度,各中药干预组病变程度均较模型组减轻,第3周组较第9周组(9~12周)脂肪变性及水样变性程度减轻。结论大鼠血清8-iso-PGF2α活性、肝损伤程度与造模时间正相关;益肝降脂方对AFLD肝损伤具有保护作用,且干预时间越早效果越明显,其机制可能与降低8-iso-PGF2α活性,减轻氧化应激及脂质过氧化相关。     

高脂加酒精灌胃法诱导大鼠脂肪肝成模及思考

目的探索简便易行的酒精性脂肪肝造模方法及成模时间,为保证酒精肝成模的稳定性和可靠性提供参考。方法30只SD大鼠随机分为2组。实验组给予40%、45%、50%梯度浓度酒精灌胃,正常对照组给予等量生理盐水代替酒精灌胃,于实验的2、4、5、8、12周末分批采血测定生化指标,后脱颈处死,取出肝脏石蜡包埋,HE染色后行病理学观察。结果实验组大鼠于第3周起观察到酒精性肝损伤的早期变化(如脂肪变性,点灶状坏死,炎性浸润等),并随时间变化呈逐渐加重的趋势。结论应用高脂加酒精灌胃法可成功复制大鼠酒精性脂肪肝模型。     

益肝降脂方药对酒精诱导SD大鼠脂肪肝的干预效应与分析

目的:观察益肝降脂方药对酒精性脂肪肝病(AFLD)大鼠的早期干预效应。方法:85只雄性SD大鼠随机分为模型组25只,中药组、西药组各30只,连续12周予高脂饲料联合梯度白酒灌胃建立AFLD模型,自第9周依次分别灌服2ml的生理盐水、益肝降脂方药和易善复混悬液;于第4、8周末分别处死模型组大鼠4只、5只,余大鼠均于第12周末处死,观察各模型组大鼠一般情况、肝脏指数、光镜下肝组织损伤程度,分别用速率法、GPO—PAP法检测血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)、血清总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)水平;用TBA比色分析法测定12周末大鼠肝组织丙二醛(MDA)水平、黄嘌呤氧化酶(XO)活性。结果:模型组大鼠一般情况较中、西药组差,肝湿重、肝指数有逐渐增加趋势(P均>0.05),血清ALT、AST、TC、TG水平均呈明显上升趋势(P均<0.05),HE染色光镜下观察肝组织呈不同程度脂肪变性;与模型组比较,中、西药组大鼠肝组织脂肪变明显较轻;大鼠肝湿重、肝指数,中、西药组较模型12周组及中药组较模型8周组均有下降趋势(P均>0.05);中、西药组大鼠分别较模型8周、12周组大鼠血清ALT、AST、TC、TG水平明显降低(P均<0.05),较模型4周组大鼠血清ALT、AST、TC水平明显降低(P均<0.05);与模型组12周相比,中、西药组大鼠肝组织匀浆MDA含量及XO活性明显下降(P<0.05);中、西药组大鼠肝湿重和肝指数,血清ALT、AST、TC、TG水平,肝组织匀浆MDA含量及XO活性差异无统计学意义(P>0.05)。结论:采用高脂饮食联合酒精灌胃的方法可成功诱导SD大鼠AFLD模型;益肝降脂方药可明显减轻AFLD大鼠肝组织脂肪变、炎症程度及病理损伤并显示出时、效相应的特点,可能是早期有效干预治疗AFLD的作用机制之一。     

益肝降脂方对酒精性脂肪肝SD大鼠D-乳酸和二胺氧化酶的预防效应分析

[目的] 观察益肝降脂方（YGJZF）不同阶段干预对酒精性脂肪肝（AFLD）SD大鼠D-乳酸（D-LA）、二胺氧化酶（DAO）的预防效应,分析益肝降脂方对肠黏膜屏障可能的机制。[方法] 将97只SD大鼠适应性喂养1周后,随机分为模型组22只、YGJZF组75只,按干预时段的不同YGJZF组分为第3周用药、第6周用药、第9周用药3组。模型组予高脂+乙醇灌胃进行酒精性脂肪肝造模,YGJZF组在模型组基础上用药干预。分别于实验不同时段处死大鼠,观察各组大鼠体质量、肝湿重、肝指数变化,血清D-LA、DAO的含量,同时检测大鼠血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）含量。HE染色观察大鼠肝脏组织病理学和肠道组织病理形态变化。[结果]随着造模时间的延长,大鼠体质量及肝湿重均明显升高,与模型组相比,YGJZF组体质量增加更明显。与模型组相比,不同时段YGJZF组血清D-LA、DAO的含量均显着降低（P<0.05）。模型组大鼠ALT、AST、TG、TC水平明显升高,与不同时段YGJZF组比较,差异有统计学意义（P<0.05）;D-LA及DAO活力高低与肠道组织病理变化趋势呈正向相关,也与肝脏组织病理损伤有相关性。[结论] 1）益肝降脂方预防性给药能够保护肠黏膜屏障,其可能的机制与降低酒精性脂肪肝大鼠血清D-LA、DAO有关。2）益肝降脂方降低血清D-LA、DAO含量的同时减轻酒精性脂肪肝大鼠肝脏损伤。3）益肝降脂方不同阶段干预造模均对酒精性脂肪肝大鼠肠道屏障具有预防保护作用,而早期干预效果明显。     

探讨益肝降脂方对大鼠酒精性脂肪肝病理影响与疗效的相关性

[目的]通过观察肝脏组织形态学的改变以探讨求证益肝降脂方(YGJZF)对酒精性脂肪肝大鼠肝组织病理的影响及分析。[方法]实验共分为3期,共245只雄性SD大鼠分为3个大组:空白组15只、模型组50只、中药组180只。统一采用高脂饲料+乙醇灌胃法建立大鼠酒精性脂肪肝模型,并分别予以相应中药干预,获取各组大鼠肝脏同一位置组织制作苏木精-伊红(HE)染色病理切片,观察3组大鼠肝脏组织形态学的变化。[结果]中药各组大鼠肝组织损伤程度均较模型组轻,且两者存在显著差异性(P0.05)。[结论]YGJZF能够减轻酒精性脂肪肝大鼠肝组织的病理损伤,对酒精性脂肪肝有肯定的保护作用。