磁性颗粒标记单抗对肠道病毒EV71感染的体外MRI检测

目的探讨MRI通过磁性颗粒标记抗体可视化EV71病毒感染细胞分布的可行性。方法提取临床EV71分离株制备单克隆抗体,Fe磁性颗粒标记纯化的单克隆抗体11R12-IgG,磁化标记的单抗11R12-IgG运用与protein-A/G-beads共孵育及SDS-PAGE分析测量抗体吸附效率。然后用ELISA测试11R12-IgG-beads与纯化的VP1抗原的结合能力。最后MRI信号分析磁性颗粒标记的抗体在细胞水平上检测病毒感染分布的能力。结果抗体在磁珠的首次吸附效率约为75.5%,经过第二次洗涤后只有少量抗体洗脱;并SDS-PAGE分析显示首次吸附在磁珠上的抗体浓度仅略低于原始浓度,都证实抗体以较高的效率成功吸附到磁珠上。ELISA结果表明磁珠结合抗体后,抗体识别抗原的能力不受影响。MRI结果显示磁颗粒11R12-IgG组能检测到显著的MRI信号,而仅磁珠组或者仅IgG组则不能检测到相应的MRI信号。结论磁颗粒-IgG能在细胞水平特异,在体外水平有效地检测EV71病毒的感染,为确定病理损伤和病毒的共定位奠定了重要基础。     

EV71临床毒株分离及其VP1单克隆抗体制备

目的 对手足口病肠道病毒71型 (EV71) 流行临床株进行分型和鉴定,制备抗EV71外壳蛋白VP1的特异性单克隆抗体,为EV71生物学特征研究和疫苗株的筛选奠定基础。方法 从患者咽拭子中分离出流行的EV71毒株,原核表达纯化该毒株EV71 VP1衣壳蛋白,以此蛋白为免疫原制备VP1的特异性小鼠单克隆抗体,采用免疫荧光法（ELISA）观察抗体能否特异性识别EV71感染的细胞。结果 测序结果显示分离出的EV71病毒株为肠道病毒C4亚型。筛查出12株分泌针对VP1蛋白的抗体杂交瘤细胞株,将其中结合特异性和结合力最强的一株命名为11T12。复苏的11T12活化后接种于液体石蜡免疫的小鼠腹腔,收集腹水经过protein-G柱纯化后对抗体的效价进行ELISA评价,结果显示纯化抗体稀释10万倍后仍可以结合蛋白,证实成功制备了抗EV71 C4亚型外壳蛋白VP1单克隆抗体。抗体结合特征分析结果显示该抗体具有特异性识别能力。结论 从感染的临床样本中分离到一株C4型EV71毒株,以该病毒VP1蛋白为免疫原获得一株相应的单克隆抗体11T12,该单克隆抗体的获得为病毒的检测、试剂盒的研发提供了核心材料。