人TH基因重组腺病毒的构建及生物学活性研究

将人酪氨酸羟化酶cDNA表达盒克隆于质粒型腺病毒载体p△Elsp1A，得到重组质粒pAd－TH。随后用脂质体法将重组质粒pAd－TH和拯救型腺病毒质粒pBHG11一起共转染293细胞，通过体内同源重组生成重组腺病毒AdCMVth，THcDNA重组进入腺病毒E1区并受CMV启动子控制。采用形态学、病毒核酸酶切和PCR／RT－PCR等方法进行鉴定正确。重组腺病毒滴度达到1010pfu／ml。初步结果表明，该重组腺病毒感染MN9D细胞后可使细胞内多巴胺水平增加1倍，显示出明显的TH生物学活性。提示TH重组腺病毒AdCMVth可作为高效的基因转移载体用于帕金森氏病基因治疗。     

二甲双胍抑制高浓度葡萄糖刺激的脂肪分解及机制

目的研究二甲双胍抑制高浓度葡萄糖刺激的脂肪分解及其机制。方法以SD大鼠附睾原代脂肪细胞为研究对象,分为对照A组、对照B组、实验A组和实验B组,每组3个平行管。对照A组予以5 mmol·L^-1葡萄糖,对照B组予以25 mmol·L^-1葡萄糖,实验A组予以5 mmol·L^-1葡萄糖+500μmol·L^-1二甲双胍,实验B组予以25 mmol·L^-1葡萄糖+500μmol·L^-1二甲双胍。细胞孵育24 h后,测定培养基中甘油释放量作为评价脂肪分解的指标,用酶化学法测定脂肪分解酶活性,用Western Blot法检测脂滴包被蛋白表达及其磷酸化水平、脂肪组织三酰甘油水解酶(ATGL)蛋白表达。结果对照B组和实验B组的甘油释放量分别为(1.61±0.08)和(0.50±0.06)μmol·m L^-1packed cell volume,实验B组与对照B组比较明显降低,差异有统计学意义(P<0.001)。这种抑制效应从孵育16 h开始明显并持续到24 h。对照B组和实验B组的脂肪分解酶活性分别为(344.28±65.98)和(200.44±64.25)μmol glycerol·mg protein^-1·h^-1,2组比较,实验B组降低41.78%,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照B组相比,实验B组脂滴包被蛋白磷酸化减少,差异有统计学意义(P<0.01),但2组的ATGL蛋白水平与对照A组相比,差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论二甲双胍通过抑制脂滴包被蛋白磷酸化和脂肪分解酶活性,从而减少高浓度葡萄糖刺激的脂肪分解,这种效应可以减少糖尿病高血糖状态下游离脂肪酸从脂肪组织向血浆释放,进而减轻胰岛素抵抗。     

人GDNF基因的克隆

目的：克隆可表达人胶质细胞源性神经营养因子的基因。方法：从脑胶质细胞瘤患者术后的脑瘤组织中提取总ＲＮＡ，以ＲＴＰＣＲ方法扩增出了一段约５５８ｂｐ的ｃＤＮＡ片段，将这一片段克隆于ｐＵＣ１８载体中，进行全序列分析。结果：证实该研究所克隆的ｃＤＮＡ是编码正确的人ＧＤＮＦ基因。与发表于ＧｅｎｅＢａｎｋ上的序列相比，发现该研究克隆的基因有一段７８ｂｐ的核苷酸序列缺失，但不影响密码子的阅读框。结论：克隆到了编码正确的人ＧＤＮＦ的ｃＤＮＡ全序列，对帕金森病基因治疗的基础研究及临床应用具有重要意义。     

人癌胚抗原cDNA-重组痘苗病毒接种动物的研究

将构建的表达人癌胚抗原（ＣＥＡ）的重组痘苗病毒接种于纯种新西兰兔，在兔血清中测到高水平的ＣＥＡ以及高滴度抗ＣＥＡ抗体，而在兔的非淋巴组织器官中未检测到ＣＥＡ的表达及免疫复合物的沉积，接种后的兔也没有明显的毒副反应，显示痘苗病毒作载体在体内应用是安全可行的。     

GDNF重组腺病毒对损伤运动神经元的保护作用

目的：观察携带胶质细胞源性神经营养因子（ｇｌｉａｌｃｅｌｌｉｎｅｄｅｒｉｖｅｄｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃｆａｃｔｏｒ,ＧＤＮＦ）基因的重组腺病毒（ＡｄＣＭＶｇｄｎｆ）对损伤运动神经元的保护作用。方法：采用培养运动神经元的谷氨酸损伤模型,评价ＧＤＮＦ重组腺病毒对损伤运动神经元的影响,指标是运动神经元计数。结果：（１）建立了运动神经元谷氨酸损伤模型：当培养液中加入０．５ｍｍｏｌ·Ｌ－１的谷氨酸,作用２４～４８ｈ后,运动神经元数目较对照组显著减少（Ｐ＜０．０１）;（２）携带ＧＤＮＦ基因的重组腺病毒可显著减轻谷氨酸导致的运动神经元损伤。结论：腺病毒介导的ＧＤＮＦ表达对损伤的运动神经元具有保护作用。     

北京市医学情报所迎接新世纪

北京市医学情报专职机构最初为北京市卫生局医学科技情报室,由市卫生局委托北京医学院始建于1960年,次年迁至市局内。文革中该机构被撤消,后获恢复。1976年更名为北京市卫生局医学情报室,迁至东单三条甲7号,1986年以医学情报室为基础组建成立北京市医学信息中心,     

CEA分泌性肿瘤基因疫苗的研究

以CEA为靶抗原的基因免疫治疗是近年来肿瘤治疗学研究的突出进展,我们用CEA阳性中国胃癌细胞株构建了胃癌cDNA定向表达基因文库,库容量为1.2×10~6,重组率>99%.从文库随机挑出10个噬菌斑,对其插入片段做PCR扩增,电泳显示插入片段大小介于0.5～5Kb,平均1±500pb,符合一般cDAN文库构建的要求,为今后克隆已知或未知目的基因创造了条件.用国外获得的人CEA真核表达质粒,构建了中国天坛株重组人CEA痘苗病毒(rV-CEA),经细胞学和兔动物接种实验再次证实:中国天坛株痘苗病毒也是一种高效真核表达载体;rV-CEA在活体可高效表达人CEA,可激发机体抗CEA的免疫反应;rV-CEA的应用是安全的.用CEA真核表达质粒(pCEA)免疫兔子,兔血清CEA含量升高,     

苯海索抗血小板聚集作用与细胞外Ca~(2 )浓度的关系

以比浊度法观察苯海索对体外血小板聚集功能的影响。实验结果表明０００１～１０００ｍｍｏｌ／Ｌ苯海索可明显抑制凝血酶诱导的人血小板聚集及ＡＤＰ诱导的大鼠血小板聚集，并呈剂量依赖性。其抗血小板聚集作用随着细胞外Ｃａ２＋增加与降低而呈现减弱和增强现象。结果提示：苯海索的抗血小板聚集作用可能与抗钙作用有关     

苯海索降低兔局部脑缺血脑钙积累和钠、钾、水转移的作用

苯海索２５０μｇ／ｋｇ冲击量给药及２５μｇ／ｋｇ·ｍｉｎ静脉注射治疗兔大脑中动脉闭塞性脑缺血５ｈ，明显降低脑钙积累４０％，降低脑Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｈ２Ｏ转移分别为６１％、６７％、３％。同生理盐水对照组相比，有显著性差异（Ｐ＜０．０５），与钙拮抗剂维拉帕米作用相似。苯海索的保护作用机制可能与其选择性扩张脑血管，增加脑血流量有关，亦与其钙拮抗作用有关，提示苯海索可能具有保护脑缺血作用。