实时荧光定量PCR检测小鼠脑组织中3-羟基丁酸受体基因PUMA-G的转录表达

[摘要] 目的 检测小鼠海马、下丘脑、额叶皮质和颞叶皮质组织中的3-羟基丁酸和烟酸受体基因PUMA-G（protein upregulated in macrophages by IFN-g）的转录表达。方法 采用试剂盒法提取脑组织总RNA,分光光度法测定RNA的含量和纯度,变性凝胶电泳检测RNA的完整性,实时荧光定量PCR技术检测PUMA-G的转录表达。结果 与阳性对照组（心肌组织）一样,PUMA-G在小鼠海马、下丘脑、额叶皮质和颞叶皮质组织中均有转录表达,其循环阈值（cycle threshold, Ct）低于40个循环数。但是各种脑组织中的转录表达水平不同,其中下丘脑的表达量最高与阳性对照组（35.15±0.31）相似,其Ct值为35.39±0.57,而颞叶皮质中的表达最低,其Ct值为38.67±0.90,海马和额叶皮质的Ct值分别为37.59±0.60和37.75±0.51。结论 通过实时荧光定量PCR技术检测到PUMA-G在小鼠脑组织中的转录表达。     

3-羟基丁酸衍生物对PC12细胞凋亡的保护作用

目的：观察3-羟基丁酸甲酯和3-羟基丁酸乙酯对PC12缺血清诱导凋亡细胞的保护作用。方法化学法降解聚羟基丁酸酯制备3-羟基丁酸甲酯和3-羟基丁酸乙酯。培养PC12细胞,以含血清培养组细胞为阴性对照组,缺血清培养组细胞为阳性对照组,以在缺血清条件下添加不同浓度3-羟基丁酸甲酯或3-羟基丁酸乙酯细胞为样品组,通过形态学观察法、噻唑蓝（ MTT）法检测各组细胞形态及活性变化。结果与阴性对照组比较,阳性对照组细胞出现大量凋亡,形态变小变细,活性降低。样品处理组细胞活性不同程度提高,低浓度（0.01和0.001 mg·mL-1）3-羟基丁酸甲酯和3-羟基丁酸乙酯对凋亡细胞有保护作用,浓度为1 mg·mL-1时效果最好。结论通过化学法能够制备高纯度3-羟基丁酸甲酯和3-羟基丁酸乙酯,上述两种样品对缺血清诱导凋亡的PC12细胞有保护作用。     

食管癌患者血清中NGAL蛋白含量检测及其临床意义

目的:探讨食管癌患者血清中NGAL蛋白的含量及其临床意义。方法:双抗体夹心ELISA法检测97例食管癌患者和85名正常人血清中NGAL蛋白的含量。联合Western blot和免疫荧光技术检测5种食管癌细胞系表达NGAL蛋白的异质性情况。结果:97例食管癌患者血清中NGAL蛋白含量为(5.94±2.86)μg/L,85名正常人为(4.94±2.58)μg/L,差异有统计学意义,P=0.015。实验数据散点分布结果表明,血清NGAL蛋白含量最高值亚群属于食管癌患者,最低值亚群属于正常人;而多数数据相互交叉。Western blot和免疫荧光检测结果一致,表明SHEEC、EC18和EC8712与EC109和EC171相比,前3种食管癌细胞系表达NGAL蛋白的水平明显高,提示食管癌细胞表达NGAL蛋白异质性明显。结论:食管癌患者血清中NGAL蛋白的含量明显高于正常人。因为异质性所致,通过检测血清中NGAL蛋白含量来判定食管癌的发生发展,其临床意义是有限的。     

番石榴黄酮提取液对HeLa细胞及Ec109细胞生长的影响

目的研究番石榴黄酮提取液对HeLa细胞和Ec109细胞生长的抑制作用。方法以番石榴叶和果实的粗黄酮提取液为受试液,采用体外细胞培养法,MTT法检测其对HeLa及Ec109细胞的生长抑制率。结果番石榴叶或果实的粗水溶性黄酮液和粗醇溶性黄酮液,均能较强抑制两种癌细胞生长。5.000 mg/L的番石榴叶粗水溶性黄酮抑制HeLa细胞生长作用最大,抑制率达70.84%;0.100 mg/L的叶粗醇溶性黄酮抑制Ec109细胞生长作用最大,抑制率达69.95%。结论番石榴粗黄酮液在体外可显著抑制HeLa细胞和Ec109细胞的生长。     

FⅫ在促凝表面的接触活化动力学研究

目的为了探索病理性凝血血浆间相互作用的微观机制,设计内源性凝血接触激活实验,研究促凝性表面诱发的内源性凝血的条件以及诱发的主要因素。方法本文采用了干净的玻璃珠和硅烷化玻璃珠,从而得到亲水性能不同的促凝颗粒表面,来确定因子Ⅶ的激活与亲水性的关系;利用缓冲液PBS冲洗促凝剂表面,再与乏血小板血浆反应,对比各凝血时间的变化,研究血浆蛋白对凝血时间的影响。结果 (1)在亲水表面FⅫ-FⅫa的激活表现出特异性,在疏水表面的活化反应相对明显减弱(P0.0001),FⅫ与疏水促凝剂接触激活获得更多FⅫa;(2)在疏水表面FⅫ的激活率和产物都是显著衰减,但是活化FⅫ与疏水表面结合紧密(P0.0001),与蛋白质和疏水表面黏附更紧密的结论一致;(3)FⅫ与500mm~2促凝表面在孵育30min时凝血时间和FⅫ的活化产物更为稳定。结论促凝剂表面能量依赖"催化潜力"促使FⅫ-FⅫa的激活;凝血表面积相同的情况下,PPP血浆内FⅫ的活化率及活化量在疏水促凝剂表面明显低于亲水性表面;与蛋白质和疏水表面更易吸附活化相反,在含疏水促凝剂表面的全血浆中FⅫ的活化明显比亲水性的慢,从而产生了一种表面能依赖的催化潜力的外观。     

苦瓜MAP30基因功能性片段的克隆和表达

背景与目的:MAP30是一种具有抗肿瘤、抗HIV和抗病毒等功能的蛋白.通过克隆和表达该蛋白的核心片段,用于进一步研究基因功能和结构域之间的关系.材料与方法:设计了两对特异性的引物,通过PCR技术从苦瓜总DNA中分别扩增出两段含有成熟MAP30蛋白基因的功能性片段T8-S194和T8N263,然后将目标基因克隆到原核表达载体pET-28a上,构建成带有C端6His-tag的融合表达载体,经测序鉴定后用CaCl2介导的化学转化法转化到E.coli RosettaTM(DE3)pLysS中.利用PCR筛选出阳性克隆,经IPTG诱导工程菌表达出重组蛋白.通过Western blot对重组蛋白进行分析. 结果:含T8-S194和T8-N286基因片段的两个表达载体构建成功,它们的表达重组蛋白能与兔抗His-tag多克隆抗体发生特异性反应.结论:构建的两个含目的基因的表达载体均能在E.coli RosettaTM(DE3)pLysS中表达出预期的重组蛋白,为进一步研究这两个重组蛋白打下了基础.