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目的:研究let-7a过表达对结肠黏液腺癌LS-174T细胞增殖及侵袭性的影响。方法:构建let-7a过表达慢病毒载体并感染结肠黏液腺癌LS-174T细胞,设立空白对照组(A组,不进行病毒转染);转染空病毒组(B组,只含有EGFP,浓度1×107 TU/L);C1转染组(C1组,浓度1×106 TU/L):转染hsa-Let-7a(含let-7a病毒和EGFP);C2转染组(C2组,浓度1×107 TU/L);C3转染组(C3组,浓度1×108 TU/L)。通过倒置荧光显微镜观察各组感染效率;RT-qPCR检测各组细胞中let-7a基因表达水平;MTT法检测各组细胞增殖活力;Transwell侵袭和划痕实验测评估细胞的侵袭和迁移能力;RT-qPCR和Western blot分析TGF-β1 mRNA和蛋白水平的表达。结果:倒置荧光显微镜观察各组细胞48 h绿色荧光表达情况,C3组荧光表达最强,感染效率可达90%以上,与初始病毒浓度成正相关(P<0.05);MTT检测结果显示各组OD值均随时间延长而增高,在第0、第1天,5组OD值差异无统计学意义(P>0.05),第2、第3、第4天,与A组比,C组的OD值增幅明显降低(P<0.05);各组细胞let-7a基因表达水平行RT-qPCR检测结果显示,与A组比,C组let-7a的基因表达水平显著升高,且转染细胞let-7a的表达水平与含let-7a的慢病毒浓度梯度呈正相关(P<0.05),而RT-qPCR及Western blot检测显示let-7a过表达后TGF-β1 mRNA和蛋白水平逐渐降低(P<0.05)。侵袭和划痕实验结果表明,let-7a的过表达降低了LS-174T细胞的侵袭和迁移能力,且与初始病毒浓度成负相关(P<0.05)。结论:Let-7a过表达对LS-174T细胞增殖活力有明显抑制作用,可通过下调TGF-β1含量而抑制细胞的侵袭和转移。 相似文献
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目的:探讨直肠癌组织GST-π、Ki-67的表达及患者体质量指数(BMI)与患者临床生物学特征的相关性及临床意义。方法:收集温州医科大学附属第二医院2010年1月至2013年1月共308例直肠癌患者的临床资料、术后病理及5年生存率。分析BMI及肿瘤指标(GST-π、Ki-67)的表达与患者临床及病理特征的相关性,进一步分析BMI与GST-π、Ki-67表达之间的相关性及临床意义。分析Ki-67高阳性患者5年生存率与BMI的关系。结果:肿瘤组织Ki-67的高表达与TNM分期、组织浸润深度及术后5年生存率低相关(P <0.05)。与正常BMI组相比,消瘦组且Ki-67的表达高阳性患者5年生存率偏低(P <0.05)。GST-π的阳性表达与消瘦、肿瘤位置低、淋巴结转移及较高的TNM分期显著相关(P <0.05)。结论:结合分析BMI与GST-π、Ki-67的表达水平及相关性,对评估肿瘤的恶性度、预后情况起到重要作用。 相似文献
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目的:研究热休克蛋70(HSP70)参与肠道炎症的相关作用机制。方法:将不同慢病毒处理的Caco-2细胞分为HSP70过表达组、HSP70过表达阴性对照组、HSP70低表达组、HSP70低表达阴性对照组和空白对照组。脂多糖(LPS)刺激模拟炎症环境,用Western blotting、逆转录定量聚合酶链反应及ELISA法测定TLR4/MyD88/NF-κB信号通路中各关键蛋白和细胞因子的表达量及含量,并利用EdU比色法测定细胞增殖率。结果:LPS刺激24 h,各组Caco-2细胞中白细胞介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-α的mRNA表达量和蛋白含量较相应未加LPS组均有明显上升(P <0.05);与低表达组相比,HSP70过表达组的IL-1β和TNF-α的mRNA表达量分别为其1.87和1.94倍,蛋白含量分别为其1.77和1.57倍,HSP70、Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)和核因子-κB(NF-κB)蛋白表达量为其1.86、1.96、2.12、1.69倍,mRNA相对表达量为6.05、2.98、3.02、2.46倍,差异均有统计学意义(... 相似文献
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