干扰肥胖小鼠心肌组织中CPT1b的表达对活性氧簇代谢的影响

摘 要 目的 研究干扰肥胖小鼠心肌CPT1b的表达对心肌活性氧簇（ROS）的影响。方法 4周龄的雄性C57小鼠，随机分为三组，分别为正常对照组（N-mock）、肥胖对照组（O-mock）及肥胖干预组（O-CPT1b），对肥胖组小鼠进行高脂饮食造肥胖模型。6周龄时，向干预组小鼠心肌注射靶向CPT1b （O-CPT1b）或靶向无关基因（N-mock、O-mock）的重组慢病毒。继续喂养10周后，取小鼠心肌，Western blot检测CPT1b的蛋白表达量；行油红O染色检测心肌组织中性脂质含量；使用冷冻切片染色法及流式细胞术检测心肌细胞中 ROS。结果 RT-PCR 和Western blot结果显示，携带CPT1b基因的短发夹RNA显著下调了O-CPT1b小鼠心肌组织中CPT1b的表达；肥胖引起心肌组织内中性脂质蓄积增多，下调CPT1b的表达增加了心肌内中性脂质的含量；高脂饮食还导致心肌ROS的含量显著增加，而下调CPT1b的表达可以改善甚至逆转这一进程。结论 CPT1b在肥胖小鼠心肌的ROS生成增多中起重要作用，下调小鼠心肌组织的CPT1b表达或许会通过减轻心肌氧化应激而改善肥胖性心脏重构。     

下调CD36在心肌中的表达对肥胖小鼠心肌纤维化和凋亡的影响

目的 采用RNA干扰的方法下调小鼠心肌CD36的表达,研究其对高脂饮食诱导的肥胖小鼠心肌纤维化和心肌细胞凋亡的影响。方法 4周龄的雄性C57BL/6小鼠,随机分为3组,即正常对照(N-mock)组、肥胖对照(O-mock)组及肥胖干预(O-CD36)组,采用高脂饮食诱导肥胖模型;6周龄时,向O-CD36小鼠心肌内注射靶向CD36的慢病毒,对照组小鼠则注射靶向无关基因GFP的慢病毒,以下调相应基因的表达。16周龄时,取小鼠左心室组织,行Masson染色检测心肌纤维化程度;行TUNEL染色检测心肌细胞凋亡率;采用real-time RT-PCR和Western blot法检测心肌组织中与纤维化、凋亡相关基因的mRNA和蛋白表达。结果 RNA干扰使肥胖小鼠心肌组织中CD36的表达下调。组织学染色和分子生物学结果均证实,肥胖小鼠较正常饮食小鼠心肌组织纤维化程度和心肌细胞凋亡率增加;下调CD36的表达在一定程度上抑制了上述病理改变。结论 下调CD36在心肌中的表达可抑制肥胖所导致的心肌纤维化,减少心肌细胞凋亡,是一种潜在的治疗肥胖相关心脏重构的策略。     

下调心肌CD36的表达对肥胖小鼠心肌活性氧簇生成的影响

目的 研究定向下调心肌CD36的表达对高脂饮食诱导的肥胖小鼠心肌组织中活性氧簇（ROS）含量的影响。方法 4周龄的雄性C57小鼠,随机分为正常对照组（N-mock）、肥胖对照组（O-mock）及肥胖干预组（O-CD36）,采用高脂饮食诱导肥胖。6周龄时,向心肌内分别注射靶向CD36（O-CD36）或靶向无关基因（N-mock、O-mock）的重组慢病毒。10周后,取小鼠心室组织检测CD36的mRNA及蛋白表达水平;行油红O染色检测心肌组织内中性脂质含量;并使用冷冻切片染色法及流式细胞术检测心肌细胞内ROS含量。结果 慢病毒介导的RNA干扰显著下调了O-CD36小鼠心肌组织中CD36的表达。肥胖引起心肌组织内中性脂质蓄积,下调心肌CD36的表达显著减少了中性脂质的含量。高脂饮食还导致心肌ROS的含量显著增加,而下调CD36的表达可以改善甚至逆转这一进程。结论 CD36在高脂肪酸代谢所引起的ROS生成增加中起重要作用,定向下调心肌CD36的表达可以减少心肌组织ROS的含量,改善心肌氧化应激。     

下调心肌CPT1b的表达对肥胖小鼠心肌细胞钙调控的影响

目的 研究干扰心肌组织中肉毒碱脂酰转移酶-1b（CPT1b）的表达对高脂饮食诱导的肥胖小鼠心肌细胞钙调控的影响。方法 4周龄的雄性C57小鼠,随机分为正常对照组（N-mock）、肥胖对照组（O-mock）及肥胖干预组（O-CPT1b）,采用高脂饮食诱导肥胖。6周龄时,经心肌分别注射靶向CPT1b（O-CPT1b）或靶向无关基因（N-mock、O-mock）的重组慢病毒,以下调目标基因的表达。10周后,取小鼠左心室组织检测RNA干扰的效率;采用Western blot法检测左心室组织中肌浆网钙泵（SERCA2a）的蛋白表达;并分离单个心室肌细胞,使用活细胞工作站检测心肌细胞钙瞬变。结果 肥胖小鼠心肌组织中CPT1b的表达增加,慢病毒介导的RNA干扰显著下调其表达。肥胖引起心肌细胞SERCA2a的蛋白表达降低及肌质网钙处理能力的下降,下调CPT1b的表达增加了SERCA2a的含量,并改善了钙调控异常。结论 下调心肌组织中CPT1b的表达可改善肥胖所导致的心肌细胞钙调控异常。     

一种不依赖呼吸机的小鼠心肌内注射技术的建立

目的建立一种简洁高效、不依赖辅助通气的小鼠心肌内注射的实验方法,并浅析操作细节及技巧。方法 44只6周龄的雄性C57BL/6J小鼠,随机分为实验组(22只)和对照组(22只)。麻醉后于左侧第4肋间隙挤出心脏,向左心室壁内注射靶向CPT-1b(实验组)或靶向无关基因(对照组)的重组慢病毒。10周后,取心脏及后肢骨骼肌,行RT-PCR及Western blot法,检测不同组织中CPT-1b的mRNA及蛋白表达水平。结果至16周龄,小鼠存活率90.9%。实验组小鼠心肌中CPT-1b的表达显著低于对照组,而骨骼肌中CPT-1b的表达在两组间没有统计学差异。结论心肌内注射技术所介导的RNA干扰高效、特异地下调了心肌组织中目标基因的表达,该技术是一种较好的将外源物质定向导入心肌组织的方法。     

翻转课堂联合案例教学法在心律失常教学中应用的探讨

近年来,心脏电生理技术的发展极大的丰富了心电生理知识,心电图作为基本检查可用于对各种心律失常疾病的检查.心律失常的学习对于一名临床医生十分重要,其教学在医学生教学中也是重中之重.心律失常分类繁多,其教学有其自身特点,难度较大,理论课教学过程中,教师上课难以讲透,学生学习难以理解,在将理论联系实践的过程中,更是难上加难.在心律失常教学过程中,应不断结合教学经验,提高心律失常教学质量.本文旨在探讨在心律失常教学期间,以教学大纲为中心、以心律失常临床案例为工具,推行翻转课堂和案例教学法相结合教学模式,提高学生在学习心律失常过程中的主观能动性,并将心律失常理论联系实际病例,增加学习的趣味性,以期有效提高教师的授课水平,提高课堂教学质量和效果,培养更为优秀的临床医学人才.     

夜间型特发性室性期前收缩的自主神经机制研究

目的 对夜间发作增多的特发性室性期前收缩进行自主神经指标分析,探讨特发性室性期前收缩与心脏自主神经调控的关系。方法 本研究对特发性室性期前收缩患者进行了长程心电图检查,计算每小时室性期前收缩频度,将夜间（20：00~8：00时）每小时室性期前收缩频度显著大于白昼（8：00~20：00时）每小时室性期前收缩频度者定义为夜间型室性期前收缩。分析夜间型室性期前收缩的频度与心率的相关性以及典型室性期前收缩事件发生前30min内的心率变异性指标变化。结果 共纳入符合条件的室性期前收缩患者19例,每例患者的室性期前收缩频度与每小时平均心率均呈显著负相关。共分析典型室性期前收缩事件8阵,在室性期前收缩事件发生前短时间内存在心率的逐渐减慢,但心率变异性指标的变化差异无统计学意义（P>0.05）。结论 部分特发性室性期前收缩在夜间发作频度显著增加,室性期前收缩的发作频度与心率呈负相关,在室性期前收缩发生前,可观察到显著的心率减慢。该现象对室性期前收缩的治疗可能具有一定的指导意义。     

干扰CD36的表达对高脂饮食诱导的肥胖小鼠心肌细胞钙调控的影响

目的 研究干扰心肌组织中脂肪酸转位酶CD36的表达对高脂饮食诱导的肥胖小鼠心肌细胞钙调控的影响。方法 4周龄的雄性C57小鼠,随机分为正常对照组（N-mock）、肥胖对照组（O-mock）及肥胖干预组（O-CD36）,采用高脂饮食诱导肥胖。6周龄时,经心肌注射靶向CD36（O-CD36）或靶向无关基因（N-mock、O-mock）的重组慢病毒,以下调心肌组织中目标基因的表达。16周龄时,取小鼠左心室组织,检测CD36和肌质网钙泵（SERCA2a）的mRNA和蛋白表达;并分离单个心室肌细胞,使用活细胞工作站检测心肌细胞钙瞬变。结果 肥胖小鼠心肌组织中CD36的表达较正常小鼠无显著改变,慢病毒介导的RNA干扰显著下调了CD36的表达。肥胖引起心肌细胞SERCA2a的蛋白表达降低及肌质网钙处理能力的下降;下调CD36的表达增加了SERCA2a的含量,并改善了钙调控异常。结论 下调心肌组织中CD36的表达可改善肥胖所引起的心肌细胞钙调控异常。     

甘草多糖抗骨关节炎作用及其机制研究

目的：我国60岁以上的老年人骨关节炎（osteoarthritis,OA）患病率高达50％。OA发病机制十分复杂,生物化学上表现为软骨细胞和基质中蛋白多糖丢失、胶原基质破坏;软骨细胞氧化损伤是其重要的发病机制之一。目前临床上尚缺乏高效、价廉的抗骨关节炎药物。甘草为中医骨关节炎治疗方剂中的常用单味药,甘草多糖（glycyrrhiza polysaccharide,GP）是其主要成分之一。本研究在细胞分子水平上初步探讨了自制GP的抗OA疗效、作用机制和有效成分。方法及结果：甘草经过脱脂、水提、醇沉、Sevag法除蛋白、干燥等过程得到GP;用DEAESephadex A-50分离,苯酚硫酸法检测,得到三个组分（GP-1、GP-2和GP．3）。培养大鼠原代软骨细胞,二甲基亚甲基蓝（DMMB）染色法测定培养基中所含硫酸化糖胺聚糖（GAGs）含量,发现GP能浓度依赖性的促进GAGs释放;