Ang2基因RNA干扰慢病毒表达载体的构建与鉴定

目的构建促血管生成素(Ang)2基因的RNAi慢病毒表达载体,并鉴定其正确性。方法将经XbaⅠ酶切电泳鉴定的pSilencer 1.0-U6-Ang2-siRNA重组质粒与经XbaⅠ酶切电泳鉴定的嗜中性多形核白细胞-绿色荧光蛋白转移质粒(pNL-EGFP)载体连接,产生pNL-EGFP-U6-Ang2-siR-NA慢病毒转移质粒,再以pNL-EGFP-U6-Ang2-siRNA慢病毒转移质粒、水疱性口炎病毒G蛋白包膜质粒和包装质粒三质粒共转染293T细胞,产生慢病毒,收集病毒上清液并测定病毒滴度。结果成功构建pNL-EGFP-U6-Ang2-siRNA慢病毒转移质粒2条,通过XbaⅠ酶切电泳及测序鉴定,证明Ang2-siRNA核苷酸序列插入的正确性。利用三质粒慢病毒包装系统生产EGFP-Ang2-siRNA病毒,收集病毒上清,并测得病毒滴度为9×103/μL。结论成功构建了Ang2基因的RNAi慢病毒表达载体,为下一步进行干扰体内外恶性黑素瘤Ang2的表达奠定基础。     

MEBT/MEBO联合ADSC治疗慢性难愈合创面的疗效分析

【摘要】 目的 分析烧伤创疡再生医疗技术 (MEBT/ MEBO) 联合脂肪干细胞 (ADSC) 治疗慢性难愈合创面的临床疗效。方法 选取 2017 年 1 月至 2020 年 1 月龙岩市第一医院收治的 61 例慢性难愈合创面患者作为研究对象, 并按照随机数表法将其随机分为研究组 ( 31 例) 与对照组 ( 30 例), 研究组患者局部创面采用MEBT/ MEBO联合 ADSC 治疗, 对照组患者局部创面采用 MEBT/ MEBO 治疗, 对比两组患者临床疗效,创面组织 中血管内皮生长因子 (VEGF) 及碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF) 表达水平, 创面愈合时间以及愈后皮肤瘢痕增生情况。结果 治疗 4 周后, 研究组患者中显效 17 例、有效 11 例、无效 3 例, 明显优于对照组患者中显效 10 例、有效 11 例、无效 9 例 ( 2.740,P = 0.008）两组患者创面组织中 VEGF、bFGF 表达水平均明显升高, 且研究组患者明显高于对照组 (t = 3.431、 2.138,P = 0.001、 0.036）。最终两组患者创面均完全愈合, 研究组患者创面愈合时间明显短于对照组 (t = 3.405,P = 0.001）,愈后皮肤温哥华瘢痕量表 (VSS) 评分明显低于对照组 (t = 2.740,P = 0.008）。结论 MEBT/ MEBO 联合 ADSC 可显著提高慢性难愈合创面组织中 VEGF、bFGF 表达水平, 缩短创面愈合时间, 减轻愈后皮肤瘢痕增生, 提高临床疗效。     

Tie2基因RNA干扰慢病毒表达载体的构建与鉴定

目的构建并鉴定Tie2基因的RNA干扰慢病毒表达载体。方法先构建pNL-EGFP-U6-Tie2-siRNA慢病毒转移质粒,通过XbaⅠ酶切电泳及测序鉴定,再以pNL-EGFP-U6-Tie2-siRNA慢病毒转移质粒,pVSVG包膜质粒和pHelper包装质粒三质粒共转染293T细胞,产生慢病毒,收集病毒上清液并测定病毒滴度。结果成功构建pNL-EGFP-U6-Tie2-siRNA慢病毒转移质粒2条,通过XbaⅠ酶切及测序鉴定,Tie2-siRNA核苷酸序列插入正确,利用三质粒慢病毒包装系统生产EGFP-Tie2-siRNA病毒,收集病毒上清,并测得病毒滴度为9×103/μL。结论成功构建了Tie2基因的RNA干扰慢病毒表达载体。